1、原理：用已知伤寒沙门菌原理：用已知伤寒沙门菌O O、H H抗原，以及引抗原，以及引起起 副伤寒的副伤寒沙门菌副伤寒的副伤寒沙门菌H H抗原与受检血清抗原与受检血清作定量凝集试验，测定受检血清中有无相应作定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。作为临床上诊断伤寒抗体及其效价的试验。作为临床上诊断伤寒和副伤寒的参考。和副伤寒的参考。第1页，共13页。实验材料实验材料 (1)(1)待测血清待测血清(1:10)(1:10)，伤寒杆菌，伤寒杆菌O O、H H菌液，菌液，甲型副伤寒杆菌甲型副伤寒杆菌(PA)(PA)和乙型副伤寒杆菌和乙型副伤寒杆菌(PB)H(PB)H菌液，生理盐水。菌液，生
2、理盐水。(2)(2)小试管，吸管，试管架，吸耳球小试管，吸管，试管架，吸耳球(或橡皮或橡皮乳头乳头)，水浴箱，记号笔等。，水浴箱，记号笔等。第2页，共13页。方法：方法：在试管架上放在试管架上放4 4排试管，每排支，做好标记。排试管，每排支，做好标记。每排每支试管各加入每排每支试管各加入0.5ml0.5ml生理盐水。生理盐水。每排第每排第1 1管中分别加入待测血清管中分别加入待测血清0.5ml0.5ml。混匀后用吸管。混匀后用吸管吸取吸取0.5ml0.5ml混合液加到第混合液加到第2 2管内。混匀后再从中吸取管内。混匀后再从中吸取0.5ml0.5ml液体到第液体到第3 3管中，如此重复直至第管
3、中，如此重复直至第6 6管。第管。第6 6管稀释管稀释完后吸取完后吸取0.5ml0.5ml混合液弃去。第混合液弃去。第7 7管不加待测血清作阴性管不加待测血清作阴性对照。每一排试管均重复上述步骤。对照。每一排试管均重复上述步骤。第3页，共13页。在第在第1 1排每个试管中加入伤寒杆菌排每个试管中加入伤寒杆菌“O”O”抗原抗原0.5ml0.5ml，第，第2 2排，第排，第3 3排和第排和第4 4排则每管分别加入排则每管分别加入0.5ml0.5ml伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、乙型副伤寒伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌的杆菌的“H”H”抗原。抗原。将所有的试管充分振荡，使其混匀，置将所有的试管
4、充分振荡，使其混匀，置5050水浴水浴4545分钟，取出观察结果。分钟，取出观察结果。第4页，共13页。肥达反应稀释法示意表肥达反应稀释法示意表试验管（每管试验管（每管0.5ml）对照管对照管 1234567生理盐水生理盐水0.50.50.50.5 0.50.5 0.5-1“O”抗原抗原 0.50.50.50.5 0.50.50.52“H”抗原抗原0.50.50.50.50.50.50.53PA抗原抗原0.50.50.50.50.50.50.54PB抗原抗原0.50.50.50.50.50.50.5血清最终稀释度血清最终稀释度 1:401:801:1601:3201:640 1:1280-第5
5、页，共13页。成分成分产生产生抗体抗体产生特点产生特点制备制备反应特点反应特点O O抗抗原原LPSLPSIgMIgM出现早出现早维持时间维持时间短短酒精处理酒精处理或加热或加热反应速度慢反应速度慢颗粒状凝集颗粒状凝集H H抗抗原原蛋白蛋白质质IgGIgG出现较晚，出现较晚，维持时间维持时间长长甲醛固定甲醛固定后使后使O O抗原抗原被遮盖被遮盖反应速度快反应速度快絮状凝集絮状凝集第6页，共13页。血清的凝集效价（滴度）：血清的凝集效价（滴度）：是指能与一定量是指能与一定量的抗原发生肉眼可见的明显凝集的血清最高的抗原发生肉眼可见的明显凝集的血清最高稀释倍数。血清效价代表血清中抗体的含量，稀释倍数。
6、血清效价代表血清中抗体的含量，血清效价越高，所含抗体的量愈多。血清效价越高，所含抗体的量愈多。第7页，共13页。1、正常凝集效价、正常凝集效价 伤寒沙门菌伤寒沙门菌“O”抗体凝集效价在抗体凝集效价在1：80以下，以下，伤寒沙门菌伤寒沙门菌“H”抗体在抗体在1：160以下，以下，甲、乙型副伤寒沙门菌甲、乙型副伤寒沙门菌“H”抗体凝集效价抗体凝集效价在在1：80以下。以下。2、病程中动态观察、病程中动态观察 二份血清，第二次效价增长四倍以上有意二份血清，第二次效价增长四倍以上有意义义3、O与与H抗体在诊断上的意义抗体在诊断上的意义第8页，共13页。O H A B 诊诊 断断 意意 义（义（可能可能
7、）伤寒及副伤寒感染早期伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应交叉反应伤寒及副伤寒感染晚期伤寒及副伤寒感染晚期/预防接种预防接种/非特异性回忆反应非特异性回忆反应伤寒伤寒甲型副伤寒甲型副伤寒乙型副伤寒乙型副伤寒接种伤寒及副伤寒三联疫苗接种伤寒及副伤寒三联疫苗非肠热症非肠热症/早期用抗生素早期用抗生素/免疫功能低下免疫功能低下O 与与H抗体在诊断上的意义抗体在诊断上的意义第9页，共13页。实验二实验二 其他细菌其他细菌白喉棒状杆菌：白喉棒状杆菌：G+一端或两端膨大，排列不规则，常呈一端或两端膨大，排列不规则，常呈栅栏状或英文字母样，如栅栏状或英文字母样，如V、W、X等等观察异染颗粒观察异染颗粒第10页，共13页。炭疽杆菌：炭疽杆菌：G G粗大杆菌，两端平切、排列呈粗大杆菌，两端平切、排列呈竹节状竹节状；有；有荚膜，荚膜，芽胞芽胞呈椭圆形，位于菌体中央呈椭圆形，位于菌体中央第11页，共13页。肉毒梭菌肉毒梭菌：G G粗大杆菌，粗大杆菌，芽胞位于近极端，成网球拍状芽胞位于近极端，成网球拍状第12页，共13页。实验二实验二 炭疽杆菌菌落炭疽杆菌菌落 3035 3035，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型，普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察呈卷发状第13页，共13页。
