1、Protein chemistryProtein chemistry第一单元第一单元 蛋白质化学蛋白质化学(1414学时）学时）第三章第三章 氨基酸氨基酸第四章第四章 蛋白质的共价结构蛋白质的共价结构第五章第五章 蛋白质的三维结构蛋白质的三维结构第六章第六章 蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系第七章第七章 蛋白质的分离、纯化和表征蛋白质的分离、纯化和表征第第3 3章章 氨基酸氨基酸(Amino acids)一、一、氨基酸氨基酸-蛋白质的构件分子蛋白质的构件分子 二、二、氨基酸的分类氨基酸的分类 三、三、氨基酸的酸碱化学氨基酸的酸碱化学 四、四、氨基酸的化学反应氨基酸的化学反应 五、五
2、、氨基酸的光学活性和光谱性质氨基酸的光学活性和光谱性质 六、六、氨基酸混合物的分析分离氨基酸混合物的分析分离一一、氨基酸氨基酸-蛋白质的构件分子蛋白质的构件分子 (一一)蛋白质的水解蛋白质的水解 (二二)-氨基酸的一般结构氨基酸的一般结构蛋白质水解的主要方法：蛋白质水解的主要方法：（1 1）酸水解）酸水解 （2 2）碱水解）碱水解 （3 3）酶水解）酶水解(一一)蛋白质的水解蛋白质的水解蛋白质水解生成蛋白质水解生成2020种游离的氨基酸种游离的氨基酸（1 1）酸水解 常用常用H H2 2SOSO4 4或或HClHCl进行水解。进行水解。l方法：方法：一般用一般用6mol/L HCl6mol/L
3、 HCl，4mol/L H4mol/L H2 2SOSO4 4，回流煮沸回流煮沸20h20h左右可使蛋左右可使蛋白质完全水解。白质完全水解。l优点：优点：不引起消旋作用，得到的是不引起消旋作用，得到的是L-L-氨基酸。氨基酸。l缺点：缺点：色氨酸完全被沸酸所破坏。羟基氨基酸有一小部分被分解，天色氨酸完全被沸酸所破坏。羟基氨基酸有一小部分被分解，天冬酰胺，谷氨酰胺的酰胺基被水解下来。冬酰胺，谷氨酰胺的酰胺基被水解下来。（2 2）碱水解l方法：方法：一般与一般与5mol/L NaOH5mol/L NaOH共煮共煮10-20h10-20h，即可使蛋白质完全，即可使蛋白质完全水解。水解。l优点：优点：
4、色氨酸在碱性条件下稳定。色氨酸在碱性条件下稳定。l缺点：缺点：水解过程中多数氨基酸遭到不同程度的破坏，并且产水解过程中多数氨基酸遭到不同程度的破坏，并且产生消旋现象，所得的产物是生消旋现象，所得的产物是D-D-和和L-L-氨基酸的混合物，称消氨基酸的混合物，称消旋物。此外，精氨酸脱氨，生成鸟氨酸和尿素。旋物。此外，精氨酸脱氨，生成鸟氨酸和尿素。（3 3）酶水解l优点：优点：不产生消旋现象，也不破坏氨基酸。不产生消旋现象，也不破坏氨基酸。l缺点：缺点：水解不彻底，需几种酶协调作用才能彻底水解蛋白质。水解不彻底，需几种酶协调作用才能彻底水解蛋白质。l常用蛋白酶：常用蛋白酶：胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或
5、糜蛋白酶及胃蛋白酶等。胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或糜蛋白酶及胃蛋白酶等。RCCOHOHNH2(二)-氨基酸的一般结构 -carbonl Proteins are biological polymers made up of many -amino-amino acid molecules that contain both an amine group and a carboxylic acid group中文根据你所学的化学知根据你所学的化学知识，从下面的氨基酸识，从下面的氨基酸结构通式可看出氨基结构通式可看出氨基酸具有哪些性质？酸具有哪些性质？(二)-氨基酸的一般结构RCCOHOHNH2 -碳
6、碳l 蛋白质是由许多氨基酸分子组成的生物多聚体或蛋白质是由许多氨基酸分子组成的生物多聚体或者是生物大分子。这些氨基酸都有一个共同特点，含一者是生物大分子。这些氨基酸都有一个共同特点，含一个氨基和一个羧基，而且是个氨基和一个羧基，而且是-氨基，所以称氨基，所以称-氨基酸。氨基酸。英文二、氨基酸的分类二、氨基酸的分类l (一一)常见的蛋白质氨基酸常见的蛋白质氨基酸l (二二)不常见的蛋白质氨基酸不常见的蛋白质氨基酸l (三三)非蛋白质氨基酸非蛋白质氨基酸氨基酸有两种分类的方法氨基酸有两种分类的方法：（1 1）按侧链）按侧链R R基的结构基的结构（2 2）按侧链）按侧链R R基的极性基的极性(一一)
7、常见的蛋白质氨基酸常见的蛋白质氨基酸（1）按侧链按侧链R基的结构分类基的结构分类Aa脂肪族氨基酸脂肪族氨基酸芳香族氨基酸芳香族氨基酸:杂环氨基酸杂环氨基酸一氨基一羧基氨基酸（中性氨基酸）一氨基一羧基氨基酸（中性氨基酸）一氨基二羧基氨基酸（酸性氨基酸）一氨基二羧基氨基酸（酸性氨基酸）及其酰胺及其酰胺 :二氨基一羧基氨基酸（碱性氨基酸）二氨基一羧基氨基酸（碱性氨基酸）Gly、Val、Leu、Ile、SerThr、Cys、MetAsp、Glu、Asn、GlnArg、LysPhe、Tyr His、Trp、Pro(9)(4)(2)(2)(3)Ala、甘氨酸（甘）甘氨酸（甘）Glycine Gly GH
8、CH COO-NH3+R丙氨酸丙氨酸（丙）（丙）Alanine Ala ANH3+CH 3 CH COO-NH3+缬氨酸缬氨酸(缬缬)Valine Val VNH3+CH 3 CH CH COO-NH3+CH 3亮氨酸亮氨酸(亮亮)Leucine Leu LCH 3 CH CH 2 CH COO-NH3+CH 3异亮氨酸异亮氨酸(异亮异亮)Isoleucine Ile INH3+CH 3 CH2 CH CH COO-NH3+CH 3丝氨酸丝氨酸(丝丝)Serine Ser SNH3+HO CH 2 CH COO-NH3+苏氨酸苏氨酸(苏苏)Threonine Thr TNH3+CH3 CH C
9、H COO-NH3+OH半胱氨酸（半胱）半胱氨酸（半胱）Cysteine Cys CNH3+HS CH 2 CH COO-NH3+胱氨酸的一半胱氨酸的一半甲硫氨酸（蛋氨酸）甲硫氨酸（蛋氨酸）Methionine Met MNH3+CH3 S CH2 CH2 CH COO-NH3+天冬氨酸天冬氨酸Aspartate Asp DNH3+-OOC CH2 CH COO-NH3+谷氨酸谷氨酸Glutamate Glu ENH3+-OOC CH2 CH2 CH COO-NH3+天冬酰胺天冬酰胺Asparagine Asn NNH3+NH2 C CH2 CH COO-NH3+O谷氨酰胺谷氨酰胺Glutam
10、ine Gln QNH3+NH2 C CH2 CH2 CH COO-NH3+O精氨酸精氨酸(精精)Arginine Arg RNH3+NH2 C-NH-CH2-CH2 -CH2-CH-COO-NH3+NH2胍基 赖氨酸赖氨酸Lysine Lys KNH3+NH3-CH2-CH2 -CH2-CH2-CH-COO-NH3+苯丙氨酸苯丙氨酸Phenylalanine Phe FNH3+CH 2 CH COO-NH3+酪氨酸酪氨酸Tyrosine Tyr YNH3+CH 2 CH COO-NH3+HO 组氨酸组氨酸Histidine His HNH3+CH 2 CH COO-NH3+HCC NHCHH
11、N+咪唑基色氨酸色氨酸Tryptophan Try W （Trp）NH3+CH 2 CH COO-NH3+NH吲哚基苯并吡咯环苯并吡咯环脯氨酸脯氨酸Proline Pro PCH2-CH2-CH2-CH-COO-H H NH2+脯氨酸脯氨酸Proline Pro PCH2-CH2-CH2-CH-COO-H H NH2+CHCOO-NH2CH2H2CH2C+（2 2）按侧链）按侧链R R基的极性分基的极性分AaAa极性氨基酸极性氨基酸非极性氨基酸非极性氨基酸 Phe、Ala、Val、Leu、Ile、Met、Trp、Pro不带电荷的极性氨基酸不带电荷的极性氨基酸Gly、Ser、Thr、Cys、Ty
12、r、Asn、Gln带正电荷的极性氨基酸带正电荷的极性氨基酸Arg、Lys、His带负电荷的极性氨基酸带负电荷的极性氨基酸Asp、Glu、(7)（3）(2)(8)三三、氨基酸的酸碱化学氨基酸的酸碱化学 ()氨基酸的兼性离子形式氨基酸的兼性离子形式 (二二)氨基酸的解离氨基酸的解离 (三三)氨基酸的等电点氨基酸的等电点 (四四)氨基酸的甲醛滴定氨基酸的甲醛滴定 （五）氨基酸的物理性质小结（五）氨基酸的物理性质小结(一)氨基酸的兼性离子形式 氨基酸的氨基酸的-C-C上连接了一个羧基和一个氨基，在上连接了一个羧基和一个氨基，在中性水溶液中，羧基就会放出质子，而氨基接受质子，这样中性水溶液中，羧基就会放
13、出质子，而氨基接受质子，这样就使一个中性形式的氨基酸分子变成了带正、负电荷相等的就使一个中性形式的氨基酸分子变成了带正、负电荷相等的两性离子两性离子.见下图见下图CRCOOHHH2NCRCOO-HH3N+中性分子两性离子(二)氨基酸的解离氨基酸在水中的两性离子既能像酸一样放出质子。氨基酸在水中的两性离子既能像酸一样放出质子。CRHH2NCRCOO-H+H+H3N+COO-作为酸作为酸也能像碱一样接受质子也能像碱一样接受质子氨基酸具有酸碱性质，是一类两性电解质。氨基酸具有酸碱性质，是一类两性电解质。CRCOOHCRCOO-HH3N+作为碱作为碱H3N+H+H+(三)氨基酸的等电点 向氨基酸两性离
14、子溶液中加酸，两性离子的向氨基酸两性离子溶液中加酸，两性离子的COOCOO-就接受就接受H H+，氨基酸变为正离子，在电场中向负极移动。氨基酸变为正离子，在电场中向负极移动。向氨基酸两性离子溶液中加碱，两性离子的向氨基酸两性离子溶液中加碱，两性离子的-NH-NH3 3+就放出就放出H H+，氨基酸变为负离子，在电场中向正极移动。氨基酸变为负离子，在电场中向正极移动。这里我们总可以找到某一个这里我们总可以找到某一个pHpH值使值使氨基酸所带的净电荷氨基酸所带的净电荷为为“零零”，在电场中不移动，这时溶液的，在电场中不移动，这时溶液的pHpH值就是该氨基酸值就是该氨基酸的等电点，的等电点，isoe
15、lectric point isoelectric point 以以pIpI 表示表示。如图所示如图所示0.10.050.050.1002468101214pK1=2.34pK2=9.60pI=5.97pH加入的加入的H+mol数数加入的加入的OH-mol数数CH2COOH H3N+(Gly+)COO-CH2H3N+COO-CH2H2N(Gly)(Gly-)Gly+=GlyGly =Gly-甘氨酸的滴定曲线甘氨酸的滴定曲线CRCOOHHH3N+正离子正离子两性离子两性离子+OH-+H+CRHH3N+COO-CRHH2NCOO-+OH-+H+负离子负离子AaAa+Aa_实验证明，在实验证明，在p
16、IpI时氨基酸主要以两性离子形式时氨基酸主要以两性离子形式存在，但也有少量数量相等的正负离子，还有极少存在，但也有少量数量相等的正负离子，还有极少量中性分子，每一种氨基酸都有各自的等电点。量中性分子，每一种氨基酸都有各自的等电点。氨基酸的氨基酸的pIpI可由实验测定，也可根据氨基酸羧可由实验测定，也可根据氨基酸羧基和氨基的基和氨基的pKpK值（即值（即解离常数的负对数解离常数的负对数）来确定，）来确定，pKpK的编号通常是从酸性最强基团的解离开始，分别的编号通常是从酸性最强基团的解离开始，分别用用pKpK1 1，pKpK2 2表示表示.一氨基一羧基氨基酸，如一氨基一羧基氨基酸，如丙氨酸丙氨酸：
17、pK1（-COOH）=2.34，pK2（-NH3+）=9.69pI=(pK1+pK2)/2氨基酸的两性解离：氨基酸的两性解离：GlyH+Gly+GlyH+Gly以甘氨酸为例：以甘氨酸为例：pK1=2.34 pK2=9.60 pI=5.97阳离子阳离子 两性离子两性离子 阴离子阴离子GlyGlyH3N-CH2-COOHGly+GlyGlyH+Gly+GlyH+GlyGlyH+Gly+GlyGlyH+Gly+GlyGlyH+GlyH+pH=pI=(pK1+pK2)/2 从左向右是用从左向右是用NaOHNaOH滴定滴定的曲线，溶液的的曲线，溶液的pHpH由小到大由小到大逐渐升高；从右向左是用盐逐渐升
18、高；从右向左是用盐酸滴定的曲线，溶液的酸滴定的曲线，溶液的pHpH由由大到小逐渐降低。曲线中从大到小逐渐降低。曲线中从左向右第一个拐点是氨基酸左向右第一个拐点是氨基酸羧基解离羧基解离50%50%的状态，第二个的状态，第二个拐点是氨基酸的等电点，第拐点是氨基酸的等电点，第三个拐点是氨基酸氨基解离三个拐点是氨基酸氨基解离50%50%的状态的状态。甘氨酸的酸碱滴定曲线甘氨酸的酸碱滴定曲线一氨基二羧基氨基酸一氨基二羧基氨基酸,如如天冬氨酸天冬氨酸，在不同在不同pHpH值时的解离情况如下图所示值时的解离情况如下图所示:pI=(pK1+pK2)/2=1.88+3.65=2.77二氨基一羧基氨基酸二氨基一羧
19、基氨基酸,如如赖氨酸赖氨酸，在不同在不同PHPH值时的解离情况如图所示值时的解离情况如图所示 pI=(pK2+pK3)/2=8.95+10.53=9.74 综上所述，综上所述，各种氨基酸的等电点为两性离子两侧两个各种氨基酸的等电点为两性离子两侧两个pKpK的平均值的平均值。由于各种氨基酸都有特定的等电点，因此当溶液的由于各种氨基酸都有特定的等电点，因此当溶液的pHpH值低于某氨基酸的等电点时，则该氨基酸带正电荷，在电值低于某氨基酸的等电点时，则该氨基酸带正电荷，在电场中向负极移动。场中向负极移动。若溶液的若溶液的pHpH值高于等电点时，则该氨基酸带负电荷，值高于等电点时，则该氨基酸带负电荷，在
20、电场中向正极移动。在电场中向正极移动。当溶液的当溶液的pHpH等于等电点时，氨基酸所带净电荷为零，等于等电点时，氨基酸所带净电荷为零，在电场中不移动。在电场中不移动。因此对一个含多种氨基酸的溶液来讲，因此对一个含多种氨基酸的溶液来讲，在某在某一一pHpH条件下，各种氨基酸所带电荷各不相同，条件下，各种氨基酸所带电荷各不相同，利用这一利用这一性质可用电泳法、离子交换层析法等分离或制备氨基酸。性质可用电泳法、离子交换层析法等分离或制备氨基酸。另外另外当氨基酸处于等电点时，由于静电引力的作当氨基酸处于等电点时，由于静电引力的作用，氨基酸的溶解度最小，容易沉淀，利用这一性质可用，氨基酸的溶解度最小，容
21、易沉淀，利用这一性质可以分离制备氨基酸以分离制备氨基酸。(四)氨基酸的甲醛滴定 由于氨基酸具有酸、碱两性，不能直接用酸碱进行滴由于氨基酸具有酸、碱两性，不能直接用酸碱进行滴定，因为氨基酸的酸、碱滴定的等电点定，因为氨基酸的酸、碱滴定的等电点pHpH或过高或过低，或过高或过低，没有适当的指示剂可被选用。没有适当的指示剂可被选用。而加入甲醛后，降低了氨基的碱性，因而加入甲醛后，降低了氨基的碱性，因 而可以用而可以用NaOHNaOH直接滴定，选用酚酞作指示剂。直接滴定，选用酚酞作指示剂。（图）（图）用于测定氨基酸含量及蛋白质水解程度用于测定氨基酸含量及蛋白质水解程度0.10.050.050.1002
22、468101214pK1=2.34pK2=9.60pI=5.97pH加入的加入的H+mol数数加入的加入的OH-mol数数CH2COOH H3N+(Gly+)COO-CH2H3N+COO-CH2H2N(Gly)(Gly-)Gly+=GlyGly =Gly-甘氨酸的滴定曲线甘氨酸的滴定曲线氨基酸的甲醛滴定氨基酸的甲醛滴定0.10.050.050.1002468101214ACBpK1=2.34pK2=9.60pK2 7加有甲醛加有甲醛无甲醛无甲醛PH加入的H+mol数加入的OH-mol数加甲醛和不加甲醛的甘氨酸滴定曲线加甲醛和不加甲醛的甘氨酸滴定曲线（五）（五）氨基酸的物理性质（补充）（补充）1
23、 1、-氨基酸为无色晶体。氨基酸为无色晶体。2 2、熔点极高，一般在熔点极高，一般在200200以上。以上。3 3、除除GlyGly外，都有旋光性（外，都有旋光性（D D、L L构型）。构型）。4 4、各种氨基酸在水中的溶解度差别很大，并能、各种氨基酸在水中的溶解度差别很大，并能溶于极性溶剂（溶于稀酸，溶于稀碱），不溶溶于极性溶剂（溶于稀酸，溶于稀碱），不溶于有机溶剂于有机溶剂 。四、氨基酸的化学反应 (一一)-)-氨基参加的反应氨基参加的反应 (二二)-)-羧基参加的反应羧基参加的反应 (三三)-)-氨基和氨基和-羧基共同参加的反应羧基共同参加的反应 (四四)侧链侧链R R基参加的反应基参加
24、的反应(一)-氨基参加的反应l烃基化反应烃基化反应（P P136136)-与与2 2，4-4-二硝基氟苯（二硝基氟苯（DNFBDNFB）反应）反应可用于鉴定多肽链的可用于鉴定多肽链的N N端氨基酸端氨基酸（黄色）（黄色）蛋白质多肽链结构蛋白质多肽链结构胰岛素胰岛素(一一)-氨基参加的反应烃基化反应烃基化反应 (P(P137137)-与异硫氰酸苯酯与异硫氰酸苯酯(PITC)的反应的反应可用于鉴定多肽或蛋白质的可用于鉴定多肽或蛋白质的N N端氨基酸端氨基酸(一)-氨基参加的反应l与荧光胺反应与荧光胺反应or 440nm for proline(三三)-氨基和氨基和-羧基共同参加的反应羧基共同参加的
25、反应 与茚三酮的反应：与茚三酮的反应：凡含有凡含有-NH-NH2 2的氨基酸与茚三酮反应可生成的氨基酸与茚三酮反应可生成蓝紫色化蓝紫色化合物合物，反应十分灵敏，几个微克氨基酸就能显色。根据反，反应十分灵敏，几个微克氨基酸就能显色。根据反应所生成的应所生成的蓝紫色蓝紫色的深浅，在的深浅，在570nm570nm比色可知氨基酸的含比色可知氨基酸的含量。多肽或蛋白质也能与茚三酮反应，但肽越大，灵敏度量。多肽或蛋白质也能与茚三酮反应，但肽越大，灵敏度也越差。也越差。如如图图所示所示，脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应，则脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应，则生成生成黄色产物黄色产物，光吸收波长在，光吸收波长在440
26、nm440nm。氨基酸的其它性质氨基酸的其它性质如如表所示表所示。(四)侧链R基参加的反应l与与5，5-双硫基双硫基-双双（2-硝基苯甲酸硝基苯甲酸）反应反应（Ellman反应反应）见见P142 反应中反应中1 1分子的半胱氨酸引起分子的半胱氨酸引起1 1分子的分子的硫代硝基苯甲酸硫代硝基苯甲酸的的释放。它在释放。它在pH8.0pH8.0时时,在在412nm412nm波长处有强烈的光吸收波长处有强烈的光吸收,可用分光光度法可用分光光度法定量测定定量测定-SH-SH基基.Cys五、氨基酸的光学活性和光谱性质氨基酸的光学活性和光谱性质()氨基酸的光学活性和立体化学氨基酸的光学活性和立体化学 （二）
27、氨基酸的光谱性质（二）氨基酸的光谱性质(一一)氨基酸的光学活性和立体化学氨基酸的光学活性和立体化学 构型构型：组成蛋白质的氨基酸除组成蛋白质的氨基酸除GlyGly以外都有以外都有手性碳原子手性碳原子，在三维空间上就有两种不同的排列方式，它们互为镜影，这在三维空间上就有两种不同的排列方式，它们互为镜影，这两种不同的两种不同的构型构型分别称为分别称为D-D-型和型和L-L-型，以丙氨酸为例，型，以丙氨酸为例，见图见图。如含两个手性碳原子，则有种立体异构体，分别称为如含两个手性碳原子，则有种立体异构体，分别称为-,-,-，别，别-和别和别-氨基酸。氨基酸。注注:蛋白质中的氨基酸都是蛋白质中的氨基酸都
28、是L-L-型型。NHNH3 3+在左，右在左，右COOH在上，R基在下图图 8 丙氨酸的两种立体异构体丙氨酸的两种立体异构体旋光性-碳原子碳原子 不对称碳、不对称碳、手性碳手性碳互为互为镜影镜影 旋光性：旋光性：组成蛋白质的氨基酸除组成蛋白质的氨基酸除GlyGly以外，都以外，都有手性碳原有手性碳原子，所以都有旋光性，能使偏振光的偏振面的向左或向右子，所以都有旋光性，能使偏振光的偏振面的向左或向右旋转旋转，向左旋转的称左旋，用，向左旋转的称左旋，用“”号表示，向右旋转的号表示，向右旋转的称右旋，用称右旋，用“+”号表示。号表示。使偏振光的偏振面旋转的角度称旋光度使偏振光的偏振面旋转的角度称旋光
29、度。比旋光度是指被测物质的浓度为比旋光度是指被测物质的浓度为1g/ml1g/ml，旋光管的长度，旋光管的长度为分米时测得的旋光度为分米时测得的旋光度。旋光仪旋光仪 外消旋物：外消旋物：旋光物质在化学反应中经过消旋作用转变成旋光物质在化学反应中经过消旋作用转变成D D型和型和L L型的型的等摩尔混合物，称（外）消旋物（等摩尔混合物，称（外）消旋物（racemateracemate）。蛋白质用碱进行水解时，得到的氨基酸都是无旋光性的蛋白质用碱进行水解时，得到的氨基酸都是无旋光性的DL-DL-消旋物。消旋物。CCCH3COOHHOHHH3N+CCCH3COOHHOHHH3N+CCCH3COOHHOH
30、HH3N+CCCH3COOHHOHHH3N+L-L-苏氨酸苏氨酸D-D-苏氨酸苏氨酸L-L-别苏氨酸别苏氨酸D-D-别苏氨酸别苏氨酸内消旋物内消旋物：旋光物质的两个不对称中心是相同的，分子内部的旋光物质的两个不对称中心是相同的，分子内部的旋光性相互抵消，整个分子没有旋光性。这种物质称内旋光性相互抵消，整个分子没有旋光性。这种物质称内消旋物质。如，胱氨酸消旋物质。如，胱氨酸(P(P144144结构式）结构式）CCH2COOHHSH2NCCH2COOHHH2NSCCH2COOHHSH2NCCH2COOHHH2NSCCH2COOHHSH2NCCH2COOHHH2NSL-L-胱氨酸胱氨酸D-D-胱氨酸
31、胱氨酸内消旋胱氨酸内消旋胱氨酸光吸收：光吸收：组成蛋白质的氨基酸组成蛋白质的氨基酸中，中，TrpTrp、TyrTyr和和PhePhe对紫外对紫外光有一定的吸收，这是因为光有一定的吸收，这是因为它们分子中含有苯环，是苯它们分子中含有苯环，是苯环的共轭双键造成的，这三环的共轭双键造成的，这三种氨基酸的光吸收都在种氨基酸的光吸收都在280nm280nm附近，（如右图所附近，（如右图所示）。示）。（二）（二）氨基酸的光谱性质氨基酸的光谱性质 max：Tyr:275 nm Phe:258 nm Trp:279 nm六、氨基酸混合物的分析分离 (一）分配层析法的一般原理一）分配层析法的一般原理 （二）（二
32、）分配柱层析分配柱层析 （三）纸层析（三）纸层析 （四）薄层层析（四）薄层层析 （五）离子交换层析（五）离子交换层析 （六）气相层析（六）气相层析 （七）液相层析（七）液相层析 Ala Leu Asp Pro Lys五种标准氨基酸及其混合纸层析图谱五种标准氨基酸及其混合纸层析图谱混合混合(二二)-羧基参加的反应羧基参加的反应1 1、成盐和成酯反应、成盐和成酯反应(与碱或醇反应）与碱或醇反应）2 2、成酰氯反应、成酰氯反应（与酰化试剂反应，多肽合成保护羧基）（与酰化试剂反应，多肽合成保护羧基）3 3、脱羧基反应、脱羧基反应（成胺）（成胺）4 4、叠氮反应、叠氮反应（与叠氮试剂反应，多肽合成保护羧基和氨基）（与叠氮试剂反应，多肽合成保护羧基和氨基）S CH 2 CH COO-NH3+S CH 2 CH COO-NH3+羧基末端羧基末端NH2CHCO-(NHCHCO)n-NHCHCOOHRRR多肽多肽氨基末端氨基末端
