1、 第七章第七章 电泳技术电泳技术 Electrophoresis 分析测试中心分析测试中心刘芸刘芸 1内容提纲内容提纲电泳技术概论电泳技术概论3 13 2常用电泳技术常用电泳技术234 Arne Wilhelm Kaurin Tiselius 蒂塞利乌斯蒂塞利乌斯(瑞典人瑞典人)因研究电泳和因研究电泳和吸附分析，特别是发吸附分析，特别是发现关于血清蛋白的复现关于血清蛋白的复杂本质而获奖杂本质而获奖194856 789101112131415161718 19 2021221iiZmI对于稀溶液：对于稀溶液：2223 NH2 CHRCOOHNH3+CHRCOOCHRCOO NH3+H+OH-+H
2、+OH-(pK 1)(pK 2)242526 27Magnification of Cellulose Acetate filter 28 323334 35363738 39 40 41424351基本操作步骤基本操作步骤：52 常用仪器设备常用仪器设备53 常用仪器设备常用仪器设备54 5556 NH3+OH NH3+OH NH2 P P P COOH H COO H COO蛋白质的阳离子 蛋白质的兼性离子 蛋白质的阴离子 5758+pI1 pI2 pH=pI pI3 pIn-a b c a.蛋白质分子在负极端蛋白质分子在负极端b.蛋白质分子在正极端蛋白质分子在正极端c.蛋白质样品中各组分
3、聚焦成区带蛋白质样品中各组分聚焦成区带+59606162DNA RNA 蛋白质蛋白质 6364656667实验模型实验模型的设计的设计实验组和对照组实验组和对照组样品的制备样品的制备蛋白样品的蛋白样品的IEF和和PAGE电泳分离电泳分离图像扫描和初步分析图像扫描和初步分析感兴趣感兴趣蛋白点蛋白点的切取的切取胰酶对脱色后蛋白质的消化胰酶对脱色后蛋白质的消化质谱的多肽指纹图、微测序分析质谱的多肽指纹图、微测序分析质谱结果的生物信息学分析和比对质谱结果的生物信息学分析和比对新新蛋白质的发现蛋白质的发现其它实验其它实验的进一步的进一步验证验证蛋白信息的蛋白信息的初步获得初步获得6869IPGphor
4、IEF UnitDALT Six Unit7071SDS727374 7576777879 8081 2-DE UnitCyDye DIGE荧光标记物荧光标记物 DeCyder差异分析软件差异分析软件 Typhoon Imager or EDI828384 Why we use the internal standard?85 Benefits of the internal standard868788899091毛细管内径毛细管内径毛细管外径毛细管外径92939495。9697 98界面界面 +-99100101-+-NNNNNNNEOF102103104阴离子表面活性剂：阴离子表面活性剂
5、：十二烷基硫酸钠（十二烷基硫酸钠（SDS)形成的胶束形成的胶束SO3-SO3-SO3-SO3-SO3-SO3-SO3-SO3-SO3-105106EOF+-EOFEOFEOFEOFEOFEOF107108109 110111112 113114115116石英玻璃毛细管直观示意图石英玻璃毛细管直观示意图检测窗检测窗聚酰亚胺涂层聚酰亚胺涂层石英毛细管石英毛细管使使用用时时 117118119120121122蛋白质蛋白质肽肽片段混合物片段混合物酶切酶切CZE分离分离特征性肽图特征性肽图微量制备微量制备CE分别测定各片段的氨基酸序列分别测定各片段的氨基酸序列整个蛋白质整个蛋白质的一级结构的一级结构CE应用举例应用举例-肽的分析肽的分析123 124 125 126 127128 129 130131132133
