1、动物生物化学实验主讲：伍红主讲：伍红西南民族大学生命科学与技术学院西南民族大学生命科学与技术学院 实验一 实验室基本知识 实验二 氨基酸纸层析 实验三 血清蛋白含量测定 实验四 影响酶活性的因素 实验五 脂质的薄层层析 实验六 凝胶层析法基本练习 实验七 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 实验八 动物组织中DNA提取实验一 实验室基本知识 一、实验室规则 二、实验室常用量器及仪器设备介绍 三、试剂配制 四、实验误差与克服 五、实验室安全知识简介 六、实验记录及实验报告一、实验室规则1.1.实验前认真预习实验内容。实验前认真预习实验内容。2.2.实验时遵守课堂纪律，不大声喧哗。实验时遵守课堂纪律，不大声
2、喧哗。3.3.严格按操作规程操作。严格按操作规程操作。4.4.爱护实验室各种器具及仪器设备，如有损坏，及时报告，爱护实验室各种器具及仪器设备，如有损坏，及时报告，并按规定赔偿。并按规定赔偿。5.5.公用试剂用后放回原处，瓶盖随开随盖防止污染。公用试剂用后放回原处，瓶盖随开随盖防止污染。6.6.注意安全，不得将易燃试剂接近火焰，严禁用口吸取有注意安全，不得将易燃试剂接近火焰，严禁用口吸取有毒药品和试剂，凡发生烟雾，有毒气体和不良气味的实验应毒药品和试剂，凡发生烟雾，有毒气体和不良气味的实验应在通风橱内进行。在通风橱内进行。7.7.保持实验室整洁，每次实验毕，由三个组同学打扫及整保持实验室整洁，每
3、次实验毕，由三个组同学打扫及整理实验室。理实验室。二、实验室常用量器及仪器设备介绍 1.1.常用量器常用量器（1 1）容量瓶）容量瓶 凡要求准确（0.01)配制一定浓度的溶液时，必须使用容量瓶。以容量瓶配制试剂时的操作以容量瓶配制试剂时的操作（2 2）刻度吸管）刻度吸管（3 3）移液器）移液器 2.2.常用仪器设备常用仪器设备（1 1）离心机）离心机 承载离心管，并以离心力使管内物质沉降进而造成固体和液体分离的机具。高速冷冻离心机高速冷冻离心机离心技术简介离心技术简介 离心技术在生物科学，特别是在生物化学和分子生物离心技术在生物科学，特别是在生物化学和分子生物学研究领域，已得到十分广泛的应用，
4、每个生物化学和分子学研究领域，已得到十分广泛的应用，每个生物化学和分子生物学实验室都要装备多种型式的离心机。生物学实验室都要装备多种型式的离心机。离心技术主要用于各种生物样品的分离和制备。离心技术主要用于各种生物样品的分离和制备。生物样品悬浮液在高速旋转下，由于巨大的离心力作用，生物样品悬浮液在高速旋转下，由于巨大的离心力作用，使悬浮的微小颗粒（细胞器、生物大分子的沉淀等）以一定使悬浮的微小颗粒（细胞器、生物大分子的沉淀等）以一定的速度沉降，从而与溶液得以分离，而沉降速度取决于颗粒的速度沉降，从而与溶液得以分离，而沉降速度取决于颗粒的质量、大小和密度。的质量、大小和密度。离心力：离心力：当一个
5、粒子（生物大分子或细胞器）在高速旋当一个粒子（生物大分子或细胞器）在高速旋转下受到离心力作用时，此离心力转下受到离心力作用时，此离心力“F F”由下式定义，即：由下式定义，即：F=mF=ma=m.Va=m.V2 2/r=m/r=m2 2 r r a a 粒子旋转的加速度，粒子旋转的加速度，m m 沉降粒子的有效质量，沉降粒子的有效质量，粒子旋转的角速度，粒子旋转的角速度，r r粒子的旋转半径粒子的旋转半径(cm)(cm)。离心的基本原理离心的基本原理 相对离心力：相对离心力：离心力常用地球引力的倍数来表示，因而称离心力常用地球引力的倍数来表示，因而称为相对离心力为相对离心力 “RCF RCF”
6、。或者用数字乘。或者用数字乘“g g”来表示。来表示。相对离心力是指在离心场中，作用于颗粒的离心力相当于相对离心力是指在离心场中，作用于颗粒的离心力相当于地球重力的倍数，单位是重力加速度地球重力的倍数，单位是重力加速度“g g”（980cm/sec980cm/sec2 2），），相对离心力相对离心力RCFRCF可用下式计算：可用下式计算：RCF=1.119RCF=1.11910105 5(rpm)(rpm)2 2 r r (rpm(rpm revolutions per minute revolutions per minute每分钟转数，每分钟转数，r/min)r/min)由上式可见，只要给
7、出旋转半径由上式可见，只要给出旋转半径r r，则，则RCFRCF和和rpmrpm之间可之间可以相互换算。但是由于转头的形状及结构的差异，使每台离心以相互换算。但是由于转头的形状及结构的差异，使每台离心机的离心管，从管口至管底的各点与旋转轴之间的距离是不一机的离心管，从管口至管底的各点与旋转轴之间的距离是不一样的，所以在计算时规定旋转半径均用平均半径样的，所以在计算时规定旋转半径均用平均半径“r ra va v”代替：代替：r ra va v=(r=(r minminr rmaxmax)/2)/2 Rmin旋转轴RaveRmaxr的测量的测量 离心机可分为离心机可分为工业用离心机和实验用离心机工
8、业用离心机和实验用离心机 实验用离心机又分为：实验用离心机又分为：制备型离心机：制备型离心机：主要用于分离各种生物材料，每次分主要用于分离各种生物材料，每次分离的样品容量比较大离的样品容量比较大.分析型离心机：分析型离心机：一般都带有光学系统，主要用于研究纯一般都带有光学系统，主要用于研究纯的生物大分子和颗粒的理化性质，依据待测物质在离心场的生物大分子和颗粒的理化性质，依据待测物质在离心场中的行为（用离心机中的光学系统连续监测），能推断物中的行为（用离心机中的光学系统连续监测），能推断物质的纯度、形状和分子量等。质的纯度、形状和分子量等。分析性离心机都是超速离心分析性离心机都是超速离心机。机。
9、工业离心机：主要用于工业上的分离。工业离心机：主要用于工业上的分离。离心机的主要类型离心机的主要类型 制备性离心机可分为三类：制备性离心机可分为三类：普通离心机：普通离心机：最大转速最大转速6000 rpm6000 rpm左右，最大相对离心力近左右，最大相对离心力近60006000g g，容量为几十毫升至几升，容量为几十毫升至几升，高速冷冻离心机：高速冷冻离心机：最大转速为最大转速为200002000025000rpm25000rpm（r/minr/min），），最大相对离心力为最大相对离心力为8900089000g g，最大容量可达，最大容量可达3 3升，升，超速离心机：超速离心机：转速可达
10、转速可达500005000080000 rpm80000 rpm，相对离心力最，相对离心力最大可达大可达510000510000g g，最著名的生产厂商有美国的贝克曼，最著名的生产厂商有美国的贝克曼公司和日本的日立公司等，离心容量由几十毫升至公司和日本的日立公司等，离心容量由几十毫升至2 2升升超速离心超速离心机机（2 2）分光光度计）分光光度计 分光光度计是现代生化分光光度计是现代生化及分子生物学实验室常规仪及分子生物学实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。以及细菌生长浓度的定量。基本原理基本原理（3 3）电热恒温水浴锅）电热恒温水浴锅三、试剂配
11、制三、试剂配制 1.1.确定所配试剂浓度确定所配试剂浓度重量浓度：重量浓度：单位体积中所含溶质的重量。表示为克单位体积中所含溶质的重量。表示为克/升（升（g/Lg/L），），或毫克或毫克/升（升（mg/Lmg/L），微克），微克/升（升（ug/Lug/L）百分浓度：百分浓度：%，需注明，需注明W/W,W/V,V/VW/W,W/V,V/V摩尔浓度：摩尔浓度：每升溶液中所含溶质的摩尔数。每升溶液中所含溶质的摩尔数。mol/L,mmol/L,mol/L,mmol/L,umol/Lumol/L 2.2.准确称量、量取准确称量、量取3.3.溶解溶解四、实验误差与克服四、实验误差与克服 由于外界条件的影响
12、、仪器的优劣以及感觉器官的限制，由于外界条件的影响、仪器的优劣以及感觉器官的限制，实验测得的数据只能达到一定的准确度。实验测得的数据只能达到一定的准确度。实验测得的数据与真实值之间的差就是实验测得的数据与真实值之间的差就是实验误差实验误差 实验误差一般可分为实验误差一般可分为系统误差、偶然误差和过失误差。系统误差、偶然误差和过失误差。在相同条件下多次测量同一物理量时，测量误差的大在相同条件下多次测量同一物理量时，测量误差的大小和符号都不变；在改变测量条件时，它又按照某一确定小和符号都不变；在改变测量条件时，它又按照某一确定规律而变化的测量误差称为系统误差。规律而变化的测量误差称为系统误差。系统
13、误差的特点：系统误差的特点：和偶然误差不同，它不具有抵偿性，即在相同条件下和偶然误差不同，它不具有抵偿性，即在相同条件下重复多次测量，系统误差无法相互抵消。重复多次测量，系统误差无法相互抵消。产生系统误差的诸因素是可以被发现和加以克服的。产生系统误差的诸因素是可以被发现和加以克服的。消除产生系统误差的根源消除产生系统误差的根源 从产生误差的根源上消除系统误差是最根本的方法。通过对测量过程中可能产生系统误差的各种环节作仔细分析，找出原因并在测量前加以消除。如果系统误差是由外界条件变化引起的，应在外界条件比较稳定时进行测量。采用修正法消除系统误差采用修正法消除系统误差 预先将仪器的系统误差检定出来
14、或计算出来，做出误差表或误差曲线，然后取与误差数值大小相同、符号相反的值作为修正值，进行误差修正。即：x真=x测+x修 如天平砝码不准，应采用标准砝码进行校核，确定每个砝码的修正值。在称量时就应加上相应砝码的修正值，容量瓶、滴定管、移液管等容量仪器均可用水重量法求出各自的修正值。对消法消除系统误差对消法消除系统误差 进行两次测量，使两次读数时出现的系统误差大小相等、符号相反。两次测量值的平均值作为测量结果，以消除系统误差。例如，由于仪器灵敏度的限制，测量仪器的旋钮由右边调近测量值与由左边调近测量值的结果往往不同。这时，可取两个读数的平均值作为测量值。在实验时即使采用了最完善的仪器、选择了最恰当
15、的方法、经过了十分精细的观测，所测得的数据也不可能每次重复，这样的误差即为偶然误差偶然误差的克服偶然误差的克服 偶然误差是由于相互制约、相互作用的一些偶然因素所造成的，它有时大、有时小、有时正、有时负，方向不一定，大小和符号一般服从正态分布规律。偶然误差可采取多次测量，取平均值的办法来消除，而且测量次数越多（在没有系统误差存在的情况下），平均值就接近于真值。五、实验室安全知识简介（一）实验室安全1.安全用电2.水火无情3.严防中毒4.避免伤害5.生物危害6.射线伤害（二）实验室灭火（二）实验室灭火1.1.切断室内所有电源，火源切断室内所有电源，火源2.2.报警报警3.3.导线着火时，切断电源或
16、使用四氯化碳灭火器，不导线着火时，切断电源或使用四氯化碳灭火器，不能用水及二氧化碳灭火器，以免触电能用水及二氧化碳灭火器，以免触电4.4.可燃性液体着火时，可用湿布或沙土覆盖，隔绝空可燃性液体着火时，可用湿布或沙土覆盖，隔绝空气灭火。不能用水灭火，这样会扩大燃烧面积。气灭火。不能用水灭火，这样会扩大燃烧面积。5.5.金属钠着火时可用砂子覆盖金属钠着火时可用砂子覆盖6.6.衣服着火切忌奔走，应卧地滚动灭火。衣服着火切忌奔走，应卧地滚动灭火。（三）实验室急救1.1.触电触电2.2.玻璃割伤及其他机械损伤玻璃割伤及其他机械损伤3.3.烫伤烫伤4.4.化学试剂灼伤化学试剂灼伤5.5.汞中毒汞中毒六、实验记录及实验报告 每次实验要做到课前认真预习，实验操作中仔细观察并如实记录实验现象与数据，课后及时完成实验报告。课前预习 实验课前要将实验名称、目的和要求、实验内容与原理、操作方法和步骤等简单扼要地写在记录本中，做到心中有数。实验记录 准备一本正规的笔记本作为实验记录本。将实验条件下观察到的现象仔细地记录下来。将实验中观测的每个结果和数据及时如实地记录。实验中使用仪器的类型、编号以及试剂的规格、化学式、分子量、准确的浓度等，也应记录清楚。
