1、2016免疫组化在常见疾病诊断中应用免疫组化在常见疾病诊断中应用免疫组织化学技术免疫组织化学技术(immunohistochemistry)通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色，来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究。特点：1）特异性强）特异性强 只有当组织细胞中存在交叉抗原时，才会出现交叉反应 2）敏感性高）敏感性高 3）定位准确、形态与功能相结合）定位准确、形态与功能相结合 不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察IHC的临床应用恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；确定转移性恶性肿瘤的原发部位；确定转移性恶性肿瘤
2、的原发部位；对某类肿瘤进行进一步的病理分型；对某类肿瘤进行进一步的病理分型；软组织肿瘤的软组织肿瘤的诊断及诊断及组织学分类；组织学分类；发现微小转移灶，有助于发现微小转移灶，有助于手术范围的确定手术范围的确定；为临床提供下一步治疗放、化方案的选择；为临床提供下一步治疗放、化方案的选择；IHC结果正确判读免疫组化染色结果判定建立在组织阳性、阴性对照实验成立的基础.阳性对照阳性对照用肯定表达这种抗原的切片来做；排除方法和实验系统有无问题；用肯定表达这种抗原的切片来做；排除方法和实验系统有无问题；阴性对照阴性对照用用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，排除有无一抗外的非特异性染色或非一抗替代一抗来进行
3、反应，排除有无一抗外的非特异性染色(1)首先要确定背景颜色浅淡或无着色，染色清晰和定位明确。(2)其次要注意染色的分布部位和形态特征（胞核、胞膜、胞浆）。(3)阴性染色结果是组织内预期特定区域中未见抗原表达，阴性结果不能立即认为是否定意义.ERE-cdCD68IHC在肺肿瘤诊断中的主要应用肺肿瘤诊断常用的主要标记物1 低分化肺腺癌VS鳞癌2原发性肺腺癌VS转移性腺癌5原发性肺腺癌VS胸膜间皮瘤3确定肿瘤的神经内分泌分化4肺肿瘤诊断常用的主要标记物1、NapsinA2、TTF-1 3、SP-A 4、CK75、Cam5.26、P637、P408、CK5/69、神经内分泌标记CgA、Syn、CD56
4、1、活检小标本中低分化腺癌VS鳞癌TTF-12、肺腺癌VS间皮瘤恶性间皮瘤 (+)：WT-1、CK、Calretinin、CK5/6、不常用 Ber-EP4、MOC30、D2-40 阳性 阴性肺腺癌 TTF-1、CK7 CK20转移性甲状腺癌 TG、TTF-1 SP-A 转移性结直肠癌 villin CDX-2 CK20 TTF-1、NapsinA CK7 转移性结乳腺癌 ER TTF-1、NapsinA 转移性卵巢癌 WT-1、CA125、Vim、Calretinin、Inhibin TTF-1、NapsinA 转移性前列腺癌 PSA 、P504s TTF-1、NapsinA 转移性尿路上皮
5、 癌 CK7 CK20 TTF-1、NapsinA 3、肺腺癌、肺腺癌VS转移性癌转移性癌4、肺小细胞癌的诊断、肺小细胞癌的诊断(+)：CgA、Syn、CD56、TTF-1（90%）鉴别诊断神经外胚瘤PNET erkel细胞癌(+)：C99(+)：CK(-)：CK或TTF-1(-)：CK或TTF-1SynTTF-15、肺大细胞癌的鉴别诊断未分化的NSCLC，排他性诊断，除外：腺癌（如：TTF-1、NapsinA、CK7 等）鳞癌（如：P40、P63、CK5/6等）神经内分泌（如：CgA、Syn、CD56等）LCC分为：1、低分化腺癌（60%-70%）2、低分化鳞癌（10%-20%）3、大细胞神
6、经内分泌癌（5%）(+)：CgA、Syn、CD56、TTF-1（50%）4、不表达任何标记未分化癌（非特指类型的大细胞癌）CgATTF-1CD561、EGFR(阳性部位：细胞浆阳性部位：细胞浆)2、EML4-ALK（+）：）：15%15%的肿瘤细胞呈现胞质的肿瘤细胞呈现胞质/胞膜着色；胞膜着色；评分标准 染色强度 结果判读无细胞染或 10%的肿瘤细胞呈现微弱着色 0 -10%的肿瘤细胞呈现弱着色；1 +肿瘤细胞呈现中度着色 2 +肿瘤细胞呈现强着色 3 +评分标准 染色强度 结果判读无细胞染色 0 -微弱胞质/胞膜着色；1 +中度胞质/胞膜着色 2 +强胞质/胞膜颗粒状着色 3 +IHC在胃肠
7、肿瘤诊断中的主要应用胃肠肿瘤诊断常用的主要标记物1 低分化胃腺癌2间质瘤5胃癌中的 HER2 评分标准3胃肠的神经内分泌肿瘤4胃肠肿瘤诊断常用的主要标记物1、CK 2、EMA 最好与CK联合3、CEA 4、CK7 5、CK20 结直肠癌最常见的表达方式：CK20（+）/CK7（-）6、Villin7、CDX-28、CD117/C-kit 9、CD3410、Dog-111、神经内分泌指标：CgA、Syn、CD56胃低分化腺癌和印戒细胞癌 CKCKCK手术标本 染色形态活检标本 染色形态分值HER2表达无反应或10%的肿瘤细胞出现细胞膜反应所有细胞均无反应 或细胞膜反应 0阴性10%的肿瘤细胞出现
8、微弱 难以察觉的细胞膜反应；细胞的部分细胞膜有反应出现微弱 难以察觉的细胞膜反应的肿瘤细胞簇*，无论肿瘤细胞染色百分比1+阴性 10%的肿瘤细胞出现微弱至中等强度的完整、基底侧或侧膜反应出现微弱至中等强度的完整、基底外侧或侧膜反应的肿瘤细胞簇，无论肿瘤细胞染色百分比2+不确定 10%的肿瘤细胞中出现高强度的完整、基底外侧或侧膜反应出现高强度的完整、基底外侧或侧膜反应的肿瘤细胞簇，无论肿瘤细胞染色百分比3+阳性胃癌中的 HER2 评分标准注：注：*对于活检样本而言，没有临界百分比；但需要至少五个阳性细胞的对于活检样本而言，没有临界百分比；但需要至少五个阳性细胞的细胞簇细胞簇乳腺癌和胃癌中的 HE
9、R2 判读不同1、胃癌典型的“U”型膜着色，不完全膜着色 乳腺癌完全膜着色2、胃癌选用肠型肿瘤成分多蜡块，弥漫型效果最差结直肠腺癌(+)：CK20、CDX-2、Villin、(-)：CK7VillinCK7CK20CDX-2神经内分泌肿瘤 胃肠胰神经内分泌分级标准（WHO，2010）(+):CgA、Syn、CD56；胃泌素、生长激素、组织胺、5-HT、VIP、PP、ACTH等注：1、核分裂活跃区应数50HPF（1HPF=2mm2，视野直径=0.5m）2、Ki67应在核染色阳性处数500-2000个细胞 3、分级与Ki67指数不符合，建议取较高分级 4、对胃、十二指肠、胰腺有用，小肠尚无这种分级
10、Ki67syn间质瘤间质瘤胃 (+)：CD117/CD34、Dog-1（选择性）；少数SMA、Desmin、S-100小肠 (+)：CD117、Dog-1；部分 SMA/S-100；CD34（低）CD117IHC在肝脏肿瘤诊断中的主要应用肝肿瘤诊断常用的主要标记物1肝细胞性肝癌 HCC 2肝内胆管细胞癌 ICC3HCC VS ICC VS MAC的IHC鉴别4肝脏肿瘤诊断常用的主要标记物1、AFP2、HepPart3、GPC-34、CD346、pCEA7、CD108、CK19和CK7 9、网状纤维染色 肝细胞性肝癌 HCC(+)：AFP、HepPart、GPC-3、CD34血窦内皮细胞毛细血管
11、化 网染癌巢中网状纤维断裂或消失 pCEA、CD10胆管和胆小管染色 HepPart网染 肝内胆管细胞癌 ICC(+)：CAM5.2 CK7、CK19、CEA、EMA、Claudin-4肝内胆管癌：CK7(+)/CK20(+)肝外胆管癌：CK7(+)/CK20(-)HCC VS ICC VS MAC的IHC鉴别CK20AFPCK19CDX-2VillinIHC在肾脏肿瘤诊断中的主要应用肾脏肿瘤诊断常用的主要标记物1肾透明细胞癌VS尿路上皮癌2肾细胞癌亚型间鉴别3肾肿瘤诊断常用的主要标记物1、RCC2、CD103、PAX24、PAX8肾透明细胞癌VS尿路上皮癌IHC在男性泌尿肿瘤诊断中的主要应用
12、前列腺肿瘤诊断常用的主要标记物1前列腺增生VS前列腺癌2尿路上皮癌鉴别3男性泌尿肿瘤诊断常用的主要标记物1、PSA2、P504S3、P633、34E124、CK5/65、Uroplakin 6、CD1417、P53前列腺增生和前列腺癌前列腺增生（+）：P63、34E12、PSA （-）：P504S前列腺癌 （+）：P504S、PSA （-）：P63、34E12、PSAP504SP6334E12膀胱尿路上皮癌（+）：EMA、CK7、CK20、P63、34E12、CK5/6 Uroplakin、TM前列腺癌（+）：P504S、PSA （-）：P63、34E12、P63 34E12 Uroplaki
13、n PAX2 PAX8尿路上皮癌尿路上皮癌 +/-肾源性肿瘤肾源性肿瘤 -+IHC在子宫肿瘤诊断中的主要应用子宫肿瘤诊断常用的主要标记物1宫颈腺癌VS子宫内膜腺癌2IHC在鉴别子宫内膜肿瘤中的应用31、P162、P533、Vimentin4、ER和PR5、CD106、desmin7、H-caldesmon8、Ki67 宫颈腺癌VS子宫内膜腺癌 注：ProExC（拓扑异构酶A和微小染色体维持蛋白2（MUM2）的混合物）宫颈腺癌（+）：P16、CEA、（-）：Vimentin子宫内膜腺癌（+）：Vimentin、ER、PR、IHC在鉴别子宫内膜肿瘤中的应用子宫内膜样腺癌(+）：P53（散在）、Vi
14、mentin、ER和PR（弥漫）子宫浆液性癌（+）：P53（弥漫）、P16、（-）：ER和PR、WT-1IHC在卵巢肿瘤诊断中的主要应用卵巢肿瘤诊断常用的主要标记物1IHC在卵巢生殖细胞肿瘤中的应用3卵巢原发性癌VS转移性腺癌4IHC在卵巢表面上皮肿瘤中的应用2卵巢肿瘤诊断常用的主要标记物1、WT-12、CK73、CK204、PAX85：inhibin6、CR7、PLAP8、OCT49、AFP10：HCG11、CA125(+)：CK7及CA125（100%）、P53及WT-1（90%）、ER及PR（50%）、(-)：CK201、高级别VS低级别 P53、P16：弥漫强表达VS弱表达2、浆液性癌
15、原发于卵巢或宫内膜WT-1：（+）VS（-）3、浆液性癌VS透明细胞癌 P53、WT-1强表达支持浆液性癌 卵巢浆液性癌及相关鉴别WT-1ERCK7CA125CK20 卵巢浆液性癌 卵巢子宫内膜样腺癌 VIM -+ER -+PR -+P53 +WT-1 +-catenin -+（核）（核）卵巢浆液性癌VS卵巢子宫内膜样腺癌 CK7 CK20 WT-1 Vimentin 浆液性腺癌 +-+有时 黏液性（肠型）+-透明细胞性 +-移行细胞性 +-+-宫内膜样腺癌 +-+卵巢上皮性癌免疫组化鉴别IHC在卵巢生殖细胞肿瘤中的应用注：S：有时阳性；R:极少细胞阳性；-/+:不确定，但阴性成年型颗粒细胞瘤
16、（+）：Calretinin、Inhibin、CD99、S-100、SMA、Vimentin、CK（灶阳）（-）：CK7、EMA（鉴别Inhibin阳性的卵巢癌）卵泡膜细胞瘤（+）：Calretinin、Inhibin（-）：EMA卵巢原发性癌VS转移性腺癌注：1、大多数粘液性癌表达CK20，但多数为斑片状弱至中等强度染色2、卵巢转移性，最常见原发部位：胃肠道、生殖道和乳腺卵巢原发：CK7（+）/CK20（-）CK7（+）/CK20（+）转移性癌：CK7（-）/CK20（+）IHC在乳腺肿瘤诊断中的主要应用乳腺肿瘤诊断常用的主要标记物1乳腺间质浸润的判断25UDH VS ADH VS DCIS
17、 VS 3导管内乳头状肿瘤良VS恶性4乳腺原发性癌VS转移性腺癌浸润性导管癌VS浸润性小叶癌乳腺肿瘤诊断常用的主要标记1、ER 2、PR 3、Ki67 4、Her-2（C-erbB-2）1、S-1002、CK5，CK14、CK173、P634：Calponin5、E-cadherin 6：P120 Catenin7、BCL-28、P53 1、GCDFP-152、Mammaglobin3、34E124、CK5/65、其他细胞角蛋白乳腺导管和小叶上皮(+)：CK7、8、18，CK19和CAM5.2 NEQAS 推荐的ER染色结果评分 染色细胞比例 染色强度 0=没有细胞核的染色 0=无染色 1=1
18、%核染色 1=染色强度弱 2=1-10%核染色 2=染色强度中等3=11-33%核染色 3=染色强度强4=34-66%核染色5=67-100%核染色 阳性细胞数1%激素受体阳性 乳腺癌 HER2 免疫组化染色判读标准（2014）评分标准 评分 结果判读无细胞染色或 10%的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜着色 0 阴性 10%的浸润癌细胞呈现不完整的、微弱的细胞膜着色；1+阴性10%的浸润癌细胞呈现不完整的和（或）弱至中等强度细胞膜着色或10%的浸润癌细胞呈现强而完整的细胞膜着色2+不确定 10%的浸润癌细胞呈现强、完整的、均匀的细胞膜着色；3+阳性注意事项：1、对于浸润性乳腺癌，ER、P
19、R、HER2 评估染色区域为浸润癌区域；2、IHC检测HER2（2+不确定），做FISH检测；3、新辅助治疗后的浸润性乳腺癌和复发、转移病灶应该再次ER、PR、HER2检测；4、两个以上肿块，存在异质性，分开ER、PR、HER2检测；5、如果ER、PR、HER2三阴，可能为基底细胞样癌，结合形态，加做CK5/6,CK17或CK14，EGFR等CK56Ki67 腺细胞 肌上皮细胞 P63（核）-+Calponin -+SMA -+CK5/CK14 -+/-CK8/18 +-间质浸润-主要识别肌上皮细胞是否存在（良性病变和原位癌均存在）常选择P63和Calponin 、SMA等多种联合标记乳腺细胞
20、免疫表型P63P63Calponin 导管内乳头状肿瘤良VS恶性1、识别肌上皮细胞的减少或消失，可用P63、Calponin 、SMA等多种联合标记。肌上皮细胞的完全消失肯定为恶性病变，部分乳头状癌可见少量乳头保留肌上皮。2、CK5/6 鉴别良、恶性导管内乳头状瘤 CK5/6（+）乳头状癌（-）3、ER一致强阳性倾向为癌4、注：（1）、大汗腺化生及CCC/CCH均基本不表达CK5/6；（2）、高级别导管内乳头状癌内见 CK5/6（+）（3）、CK5/6（+）/（-）,并非100%P63 CK5/6 ER P63UDH VS ADH VS DCIS VS UDH ADH DCIS（1级）LCIS
21、CK5/6 +-34BE12 +-（90%）-/+ER +（不均匀）+（克隆性）+CK5/6 CK5/6 ER IDC ILC E-cd 膜+-P120 膜+浆+34BE12 -/+浸润性导管癌VS浸润性小叶癌E-cd乳腺原发癌VS转移性癌1、乳腺原发癌（+）：GCDFP-15、Mammaglobin、ER、PR等 转移性癌：CK7、CK20、TTF-12、淋巴结微转移识别 Mammaglobin、CK19等上皮标记进一步证实淋巴结内的微转移和孤立肿瘤细胞梭形细胞性肿瘤 IHC诊断思路总结：特异性标记物1、肺：TTF-1：肺腺癌（及甲状腺肿瘤；SP-A：肺腺癌，特异性强2、卵巢：CA125：卵巢浆液性癌WT-1：卵巢浆液性癌3、乳腺：GCDFP-15：乳腺癌 Mammaglobin：乳腺癌敏感性4、甲状腺：TTF-1：甲状腺滤泡性癌，乳头状癌，髓样癌TG：甲状腺滤泡性癌及乳头状癌calcitonin:甲状腺髓样癌5、前列腺：PSA：前列腺癌6、结肠：CDX-2：结肠腺癌7、肝脏：HepPart：肝细胞肝癌AFP：原发和转移肝癌8、肾脏：RCC：肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌，嫌色细胞癌（-）PAX-2：肾透明细胞癌9、膀胱：Uroplakin：尿路上皮细胞CD141：尿路上皮癌、鳞癌10、神经内分泌标记：Syn、CgA、CD56 仅 供 参 考!谢 谢！
