1、基于第二代高通量测序的黄腻苔舌面菌群分析目录1234研究目的研究方法研究结果研究结论 中医学范畴上的舌面微生态研究是一个学科交叉的领域，也是一个很值得深入研究的领域。从微生态学角度研究舌苔微生物群落的聚集情况，可以进一步深化中医舌诊的微观化研究,同时为临床诊断提供依据。1研究目的 利用第二代高通量测序技术探究病理黄腻苔、生理黄腻苔及健康薄白苔之间门与属水平上菌群的聚集情况。2研究方法 技术路线图 在受采者早间未刷牙和未进食的情况下，嘱咐其用生理盐水漱口后，利用医用一次性木质压舌板由舌根处往舌尖方向力度适中刮取舌苔，并收集于装有5 mL生理盐水的的无菌管中，置于冰盒内，于20 低温冰箱保存备用。
2、采集方法 样本均符合国家规划教材中医诊断学、中医舌诊图谱（中英对照）等文献对黄腻苔和健康舌苔的定义。且其中生理黄腻苔组与健康舌苔组经询问均既往无重大疾患、近期身体无明显不适、无近1周内服用抗生素者。纳入标准排除标准口腔炎症或牙周疾病者孕期或哺乳期妇女过敏体质或对多种药物过敏者分组情况病理黄腻苔组（病理黄腻苔组（A A组）组）江西省中医院住院部江西省中医院住院部抽选抽选5050名黄腻苔患者名黄腻苔患者生理黄腻苔组（生理黄腻苔组（B B组）组）江西中医药大学江西中医药大学5050名名近期身体没有明显不近期身体没有明显不适及疾病但舌苔为黄适及疾病但舌苔为黄腻苔的在校师生腻苔的在校师生健康舌苔组（健康
3、舌苔组（C C组组）江西中医药大学江西中医药大学5050名名舌苔为淡红舌薄白苔舌苔为淡红舌薄白苔在校师生在校师生 使用细菌基因组DNA提取试剂盒对150例样本的细菌总DNA进行提取。利用1%琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计对抽提的基因组DNA进行浓度及纯度检测，筛选出优质样本。3研究结果 筛选结果共35例ABC病理黄腻苔组12例，男11例，女1例生理黄腻苔组12例，男6例，女6例健康舌苔组11例，男5例，女6例Shannon-Wiener曲线 Shannon值与样本菌群的多样性是呈正相关的关系。当横坐标小于2500条序列时，随测序序列数增加，Shannon指数随着大幅增加；当横坐标大于5000条
4、序列后，曲线逐渐趋向于平坦，而本研究样本序列数在25000条序列以上，证明本次测序数据量足够大，足以反映样本中绝大多数的微生物信息，适合进行进一步分析。3组样本LEfSE统计结果图3组样本LEfSE统计结果进化树图 与细菌数据库进行比对后共发现样本中有12门、23纲、39目、66科、133属、246种的细菌。LefSe分析常用与来找出导致不同组别样本在物种丰度上产生显著差异的物种。如上面两幅所示，A组主要富集蓝藻菌门和Saccharibacteria两个门，Negativicutes一个纲，放线菌目和红蝽菌目两个目的细菌；B组主要富集Flavobactria和Erysipelotrichia两
5、个纲，Candiobacteriales、弯曲菌目和脱硫杆菌目三个目，消化球菌科一个科的细菌；C组主要富集互养菌门和变形菌门两个门，消化链球菌科和紫单胞菌科两个科的细菌。门水平Heatmap图 由上图可知，3组样本有着相似的群落结构，其门水平上有5种优势菌门：Firmicutes（厚壁菌门），Proteobacteria（变形菌门），Fusobacteria（梭杆菌门），Actinobacteria（放线菌门）和Bacteroidetes（拟杆菌门）；在门水平上较多的菌门在3组样本中有明显的聚集，3组样本的菌落组成存在差异，在A组中Firmicutes（厚壁菌门）和Bacteroidetes（
6、拟杆菌门）聚集明显；而Proteobacteria（变形菌门）在B组和C组中有明显聚集。属水平Heatmap图 由上图可知，在属水平上3组样本的菌落组成存在差异，较多的菌属在3组样本中同样有明显的聚集，13种菌属：普雷沃菌属-7，奈瑟氏菌属，韦荣球菌属，链球菌属，纤毛菌属，普雷沃菌属，放线菌属，嗜血杆菌属，梭杆菌属，颗粒链菌属，卟啉单胞菌属，拟普雷沃菌属，罗氏菌属在3组中有明显聚集。但其中Prevotella-7（普雷沃菌属-7）和Veillonella（韦荣球菌属）在A组中聚集明显；Neisseria（奈瑟氏菌属）和Streptococcus（链球菌属）在B组与C组中聚集更为明显。4研究结果 在属水平上，Prevotella-7（普雷沃菌属-7）和Veillonella（韦荣球菌属）在病理性黄腻苔中聚集明显；Neisseria（奈瑟氏菌属）和Streptococcus（链球菌属）在生理性黄腻苔和健康薄白苔中聚集更为明显。目前中医层面上对舌面微生态的研究多限于微生物种群和分布的多样性，其行为多样性、代谢多样性和遗传多样性的研究还待深入。我们团队将在本次研究的基础上对上述领域进行更加深入地研究。
