1、 项目项目4 4 抗原抗体反应的临床检验抗原抗体反应的临床检验 4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型 解决的问题：解决的问题：u我们为什么要用凝集反应检测人体血型？我们为什么要用凝集反应检测人体血型？u我们用什么材料和设备完成此检测？我们用什么材料和设备完成此检测？u我们怎么进行此检测？我们怎么进行此检测？u我们怎么进行结果判定？我们怎么进行结果判定？u还有哪些其他相关知识需要我们拓展？还有哪些其他相关知识需要我们拓展？问题一问题一我们为什么要用凝集反应检测人我们为什么要用凝集反应检测人体血型？体血型？接到工作任务接到工作任务 你作为医院检你作为医院检验科的一名临床检验科的
2、一名临床检验人员在验人员在5 5月月1212日日接接到一个工作任务：到一个工作任务：用凝集反应检测一用凝集反应检测一批人体血样批人体血样,判定血判定血型型。这个工作需要。这个工作需要你了解反应原理你了解反应原理,并并能够用试剂检测血能够用试剂检测血样，给出正确的结样，给出正确的结论。论。项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型 按照医院的标准操按照医院的标准操作规程开展检测工作。作规程开展检测工作。项目背景项目背景 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型 实验原理实验原理：红细胞作为红细胞作为颗粒性颗粒性抗原抗原与相应的与相应的抗体或抗体血清抗体或抗体血清混合后，混合
3、后，在电解质参与下，经过一定时间，抗在电解质参与下，经过一定时间，抗原抗体凝聚成肉眼可见的原抗体凝聚成肉眼可见的凝集块凝集块，这，这种现象称为种现象称为凝集反应凝集反应。血清中的抗体称为。血清中的抗体称为凝集素凝集素，抗原称为，抗原称为凝集凝集原原。项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型一、基本概念一、基本概念凝集反应定义：凝集反应定义：颗粒性抗原颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应（细菌、红细胞等）与相应抗体抗体，在适宜，在适宜条件下发生结合，出现的肉眼可见的条件下发生结合，出现的肉眼可见的凝集现象凝集现象。项目项目6 6 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型直接
4、凝集技术直接凝集技术特点特点：l抗原是较大的颗粒性物质抗原是较大的颗粒性物质l反应形成的凝集物主要由抗原物质组成反应形成的凝集物主要由抗原物质组成l反应效价多以抗体稀释度判定反应效价多以抗体稀释度判定间接凝集技术间接凝集技术项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型定义：定义：细菌、细胞等颗粒性细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集出现凝集，称为直接凝集反应反应 。操作步骤操作步骤项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型一、基本概念一、基本概念1.1.直接凝集
5、技术直接凝集技术临床意义：临床意义：l输血交叉配血试验输血交叉配血试验l伤寒、副伤寒的肥达试伤寒、副伤寒的肥达试验验玻片法玻片法试管法试管法玻片法玻片法 颗粒性颗粒性抗原抗原已知已知抗体抗体1:21:41:81:16 1:32 1:64 1:128各管血清倍比稀释各管血清倍比稀释加入抗原加入抗原各管抗原量不变各管抗原量不变振摇振摇 混匀、混匀、37孵育孵育有无凝集有无凝集出现明显凝集现象的最高稀释倍数出现明显凝集现象的最高稀释倍数为凝集效价：为凝集效价：1：64试管法试管法凝凝 集集 试试示示 意意 图图验验AbAgAb试管法试管法 定义：定义：将可溶性抗原或抗体先吸将可溶性抗原或抗体先吸附于
6、适当大小的颗粒性载体附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。称为间接凝集反应。操作步骤操作步骤项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型一、基本概念一、基本概念1.1.间接凝集技术间接凝集技术载体种类：载体种类：l 载体微球（红细胞）载体微球（红细胞）l 聚苯乙烯胶乳微球聚苯乙烯胶乳微球正向间正向间接凝集接凝集试验试验反向间反向间接凝集接凝集试验试验间接凝间接凝集抑制集抑制试验试验
7、协同凝集试协同凝集试验验正向间接凝集试验正向间接凝集试验+载体微球载体微球可溶性抗原可溶性抗原免疫微球免疫微球抗体抗体免疫微球凝集免疫微球凝集原理：原理：诊断试剂：抗原致敏诊断试剂：抗原致敏载体微球载体微球检测：标本中是否存检测：标本中是否存在相应抗体。在相应抗体。结果判定：结果判定：阳性：凝集阳性：凝集阴性：无现象阴性：无现象反向间接凝集试验反向间接凝集试验+载体微球载体微球抗体抗体免疫微球免疫微球可溶性抗原可溶性抗原免疫微球凝集免疫微球凝集原理：原理：诊断试剂：抗体致敏诊断试剂：抗体致敏载体微球载体微球检测：标本中是否存检测：标本中是否存在相应抗原。在相应抗原。结果判定：结果判定：阳性：凝
8、集阳性：凝集阴性：无现象阴性：无现象问题二问题二我们用什么材料和设备完成此检我们用什么材料和设备完成此检测？测？酶项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型备注：备注：A A型标准血清（含抗型标准血清（含抗B B凝集素，使凝集素，使B B型、型、ABAB型红细胞的凝集原凝集）；型红细胞的凝集原凝集）；B B型标准血清（含抗型标准血清（含抗A A凝集素，使凝集素，使A A型、型、ABAB型红细胞的凝集原凝集）；型红细胞的凝集原凝集）；设备或材料设备或材料数量数量设备或材料设备或材料数量数量采血针采血针1 1支（每组）支（每组）毛细吸管毛细吸管5 5支（每组）支（每组）小试管
9、小试管3 3支（每组）支（每组）载玻片载玻片 5 5片（每组）片（每组）无菌生理盐水无菌生理盐水1000mL1000mL（共用）（共用）记号笔记号笔1 1支（每组）支（每组）A A型标准血清型标准血清1 1支（共用）支（共用）B B型标准血清型标准血清1 1支（共用）支（共用）器具器具 试剂试剂 问题三问题三我们怎么进行此检测？我们怎么进行此检测？第一步第一步 玻片准备玻片准备项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型取取1 1个玻璃载玻片，放在一张白纸上，在载玻片左边写个玻璃载玻片，放在一张白纸上，在载玻片左边写检测这名字，玻片左上角写检测这名字，玻片左上角写“A”A”
10、右上角写右上角写“B”B”。用小滴管吸用小滴管吸A A型标准血清，滴型标准血清，滴1 1滴在左侧，用另一滴在左侧，用另一小滴管吸小滴管吸B B型标准血清，滴型标准血清，滴1 1滴在右侧。滴在右侧。观看录像观看录像实验材料 手指手指载玻片、白纸、记号笔、酒精载玻片、白纸、记号笔、酒精棉、棉、ABO血清标品血清标品消毒受检者的指尖。消毒受检者的指尖。第二步第二步 血型测定血型测定项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型待血流出后用小滴管吸待血流出后用小滴管吸1 1滴血，各滴一滴在左侧抗滴血，各滴一滴在左侧抗A A血血清和右侧抗清和右侧抗B B血清中。血清中。捏紧指尖，用消毒
11、过的采血针迅速刺破皮肤。捏紧指尖，用消毒过的采血针迅速刺破皮肤。混合混合A A型和型和B B型标准血清和红细胞悬液。型标准血清和红细胞悬液。静置数分钟后，放在低倍镜下观察凝集现象。静置数分钟后，放在低倍镜下观察凝集现象。实验步骤 做标记，准备材料做标记，准备材料 取血取血 采采样样问题四问题四我们怎么进行结果判定？我们怎么进行结果判定？结果判定结果判定项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型阳性凝集阳性凝集阴性未凝集阴性未凝集：出现大的凝集块，液体完全清亮透明，即100凝集。：有明显的凝集片，液体几乎完全透明，即75凝集。：有可见的凝集片，液体不甚透明，即50凝集。：液
12、体混浊，有小的颗粒状物，即25的凝集。：液体均匀混浊，即不凝集。实验步骤滴加标准血清滴加标准血清 混合混合问题五问题五还有哪些其他相关拓展知识需要还有哪些其他相关拓展知识需要我们了解？我们了解？抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合不形成牢固的共价键，通过非共价键结合不形成牢固的共价键，通过非共价键结合这种弱的结合力涉及几种分子间的作用力这种弱的结合力涉及几种分子间的作用力 一、抗原抗体结合力一、抗原抗体结合力 *（1 1）静电引力）静电引力 *（2 2）范德华引力）范德华引力 *（3 3）氢键结合力）氢键结合力 *（4 4）疏水作用力）疏水作用力拓展知识一拓
13、展知识一 抗原和抗体的结合力抗原和抗体的结合力项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型抗原抗原抗体抗体氢键结合力氢键结合力 O ON NO ON NH HH H静电引力静电引力-+范得华力范得华力-+-+-+疏水作用力疏水作用力排斥的水排斥的水项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型1.1.抗原和抗体的结合力示意图抗原和抗体的结合力示意图*亲和性亲和性 是抗体分子上一个抗原结合点与对是抗体分子上一个抗原结合点与对 应的抗原决定簇之间的相适应性而存在着的应的抗原决定簇之间的相适应性而存在着的 引力，这是抗原与抗体之间固有的结合力。引力，这是抗原与抗
14、体之间固有的结合力。*亲和力（亲和力（avidity)avidity)是指反应系统中复杂抗原与相应抗体之间的结合能力。是指反应系统中复杂抗原与相应抗体之间的结合能力。亲和力与亲和性、抗体的结合价和抗原的有效决定簇数目相关。亲和力与亲和性、抗体的结合价和抗原的有效决定簇数目相关。亲和力越大，抗原抗体结合越牢固。亲和力越大，抗原抗体结合越牢固。2.2.抗原和抗体的亲和性抗原和抗体的亲和性项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型 *1.1.特异性特异性 *2.2.比例性比例性 *3.3.可逆性可逆性 拓展知识二拓展知识二 抗原抗体反应特抗原抗体反应特点点项目项目4-1 4-1
15、 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型*概念：概念：抗原分子，只能与由它刺激所抗原分子，只能与由它刺激所产生的抗体结合而起反应的专一性能。产生的抗体结合而起反应的专一性能。决定因素：决定因素：由抗原决定簇和抗体分子由抗原决定簇和抗体分子超变区之间空间结构的互补性决定的。超变区之间空间结构的互补性决定的。抗原抗体反应特异性示意抗原抗体反应特异性示意图图项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型*最适比或等价点最适比或等价点最迅速出现沉淀时的抗原抗体的浓度比或量比。最迅速出现沉淀时的抗原抗体的浓度比或量比。等价带等价带抗原与抗体分子比例合适的范围。抗原与抗体分子比例合适的
16、范围。带现象：带现象：AgAg与与AbAb比例不适而不出现可见反应。比例不适而不出现可见反应。*前带前带(prozone)(prozone)抗体过量时。抗体过量时。*后代后代(postzone)(postzone)抗原过量时。抗原过量时。2.2.抗原抗体反应比例抗原抗体反应比例性性项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型抗体过量抗体过量比例合适比例合适抗原的量抗原的量抗原过量抗原过量抗体沉淀的量抗体沉淀的量前带前带等价带等价带后带后带抗原抗体反应比例性示意图抗原抗体反应比例性示意图概念：概念：是指抗原与抗体结合成复合物后，在是指抗原与抗体结合成复合物后，在 一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性。一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性。3.3.抗原抗体反应可逆性抗原抗体反应可逆性项目项目4-1 4-1 凝集反应检测人体血型凝集反应检测人体血型抗体抗体混有混有SPAgSPAg抗体抗体-SPAg-SPAg抗体抗体-SPAg-SPAg分离剂分离剂一、抗原抗体结合一、抗原抗体结合二、分离抗体二、分离抗体抗体抗体可逆性示意图可逆性示意图作业：父母的血型与子女的血型关系父母血型子女可能有的血型子女不可能有的血型O+OA+OA+AB+OB+BA+BAB+OAB+BAB+AAB+AB
