1、第七章第七章细细菌感染菌感染的检测与的检测与防治原则防治原则本章重点：本章重点：1.细菌感染性细菌感染性标本的采集送检原则标本的采集送检原则2.细菌感细菌感染性标本的实验室检测程序与染性标本的实验室检测程序与方法方法3.每种实验室检测方法的原理与优缺点每种实验室检测方法的原理与优缺点4.人工主动免疫和被动免疫的比较及常用生物人工主动免疫和被动免疫的比较及常用生物制剂制剂 的来源与用途的来源与用途5.灭活疫苗与减毒活疫苗的优缺点灭活疫苗与减毒活疫苗的优缺点第一节第一节 细细菌感染的实验室诊菌感染的实验室诊断断 引起人类感染的病原菌有成百上千种，对于每一例患者来说，究竟是何种细菌引起的感染？要明确
2、这些问题都必须进行准确、快速的病原学鉴定，才能采用特异性的防治措施。因此，病原学检测与鉴定是监测和防治传染病的最关键，最重要的步骤。一、临床标本采集送检及临床标本采集送检及原则原则1.尽尽早早2.同同一疾病一疾病不同病程取不同不同病程取不同标本标本3.不同疾病取不同不同疾病取不同标本标本4.尽量避免杂菌污染尽量避免杂菌污染5.及时送检，正确运送及时送检，正确运送6.准确作好标识准确作好标识细菌感染细菌感染的检测方法的检测方法细菌学检测细菌学检测血清学诊断血清学诊断病原菌，代谢产物，病原菌，代谢产物，抗原，核酸抗原，核酸特异性抗体特异性抗体收集临床标本收集临床标本提供相关临床资料正确取材形态学检
3、查形态学检查分离培养及鉴定分离培养及鉴定动物试验动物试验生化反应生化反应药敏试验药敏试验血清学鉴定血清学鉴定形态学鉴定形态学鉴定分子生物学鉴定分子生物学鉴定快速检测快速检测免疫学检测免疫学检测核酸检测核酸检测 自动化检测自动化检测（二）病（二）病原菌的检验程序原菌的检验程序（一）、（一）、形态学形态学检查检查 1.不不染色标本检查染色标本检查 a.细细菌菌动力动力 b.暗视野显微镜暗视野显微镜检查检查 c.电电子显微镜子显微镜 2.涂片染色与镜检涂片染色与镜检革兰染革兰染色抗色抗酸酸染色染色镀银染镀银染色墨色墨汁汁涂片负涂片负染色染色等等少数形态、少数形态、染色性有特染色性有特征的病原菌征的病
4、原菌初步的诊断初步的诊断（二）细菌的分离培养（二）细菌的分离培养 所有送检标本所有送检标本 不同的培养基不同的培养基 分离培养分离培养纯培养纯培养 如下进一步鉴定如下进一步鉴定H2S +_+/-_+/-_+_+_Slant LBottom GE.coliS.typhi s.paratyphi A Bs.dysenteriaeNote:+acid produce,acid&gas produce1.生化试验（生化试验（Biochemical reaction）A 传统方法传统方法 原理：原理：不同的细菌的酶不同因而对糖、氨基不同的细菌的酶不同因而对糖、氨基 酸等分解的产物各异，通过对这些产酸等分
5、解的产物各异，通过对这些产 物的检测来鉴定细菌。物的检测来鉴定细菌。B 微量生化反应系统Micro-ID系统VP硝酸盐还原 苯丙氨酸脱羧酶硫化氢吲哚鸟氨酸赖氨酸丙二酸盐尿素七叶甘ONPG阿拉伯糖侧金盏花醇肌醇三梨醇421421421421421+0 2 0 0 2 1 4 0 0 0 2 1 4 0 0 2 3 4 3 4相加所得数字：23434 查出相应细菌为：大肠埃希菌2.抗原检测抗原检测:p 原理：已知的特异性抗体或血清（诊断血清）原理：已知的特异性抗体或血清（诊断血清）p +p 标本中的待测细菌抗原标本中的待测细菌抗原 a.酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法（enzyme-linked im
6、muno sorbent assay,ELISA）Antibodies are passively attached to solid phase by Incubation in bufferFree antibodies arewashed away and then antigen addedAntigen is captured by coating antibodies.Unbound antigen is then washed awayenzyme-labeled antibodiesdirected against antigenare addedBinding of the
7、conjugated antibodies completes the sandwich.Free conjugate antibodies is washed awayb.免疫荧光法检测免疫荧光法检测immunofluorescence(IF)c.凝聚试验凝聚试验 agglutination test 直接凝聚试验（直接凝聚试验（direct agglutination)间接凝集（间接凝集（indirect agglutination)协同凝集协同凝集coagglutination核酸检测（核酸检测（Detecting of nucleic acid）聚合酶链反应（聚合酶链反应（PCR）芯片
8、（芯片（DNA chip）.血清学诊断（Serological diagnosis）p原理：原理：已知抗原已知抗原检测未知细菌的特异性抗体检测未知细菌的特异性抗体p现症感染：现症感染：p特异性特异性IgM阳性阳性p特异性抗体：特异性抗体：n急性期特异性急性期特异性IgG抗体滴度抗体滴度倍恢复期特异性倍恢复期特异性IgG抗体，才有诊断意义。抗体，才有诊断意义。第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防人工主动免疫人工主动免疫人工被动免疫人工被动免疫接种各种疫苗或类毒素接种各种疫苗或类毒素刺激免疫系统产生特异性刺激免疫系统产生特异性免疫应答免疫应
9、答注射特异性抗体、血清注射特异性抗体、血清慢慢久久多用于预防多用于预防快快短短多用于多用于紧急预防紧急预防或治疗或治疗.人工主动免疫人工主动免疫（artificial active immunity）疫苗（疫苗（Vaccines）:减毒活疫苗减毒活疫苗 （attenuated live vaccine）灭活疫苗灭活疫苗 （inactivated vaccine）亚单位疫苗亚单位疫苗 （subunit vaccine）基因工程疫苗（基因工程疫苗（gene engineered vaccine）重组载体疫苗（重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine 核酸疫苗核酸疫苗 （
10、nucleic acid vaccine）类毒素（类毒素（toxoid)预防预防 1.减毒活疫苗减毒活疫苗（attenuated live vaccine）p 来自筛选的自然或人工诱导的细菌变异株，该变异株毒力减弱或消失但其免疫原性来自筛选的自然或人工诱导的细菌变异株，该变异株毒力减弱或消失但其免疫原性保留。如保留。如BCG优点优点:类似天然感染类似天然感染 可诱导体液免疫和细胞免疫可诱导体液免疫和细胞免疫 持久持久缺点缺点:有回复突变的可能有回复突变的可能制备难制备难保存难保存难2.灭活疫苗（灭活疫苗（inactivated vaccine）:p用理化方法杀死病原微生物但其免疫原性仍保留的生
11、物制剂。如伤寒、霍乱等疾用理化方法杀死病原微生物但其免疫原性仍保留的生物制剂。如伤寒、霍乱等疾病病制备易制备易无毒力回复突变无毒力回复突变易保存易保存可用于免疫缺陷的患者可用于免疫缺陷的患者 优点优点:缺点缺点:仅能诱导体液免疫仅能诱导体液免疫 多次接种多次接种 成本高成本高 死疫苗和活疫苗的比较p 活疫苗活疫苗 死疫苗死疫苗p 来源来源 变异的活菌变异的活菌 灭活的死细菌灭活的死细菌p 接种反应接种反应 轻轻 发热、局部肿疼等发热、局部肿疼等p 接种次数、量接种次数、量 1次、量小次、量小 2-3次，量大次，量大p p 免疫效果免疫效果 好，可诱导细胞、体液免疫好，可诱导细胞、体液免疫 体液
12、免疫、半或一年体液免疫、半或一年p 14 年或以上年或以上p 保存和运输保存和运输 易易 难难3.亚单位疫苗（Subunit vaccines）p是去除病原体中与激发保护性免疫无关或有害的成分，但保留有效免疫是去除病原体中与激发保护性免疫无关或有害的成分，但保留有效免疫原成分，将这种成分接种入机体诱导特异性免疫应答。如此得到的制剂原成分，将这种成分接种入机体诱导特异性免疫应答。如此得到的制剂称为亚单位疫苗。称为亚单位疫苗。4.基因工程疫苗基因工程疫苗编码病原体保编码病原体保护性抗原表位护性抗原表位的目的基因的目的基因不同载体不同载体原核原核 表达系统表达系统真核真核抗原或表位抗原或表位提纯提纯
13、5.重组载体疫苗（重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine)编码病原体保编码病原体保护性抗原的目护性抗原的目的基因的基因减毒病毒或减毒病毒或 细菌细菌重组载体疫苗重组载体疫苗接种人体中接种人体中6.核酸疫苗（核酸疫苗（DNA疫苗）疫苗）编码病原体保编码病原体保护性抗原的目护性抗原的目的基因的基因真核真核表达载体表达载体直接导入体内直接导入体内 体液免疫体液免疫 特异性特异性 细胞免疫细胞免疫7 类毒素（toxoid)p外毒素0.3-0.4%甲醛毒性消失，保持免疫原性类毒素、人工被动免疫、人工被动免疫Artificial passive immunity 生物制剂：生
14、物制剂：抗毒素（抗毒素（antitoxin）抗菌血清（抗菌血清（antibacterial serum）血清丙种球蛋白（血清丙种球蛋白（serum gammaglobulin）紧急预防紧急预防或治疗或治疗 人工主动免疫与被动免疫比较人工主动免疫与被动免疫比较 人工主动免疫人工主动免疫 人工被动免疫人工被动免疫注射物质 抗原（疫苗，类毒素)）抗体(抗毒素，抗菌血清等)免疫出现时间慢（注射后2-4周）快（注射后立即出现免疫维持时间长（数月-数年）短（2-3周）应用多用于预防 多用于治疗 或紧急预防第三节 细菌感染的治疗原则p1诊断明确为细菌性感染者，方能用抗菌药。诊断明确为细菌性感染者，方能用抗菌
15、药。p2尽早、快鉴定细菌，根据细菌种类和药敏试验结果选用尽早、快鉴定细菌，根据细菌种类和药敏试验结果选用p 抗菌药物。抗菌药物。p3按照抗菌药的作用特点及药物动力学选择用药。按照抗菌药的作用特点及药物动力学选择用药。p4细菌感染的治疗方案应综合患者病情、细菌种类、及抗细菌感染的治疗方案应综合患者病情、细菌种类、及抗p 菌药物的特点等制定。菌药物的特点等制定。复习与思考p一、名词一、名词p 细菌学诊断细菌学诊断(bacteriology diagnosis)p 血清学诊断血清学诊断(serological diagnosis)减毒活疫苗减毒活疫苗 （attenuated live vaccine
16、）灭活疫苗灭活疫苗 （inactivated vaccine）亚单位疫苗亚单位疫苗 （subunit vaccine）基因工程疫苗（基因工程疫苗（gene engineered vaccine）重组载体疫苗（重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine 核酸疫苗核酸疫苗 （nucleic acid vaccine）类毒素类毒素（toxoid)抗毒素（抗毒素（antitoxin)抗菌血清（抗菌血清（antibacterial serum）血清丙种球蛋白（血清丙种球蛋白（serum gammaglobulin）人工主动免疫（人工主动免疫（artificial active immunization)人工被动免疫（人工被动免疫（artificial passive immunization)二、思考题p1细菌的快速诊断的方法、原理、与优缺点p2已知某病原体的保护性抗原的基因序列，如何制备该病原体的亚单位疫苗、基因工程疫苗、重组载体疫苗、核酸疫苗？
