1、第六章 酶第六章 酶 第一节 酶是生物催化剂一、酶特点：酶的主要成分是蛋白质，极易受外界条件的影响，所以酶作用一般都要求比较温和的条件，如常温、常压、接近中性的酸碱度。酶的催化效应非常高，酶促反应比相应的非酶促反应要快1061012倍，如存在于血液中的碳酸酐酶，其催化效率是每个酶分子在一秒钟内可以使105个二氧化碳分子发生水合反应生成碳酸，比非酶促反应要快107倍。酶具有高度的专一性，即酶对催化的反应和所作用的物质有严格的选择性。一种酶往往只能催化一种或一类化学反应，作用于某一类或某一种特定的物质。酶作用的专一性是酶最重要的特点之一，也是和一般化学催化剂最主要的区别。酶的催化活性是受到调节和控
2、制的。它的调控方式很多，包括变构调节、抑制剂调节、共价修饰调节、酶原激活及激素控制等。酶可催化某些特异的化学反应，体内某些物质的合成只能由酶促反应完成。（一）酶促反应具有极高的效率（一）酶促反应具有极高的效率 二、酶促反应的特点二、酶促反应的特点酶的催化效率通常比非催化反应高酶的催化效率通常比非催化反应高10108 810102020倍，倍，比一般催化剂高比一般催化剂高10107 710101313倍。倍。酶的催化不需要较高的反应温度。酶的催化不需要较高的反应温度。酶和一般催化剂加速反应的机理都是降低反应酶和一般催化剂加速反应的机理都是降低反应的活化能的活化能(activation energ
3、y)(activation energy)。酶比一般催。酶比一般催化剂更有效地降低反应的活化能。化剂更有效地降低反应的活化能。一种酶仅作用于一种或一类化合一种酶仅作用于一种或一类化合物，或一定的化学键，催化一定的化物，或一定的化学键，催化一定的化学反应并生成一定的产物。酶的这种学反应并生成一定的产物。酶的这种特性称为酶的特异性或专一性特性称为酶的特异性或专一性。n酶的特异性酶的特异性(specificity)（二）酶促反应具有高度的特异性（二）酶促反应具有高度的特异性n根据酶对其底物结构选择的严格程度不同，酶的特异性根据酶对其底物结构选择的严格程度不同，酶的特异性可大致分为以下可大致分为以下3
4、种类型：种类型：绝对特异性绝对特异性(absolute specificity)：只能作用于特定结构：只能作用于特定结构的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产物物。相对特异性相对特异性(relative specificity)：作用于一类化合物或：作用于一类化合物或一种化学键。一种化学键。立体结构特异性立体结构特异性(stereospecificity)：作用于立体异构体：作用于立体异构体中的一种。中的一种。（三）酶促反应的可调节性（三）酶促反应的可调节性酶促反应受多种因素的调控，以适应酶促反应受多种因素的调控，以适应机体对不断变化的
5、内外环境和生命活动的机体对不断变化的内外环境和生命活动的需要。需要。第三第三 节节 酶的命名与分类酶的命名与分类The Naming and Classification of Enzyme （一）酶可根据其催化的反应类型予以分类（一）酶可根据其催化的反应类型予以分类1.氧化还原酶类氧化还原酶类(oxidoreductases)2.转移酶类转移酶类(transferases)3.水解酶类水解酶类(hydrolases)4.裂解酶类裂解酶类(lyases)5.异构酶类异构酶类(isomerases)6.合成酶类合成酶类(synthetases,ligases)n根据酶反应的类型，酶可分为六大类，
6、其排序如下根据酶反应的类型，酶可分为六大类，其排序如下:（二）每一种酶均有其系统名称和推荐名称（二）每一种酶均有其系统名称和推荐名称系统名称系统名称(systematic name)推荐名称推荐名称(recommended name)酶的分类酶的分类氧化还原酶类氧化还原酶类转移酶类转移酶类水解酶类水解酶类 裂解酶类裂解酶类 异构酶类异构酶类连接酶类连接酶类催化的化学反应举催化的化学反应举例例乙醛乙醛+NADH+H+草酰乙酸草酰乙酸+L-谷氨酸谷氨酸D-葡萄糖葡萄糖+H3PO4磷酸二羟丙酮磷酸二羟丙酮+醛醛D-果糖果糖-6-磷酸磷酸L-谷氨酰胺谷氨酰胺+ADP+磷酸磷酸系统名称系统名称乙醇：乙醇
7、：NAD+氧化还原酶氧化还原酶L-天冬氨酸：天冬氨酸：-酮戊二酸酮戊二酸 氨氨基转移酶基转移酶D-葡糖葡糖-6-磷酸水解酶磷酸水解酶酮糖酮糖-1-磷酸裂解酶磷酸裂解酶D-葡糖葡糖-6-磷酸磷酸 酮酮-醇异构酶醇异构酶L-谷氨酸：氨连接酶谷氨酸：氨连接酶EC编号编号EC 1.1.1.1EC 2.6.1.1EC 3.1.3.9EC 4.1.2.7EC 5.3.1.9EC 6.3.1.2推荐名称推荐名称乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶天冬氨酸转天冬氨酸转氨酶氨酶葡糖葡糖6-磷酸酶磷酸酶 醛缩酶醛缩酶 磷酸果糖异磷酸果糖异构酶构酶谷氨酰胺合谷氨酰胺合成酶成酶一些酶的分类与命名一些酶的分类与命名第二节第二节 酶的化
8、学本质与结构酶的化学本质与结构一、酶的化学本质与分子组成一、酶的化学本质与分子组成蛋白质部分：酶蛋白蛋白质部分：酶蛋白 (apoenzyme)辅助因子辅助因子(cofactor)金属离子金属离子小分子有机化合物小分子有机化合物全酶全酶(holoenzyme)n结合酶结合酶(conjugated enzyme)二、酶蛋白的结构二、酶蛋白的结构酶分子中氨基酸残基侧链的化学基团酶分子中氨基酸残基侧链的化学基团中，一些与酶活性密切相关的化学基团。中，一些与酶活性密切相关的化学基团。n必需基团必需基团(essential group)必需基团活性中心或活性部位活性中心外的必需基团底物结合部位催化部位指必
9、需基团在空间结构上彼此靠近，组指必需基团在空间结构上彼此靠近，组成具有特定空间结构的区域，能与底物特异成具有特定空间结构的区域，能与底物特异结合并将底物转化为产物。结合并将底物转化为产物。n酶的活性中心酶的活性中心(active center)活性中心内的必需基团活性中心内的必需基团结合基团结合基团binding groupbinding group催化基团催化基团(catalytic group)(catalytic group)催化底物转变成产物催化底物转变成产物 位于活性中心以外，维持酶活性中心应有位于活性中心以外，维持酶活性中心应有的空间构象和（或）作为调节剂的结合部位所的空间构象和（
10、或）作为调节剂的结合部位所必需。必需。活性中心外的必需基团活性中心外的必需基团底底 物物 活性中心以外活性中心以外的必需基团的必需基团结合基团结合基团催化基团催化基团 活性中心活性中心 n溶菌酶的活性中心溶菌酶的活性中心 溶菌酶的活性中心是溶菌酶的活性中心是一裂隙，可以容纳肽一裂隙，可以容纳肽多糖的多糖的6个单糖基（个单糖基（A，B，C，D，E，F），），并与之形成氢键和并与之形成氢键和van derwaals力。力。催化基团是催化基团是35位位Glu，52位位Asp；101位位Asp和和108位位Trp是结合基团。是结合基团。金属酶金属酶(metalloenzyme)金属离子与酶结合紧密，提
11、取过程中不金属离子与酶结合紧密，提取过程中不易丢失。易丢失。金属激活酶金属激活酶(metal-activated enzyme)金属离子为酶的活性所必需，但与酶的金属离子为酶的活性所必需，但与酶的结合不甚紧密。结合不甚紧密。（一）金属离子是最多见的辅助因子（一）金属离子是最多见的辅助因子三、酶的辅助因子与功能三、酶的辅助因子与功能 金属金属离子的作用：离子的作用：参与催化反应，传递电子；参与催化反应，传递电子；在酶与底物间起桥梁作用；在酶与底物间起桥梁作用；稳定酶的构象；稳定酶的构象；中和阴离子，降低反应中的静电斥力等。中和阴离子，降低反应中的静电斥力等。（二）小分子有机化合物是一些化学稳定的
12、小（二）小分子有机化合物是一些化学稳定的小分子物质，称为辅酶分子物质，称为辅酶(coenzyme)。其主要作用是参与酶的催化过程，在反应中其主要作用是参与酶的催化过程，在反应中传递电子、质子或一些基团。传递电子、质子或一些基团。辅酶的种类不多，且分子结构中常含有维生辅酶的种类不多，且分子结构中常含有维生素或维生素类物质。素或维生素类物质。转移的基团转移的基团氢原子（质子）氢原子（质子）醛基醛基酰基酰基烷基烷基二氧化碳二氧化碳氨基氨基甲基、甲烯基、甲炔基、甲基、甲烯基、甲炔基、甲酰基等一碳单位甲酰基等一碳单位小分子有机化合物（辅酶或辅基）小分子有机化合物（辅酶或辅基）名称名称NAD（尼克酰胺腺嘌
13、呤二核苷酸，（尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸，辅酶辅酶INADP（尼克酰胺腺嘌呤二核苷（尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，辅酶酸磷酸，辅酶IIFMN（黄素单核苷酸）（黄素单核苷酸）FAD（黄素腺嘌呤二核苷酸）（黄素腺嘌呤二核苷酸）TPP（焦磷酸硫胺素）（焦磷酸硫胺素）辅酶辅酶A（CoA）硫辛酸硫辛酸钴胺素辅酶类钴胺素辅酶类生物素生物素磷酸吡哆醛磷酸吡哆醛四氢叶酸四氢叶酸所含的维生素所含的维生素尼克酰胺（维生素尼克酰胺（维生素PP）之一）之一尼克酰胺（维生素尼克酰胺（维生素PP）之一）之一维生素维生素B2（核黄素）（核黄素）维生素维生素B2（核黄素）（核黄素）维生素维生素B1（硫胺素）（硫胺素）泛酸泛酸硫辛酸
14、硫辛酸维生素维生素B12生物素生物素吡哆醛（维生素吡哆醛（维生素B6之一）之一）叶酸叶酸某些辅酶（辅基）在催化中的作用某些辅酶（辅基）在催化中的作用n辅酶中与酶蛋白共价结合的辅酶又称为辅基辅酶中与酶蛋白共价结合的辅酶又称为辅基(prosthetic group)。n辅基和酶蛋白结合紧密，不能通过透析或超辅基和酶蛋白结合紧密，不能通过透析或超滤等方法将其除去，在反应中不能离开酶蛋滤等方法将其除去，在反应中不能离开酶蛋白，如白，如FAD、FMN、生物素等。、生物素等。（三）蛋白质类辅助因子（三）蛋白质类辅助因子某些蛋白质也可作为辅助因子，它们自身不起催化作用，但为某些酶所必需。这些辅助因子称基团转
15、移蛋白（group transfer proteins）或蛋白质类辅助因子（protein coenzyme），它们一般是较小的分子，而且比多数酶具有更高的热稳定性。蛋白质类辅助因子参与基团转移反应或氧化还原反应，主要是通过递氢或递电子而起作用 四、酶的结构与功能四、酶的结构与功能（一）酶的活性中心与酶作用的专一性酶作用的专一性主要取决于酶活性中心的结构特异性。（二）空间结构与催化活性酶的活性不仅与一级结构有关，并且与其空间构象紧密相关，在酶活性的表现上，有时空间构象比一级结构更为重要。（三）酶原的激活使无活性的酶原转变（三）酶原的激活使无活性的酶原转变成有催化活性的酶成有催化活性的酶n酶原酶
16、原(zymogen)n酶原的激活酶原的激活n酶原激活的机理酶原激活的机理酶酶 原原分子构象发生改变分子构象发生改变形成或暴露出酶的活性中心形成或暴露出酶的活性中心 一个或几个特定的肽键断裂，水解一个或几个特定的肽键断裂，水解掉一个或几个短肽掉一个或几个短肽在特定条件下在特定条件下赖赖缬缬天天天天天天天天甘甘异异赖赖缬缬天天天天天天天天缬缬组组丝丝甘甘异异缬缬组组丝丝胰蛋白酶原的激活过程胰蛋白酶原的激活过程n 酶原激活的生理意义酶原激活的生理意义避免细胞产生的酶对细胞进行自身消化，避免细胞产生的酶对细胞进行自身消化，并使酶在特定的部位和环境中发挥作用，保证并使酶在特定的部位和环境中发挥作用，保证
17、体内代谢正常进行。体内代谢正常进行。有的酶原可以视为酶的储存形式。在需要有的酶原可以视为酶的储存形式。在需要时，酶原适时地转变成有活性的酶，发挥其催时，酶原适时地转变成有活性的酶，发挥其催化作用。化作用。第三节 酶的作用机制（一）（一）酶比一般催化剂更有效地降低反应活化能酶比一般催化剂更有效地降低反应活化能酶和一般催化剂一样，加速反应的作酶和一般催化剂一样，加速反应的作用都是通过降低反应的活化能用都是通过降低反应的活化能(activation energy)实现的。实现的。活化能：底物分子从初态转变到活化活化能：底物分子从初态转变到活化态所需的能量。态所需的能量。反应总能量改变反应总能量改变
18、非催化反应活化能非催化反应活化能 酶促反应酶促反应 活化能活化能 一般催化剂催一般催化剂催化反应的活化能化反应的活化能 能能量量 反反 应应 过过 程程 底物底物 产物产物 酶促反应活化能的改变酶促反应活化能的改变 （二）酶（二）酶-底物复合物的形成有利于底物转变成底物复合物的形成有利于底物转变成过渡态过渡态 酶底物复合物酶底物复合物E+SE+PES1.诱导契合作用使酶与底物密切结合诱导契合作用使酶与底物密切结合酶与底物相互接近时，其结构相互诱导、相酶与底物相互接近时，其结构相互诱导、相互变形和相互适应，进而相互结合。这一过互变形和相互适应，进而相互结合。这一过程称为酶程称为酶-底物结合的底物
19、结合的诱导契合诱导契合(induced-fit)。2.邻近效应与定向排列使诸底物正确定位于邻近效应与定向排列使诸底物正确定位于酶的活性中心酶的活性中心 酶在反应中将诸底物结合到酶的活性中心，使它酶在反应中将诸底物结合到酶的活性中心，使它们相互接近并形成有利于反应的正确定向关系。们相互接近并形成有利于反应的正确定向关系。这种邻近效应这种邻近效应(proximity effect)与定向排列与定向排列(orientation arrange)实际上是将分子间的反应变实际上是将分子间的反应变成类似于分子内的反应，从而提高反应速率。成类似于分子内的反应，从而提高反应速率。n邻近效应与定向排列：邻近效应
20、与定向排列：酶的活性中心多是酶分子内部的疏水酶的活性中心多是酶分子内部的疏水“口袋口袋”，酶反应在此疏水环境中进行，使底物分子脱溶剂酶反应在此疏水环境中进行，使底物分子脱溶剂化化(desolvation)，排除周围大量水分子对酶和底，排除周围大量水分子对酶和底物分子中功能基团的干扰性吸引和排斥，防止水物分子中功能基团的干扰性吸引和排斥，防止水化膜的形成，利于底物与酶分子的密切接触和结化膜的形成，利于底物与酶分子的密切接触和结合。这种现象称为表面效应合。这种现象称为表面效应(surface effect)。3.表面效应使底物分子去溶剂化表面效应使底物分子去溶剂化（三）酶的催化机制呈多元催化作用（
21、三）酶的催化机制呈多元催化作用1.一般酸一般酸-碱催化作用碱催化作用(general acid-base catalysis)2.共价催化作用共价催化作用(covalent catalysis)3.亲核催化作用亲核催化作用(nucleophilic catalysis)第四节第四节 酶促反应的动力学酶促反应的动力学Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction n酶促反应动力学：酶促反应动力学：研究各种因素对酶促反应研究各种因素对酶促反应速率的影响，并加以定量的阐述。速率的影响，并加以定量的阐述。n影响因素包括：影响因素包括：酶浓度、底物浓度、酶浓度、底物浓度、pH
22、、温、温度、抑制剂、激活剂等。度、抑制剂、激活剂等。一、底物浓度对反应速率影响的作一、底物浓度对反应速率影响的作图呈矩形双曲线图呈矩形双曲线在其他因素不在其他因素不变的情况下，底物变的情况下，底物浓度对反应速率的浓度对反应速率的影响呈矩形双曲线影响呈矩形双曲线关系。关系。单底物、单产物反应；单底物、单产物反应；酶促反应速率一般在规定的反应条件下，用酶促反应速率一般在规定的反应条件下，用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示；表示；反应速率取其初速率，即底物的消耗量很小反应速率取其初速率，即底物的消耗量很小（一般在（一般在5以内）时的反应速率以内）时的反
23、应速率底物浓度远远大于酶浓度。底物浓度远远大于酶浓度。n研究前提：研究前提：当底物浓度较低时：当底物浓度较低时：反应速率与底物浓度成正比；反应为反应速率与底物浓度成正比；反应为一级反应。一级反应。随着底物浓度的增高：随着底物浓度的增高：反应速率不再成正比例加速；反应为反应速率不再成正比例加速；反应为混合级反应。混合级反应。当底物浓度高达一定程度：当底物浓度高达一定程度：反应速率不再增加，达最大速率；反反应速率不再增加，达最大速率；反应为零级反应应为零级反应中间产物中间产物 解释酶促反应中底物浓度和反应速率关系的解释酶促反应中底物浓度和反应速率关系的最合理学说是中间产物学说：最合理学说是中间产物
24、学说：E+S k1k2k3ESE+P 1913年年Michaelis和和Menten提出反应速率与底物提出反应速率与底物浓度关系的数学方程式，即米曼氏方程式，简浓度关系的数学方程式，即米曼氏方程式，简称米氏方程式称米氏方程式(Michaelis equation)。S：底物浓度：底物浓度V：不同：不同S时的反应速率时的反应速率Vmax：最大反应速率：最大反应速率(maximum velocity)m：米氏常数：米氏常数(Michaelis constant)VmaxS Km+S 1.E与与S形成形成ES复合物的反应是快速平衡反应，复合物的反应是快速平衡反应，而而ES分解为分解为E及及P的反应为
25、慢反应，反应速率的反应为慢反应，反应速率取决于慢反应即取决于慢反应即 V=k3ES。(1)2.S的总浓度远远大于的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的的总浓度，因此在反应的初始阶段，初始阶段，S的浓度可认为不变即的浓度可认为不变即S=St。米曼氏方程式推导基于两个假设：米曼氏方程式推导基于两个假设：n米曼氏方程式推导过程：米曼氏方程式推导过程：ES的生成速率的生成速率=ES的分解速率的分解速率k2+k3=Km（米氏常数）（米氏常数）k1令：令：则则(2)(2)变为变为:(EtES)S=Km ES(2)=(EtES)Sk2+k3ES k1整理得：整理得：k1(EtES)S=k2 ES+k3 E
26、S 当反应处于稳态时：当反应处于稳态时：当底物浓度很高，将酶的活性中心全部饱和时，当底物浓度很高，将酶的活性中心全部饱和时，即即Et=ES，反应达最大速率反应达最大速率Vmax=k3ES=k3Et (5)ES=EtSKm+S(3)整理得整理得:将将(5)(5)代入代入(4)(4)得米氏方程式：得米氏方程式：Vmax S Km+S V=将将(3)(3)代入代入(1)(1)得得k3EtS Km+S(4)V=（二）（二）Km与与Vm是有意义的酶促反应动力学是有意义的酶促反应动力学参数参数nKm值的推导值的推导nKm与与Vmax的意义的意义n Km值的推导值的推导Km=S Km值等于酶促反应速率为最大
27、反应速率一半值等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度，单位是时的底物浓度，单位是mol/L。2=Km+S Vmax VmaxSn Km与与Vmax的意义的意义定义：定义：Km等于酶促反应速率为最大反应速率一等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度。半时的底物浓度。意义：意义：Km是酶的特征性常数之一，只与酶的结构、是酶的特征性常数之一，只与酶的结构、底物和反应环境（如，温度、底物和反应环境（如，温度、pH、离子强、离子强度）有关，与酶的浓度无关。度）有关，与酶的浓度无关。Km可近似表示酶对底物的亲和力；可近似表示酶对底物的亲和力；同一酶对于不同底物有不同的同一酶对于不同底物有不同
28、的Km值。值。Km值值 Vmax意义：意义：Vmax=k3 E 定义：定义：Vm是酶完全被底物饱和时的反应速率，是酶完全被底物饱和时的反应速率，与酶浓度成正比。与酶浓度成正比。如果酶的总浓度已知，可从如果酶的总浓度已知，可从Vmax计算计算酶的转换数酶的转换数(turnover number)，即动力学常，即动力学常数数k3。定义定义:当酶被底物充分饱和时，单位时间内每当酶被底物充分饱和时，单位时间内每个酶分子催化底物转变为产物的分子数。个酶分子催化底物转变为产物的分子数。意义意义:可用来比较每单位酶的催化能力。可用来比较每单位酶的催化能力。n酶的转换数酶的转换数(turnover numbe
29、r)1.双倒数作图法双倒数作图法(double reciprocal plot)，又称为，又称为 林林-贝氏贝氏(Lineweaver-Burk)作图法作图法（林贝氏方程）（林贝氏方程）（三）（三）m值与值与max值可以通过作图法求取值可以通过作图法求取-1/Km2.Hanes作图法作图法-Km 二、底物足够时酶浓度对反应速率的二、底物足够时酶浓度对反应速率的影响呈直线关系影响呈直线关系在酶促反应系统中，当底物浓度大大超过在酶促反应系统中，当底物浓度大大超过酶的浓度，酶被底物饱和时，反应速率达酶的浓度，酶被底物饱和时，反应速率达最大速率。此时，反应速率和酶浓度变化最大速率。此时，反应速率和酶浓
30、度变化呈正比关系。呈正比关系。当当SE，酶可被，酶可被底物饱和的情况下，反底物饱和的情况下，反应速率与酶浓度成正比。应速率与酶浓度成正比。关系式为：关系式为：V=k3 E0 VE当当SE时，时，Vmax=k3 E酶浓度对反应速率的影响酶浓度对反应速率的影响三、温度对反应速率的影响具三、温度对反应速率的影响具有双重性有双重性温度对酶促反应速率具有双重影响。温度对酶促反应速率具有双重影响。酶促反应速率最快时反应体系的温度称酶促反应速率最快时反应体系的温度称为酶促反应的最适温度为酶促反应的最适温度(optimum temperature)。n温度对淀粉温度对淀粉酶活性的影酶活性的影响响酶的最适温度不
31、是酶的特征性常数，它酶的最适温度不是酶的特征性常数，它与反应进行的时间有关。与反应进行的时间有关。酶的活性虽然随温度的下降而降低，但酶的活性虽然随温度的下降而降低，但低温一般不使酶破坏。温度回升后，酶低温一般不使酶破坏。温度回升后，酶又恢复其活性。又恢复其活性。四、四、pH通过改变酶和底物分子解离通过改变酶和底物分子解离状态影响反应速率状态影响反应速率酶催化活性最高时反应体系的酶催化活性最高时反应体系的pH称为酶称为酶促反应的最适促反应的最适pH(optimum pH)。npH对某些酶对某些酶活性的影响活性的影响最适最适pH不是酶的特征性常数，它受不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与
32、浓度、以及底物浓度、缓冲液种类与浓度、以及酶纯度等因素的影响。酶纯度等因素的影响。五、抑制剂可逆地或不可逆地降五、抑制剂可逆地或不可逆地降低酶促反应速率低酶促反应速率n酶的抑制剂酶的抑制剂(inhibitor)n酶的抑制区别于酶的变性：酶的抑制区别于酶的变性：抑制剂对酶有一定选择性抑制剂对酶有一定选择性 引起变性的因素对酶没有选择性引起变性的因素对酶没有选择性凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白 变性的物质称为酶的抑制剂。变性的物质称为酶的抑制剂。n抑制作用的类型抑制作用的类型不可逆性抑制不可逆性抑制(irreversible inhibition)可逆性抑
33、制可逆性抑制(reversible inhibition)竞争性抑制竞争性抑制 (competitive inhibition)非竞争性抑制非竞争性抑制 (non-competitive inhibition)反竞争性抑制反竞争性抑制 (uncompetitive inhibition)根据抑制剂和酶结合的紧密程度不同，根据抑制剂和酶结合的紧密程度不同，酶的抑制作用分为：酶的抑制作用分为：有机磷化合物有机磷化合物 羟基酶羟基酶解毒解毒 -解磷定解磷定(PAM)重金属离子及砷化合物重金属离子及砷化合物 巯基酶巯基酶解毒解毒 -二巯基丙醇二巯基丙醇(BAL)n概念概念n举例举例抑制剂通常以共价键与
34、酶活性中心的抑制剂通常以共价键与酶活性中心的必需基团相结合，使酶失活。必需基团相结合，使酶失活。ESSAsCHCHCl+CH2SHCHSHCH2OHESHSH+CH2SCHSCH2OHAsCHCHClROROPOX+HOEROROPOOE+HXClAsClCHCHCl+ESHSHESAsSCHCHCl+2HCl有机磷化合物有机磷化合物路易士气路易士气失活的酶失活的酶羟基酶羟基酶失活的酶失活的酶酸酸巯基酶巯基酶失活的酶失活的酶酸酸BALBAL巯基酶巯基酶BALBAL与砷剂结合物与砷剂结合物（二）（二）可逆性抑制作用可逆性抑制作用竞争性抑制竞争性抑制非竞争性抑制非竞争性抑制反竞争性抑制反竞争性抑制
35、 n类型类型n概念概念抑制剂通常以非共价键与酶或酶抑制剂通常以非共价键与酶或酶-底物复合物可逆性结合，使酶的活性降底物复合物可逆性结合，使酶的活性降低或丧失；抑制剂可用透析、超滤等方低或丧失；抑制剂可用透析、超滤等方法除去。法除去。1.1.竞争性抑制作用的抑制剂与底物竞争结合酶竞争性抑制作用的抑制剂与底物竞争结合酶的活性中心的活性中心 有些抑制剂与底物的结构相似，能有些抑制剂与底物的结构相似，能与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶与底物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复合物的形成。底物复合物的形成。这种抑制作用称这种抑制作用称为竞争性抑制作用。为竞争性抑制作用。n定义定义n反应模式反应模式+ES
36、IESEIPEEn特点特点抑制程度取决于抑制程度取决于抑制剂与酶的相对抑制剂与酶的相对亲和力及底物浓度；亲和力及底物浓度；I与与S结构类似，竞结构类似，竞争酶的活性中心；争酶的活性中心；动 力 学 特 点：动 力 学 特 点：Vmax不变，表观不变，表观Km增大。增大。抑制剂抑制剂 无抑制剂无抑制剂1/V 1/S VSmaxVIK(1)SmKiiKI111m(1)VVKSVmaxmaxn举例举例丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶COOH CH2 CH2COOH COOH COOH CH2 丙二酸丙二酸琥珀酸琥珀酸琥珀酸脱氢酶琥珀酸脱氢酶FADFADH2延胡索酸延胡索酸
37、磺胺类药物的抑菌机制磺胺类药物的抑菌机制与对氨基苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶与对氨基苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶二氢蝶呤啶二氢蝶呤啶 对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸 谷氨酸谷氨酸二氢叶酸二氢叶酸合成酶合成酶二氢叶酸二氢叶酸COOH H2N SO2NHR H2N 磺磺 胺胺 类类 药药 物物有些抑制剂与酶活性中心外的必需有些抑制剂与酶活性中心外的必需基团相结合，不影响酶与底物的结合，基团相结合，不影响酶与底物的结合，酶和底物的结合也不影响酶与抑制剂的酶和底物的结合也不影响酶与抑制剂的结合。底物和抑制剂之间无竞争关系。结合。底物和抑制剂之间无竞争关系。但酶但酶-底物底物-抑制剂复合物抑制剂复合物(ESI)不能进
38、一步不能进一步释放出产物。这种抑制作用称作非竞争释放出产物。这种抑制作用称作非竞争性抑制作用。性抑制作用。2.2.非竞争性抑制作用的抑制剂不改变酶对非竞争性抑制作用的抑制剂不改变酶对底物的亲和力底物的亲和力 n定义定义n反应模式反应模式+S S+S S+ESIEIEESEPn特点特点抑制剂与酶活性中抑制剂与酶活性中心外的必需基团结心外的必需基团结合，底物与抑制剂合，底物与抑制剂之间无竞争关系；之间无竞争关系；抑制程度取决于抑抑制程度取决于抑制剂的浓度；制剂的浓度；动 力 学 特 点：动 力 学 特 点：Vmax降低，表观降低，表观Km不变。不变。抑制剂抑制剂1/V 1/S 无抑制剂无抑制剂 i
39、iKI11I1m(1)(1)VVKSVKmaxmax抑制剂仅与酶和底物形成的中间产抑制剂仅与酶和底物形成的中间产物物(ES)结合，使中间产物结合，使中间产物ES的量下降。的量下降。这样，既减少从中间产物转化为产物的这样，既减少从中间产物转化为产物的量，也同时减少从中间产物解离出游离量，也同时减少从中间产物解离出游离酶和底物的量。这种抑制作用称为反竞酶和底物的量。这种抑制作用称为反竞争性抑制作用。争性抑制作用。n定义定义3.3.反竞争性抑制作用的抑制剂仅与酶反竞争性抑制作用的抑制剂仅与酶-底物复合物底物复合物结合结合 n反应模式反应模式+ESESESIEPn特点：特点：抑制剂只与酶底抑制剂只与酶
40、底物复合物结合；物复合物结合；抑制程度取决与抑制程度取决与抑制剂的浓度及底抑制剂的浓度及底物的浓度；物的浓度；动力学特点：动力学特点：Vmax降低，表观降低，表观Km降降低。低。抑制剂抑制剂 1/V 1/S 无抑制剂无抑制剂 各种可逆性抑制作用的比较各种可逆性抑制作用的比较 动力学参数动力学参数表观表观Km Km增大增大不变不变减小减小最大速度最大速度Vmax不变不变降低降低降低降低林林-贝氏作图贝氏作图斜率斜率Km/Vmax增大增大增大增大不变不变纵轴截距纵轴截距1/Vmax不变不变增大增大增大增大横轴截距横轴截距-1/Km增大增大不变不变减小减小与与I结合的组分结合的组分EE、ESES作用
41、特征作用特征无抑制剂无抑制剂竞争性抑制竞争性抑制非竞争性抑制非竞争性抑制反竞争性抑制反竞争性抑制六、激活剂可加快酶促反应速率六、激活剂可加快酶促反应速率n定义定义使酶由无活性变为有活性或使酶活性使酶由无活性变为有活性或使酶活性增加的物质称为激活剂增加的物质称为激活剂(activator)。n种类种类必需激活剂必需激活剂(essential activator)非必需激活剂非必需激活剂(non-essential activator)第五节第五节 酶的分离、提纯及活性测定酶的分离、提纯及活性测定一、酶的分离与提纯一、酶的分离与提纯(一)酶的抽提1破碎细胞膜2抽提 一般的酶都可以用稀盐、稀酸或稀碱
42、的水溶液在低温下抽提出来。(二)纯化 分离纯化的方法很多，常用的有盐析法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法及吸附分离法等。第一次比活力每次比活力第一次总活力每次总活力比活力(纯度)=活力单位数/毫克蛋白。在酶的纯化工作中还要计算纯化倍数和产率，即回收率。产率=纯化步骤匀浆液等电点沉淀DEAE柱色谱CM柱色谱总蛋白mg1.4106410481035103总活力I.U.2.81061.410611069105比活力I.U./mg235125180回收率100503632纯化倍数117.562.590一、寡聚酶寡聚酶(oligomeric enzyme)含有2个以上的亚基，多的可含60个亚基，巧妙地结合
43、成具有催化活性的酶。寡聚酶可分为含有相同亚基的寡聚酶和含有不同亚基的寡聚酶两大类。1含相同亚基的寡聚酶 许多参与体内物质代谢的酶不是简单的单体蛋白质而是由不同数目亚基所组成的寡聚蛋白质，而且它们所含的亚基的一级结构都是相同的。现已证实单体酶(如胃蛋白酶、胰蛋白酶等蛋白水解酶)为数不多，而寡聚酶则普遍存在。如鼠肝苹果酸脱氢酶含2个亚基，酵母己糖激酶含4个亚基，大肠杆菌谷氨酰胺合成酶含12个亚基。2含不同亚基的寡聚酶3寡聚酶的意义 由于寡聚酶的多重亚基结构，所以在机体代谢活动中具有重要作用。如某些酶促反应必须由具有不同功能的亚基互相连接，协调配合，才能完成 第六节第六节 重要的酶类重要的酶类二、同
44、工酶二、同工酶同工酶同工酶(isoenzyme)是指催化相同的化是指催化相同的化学反应，而酶蛋白的分子结构理化性质乃学反应，而酶蛋白的分子结构理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。至免疫学性质不同的一组酶。n定义定义根据国际生化学会的建议，同工酶是由不同基根据国际生化学会的建议，同工酶是由不同基因编码的多肽链，或由同一基因转录生成的不因编码的多肽链，或由同一基因转录生成的不同同mRNAmRNA所翻译的不同多肽链组成的蛋白质。所翻译的不同多肽链组成的蛋白质。同工酶存在于同一种属或同一个体的不同组织同工酶存在于同一种属或同一个体的不同组织或同一细胞的不同亚细胞结构中，它使不同的或同一细胞的不同亚细胞
45、结构中，它使不同的组织、器官和不同的亚细胞结构具有不同的代组织、器官和不同的亚细胞结构具有不同的代谢特征。这为同工酶用来诊断不同器官的疾病谢特征。这为同工酶用来诊断不同器官的疾病提供了理论依据。提供了理论依据。HHHHHHH MHHMMHMMMMMMMLDH1 (H4)LDH2(H3M)LDH3(H2M2)LDH4(HM3)LDH5 (M4)乳酸脱氢酶的同工酶乳酸脱氢酶的同工酶n举例举例 1n举例举例 2 CK1(BB)CK2(MB)CK3(MM)脑脑 心肌心肌 骨骼肌骨骼肌肌酸激酶肌酸激酶(creatine kinase,CK)同工酶同工酶三、诱导酶 诱导酶(induced enzyme)是
46、指当细胞中加入特定诱导物质而诱导产生的酶。它的含量在诱导物存在下显著增高，这种诱导物往往是该酶底物的类似物或底物本身 四、调节酶调节酶是对代谢调节起特殊作用的酶类。调节酶分子中有活性区和调节区，其催化活力可因与调节剂的结合而改变，有调节代谢反应的功能。调节酶一般可分为共价调节酶(covalently regulatory enzyme)及变构酶(allosteric enzyme)两类。(一)共价调节酶n调节方式调节方式n调节对象：关键酶调节对象：关键酶n变构效应剂变构效应剂(allosteric effector)变构激活剂变构激活剂变构抑制剂变构抑制剂n 变构调节变构调节(alloster
47、ic regulation)n变构酶变构酶(allosteric enzyme)n变构部位变构部位(allosteric site)一些代谢物可与某些酶分子活性中心外的一些代谢物可与某些酶分子活性中心外的某部分可逆地结合，使酶构象改变，从而改变某部分可逆地结合，使酶构象改变，从而改变酶的催化活性，此种调节方式称变构调节。酶的催化活性，此种调节方式称变构调节。（一）变构酶通过变构调节酶的活性（一）变构酶通过变构调节酶的活性一、调节酶实现对酶促反应速率的一、调节酶实现对酶促反应速率的快速调节快速调节n变构酶常为多个亚基构成的寡聚体，具有协变构酶常为多个亚基构成的寡聚体，具有协同效应。同效应。酶的变
48、构调节是体内代谢途径的重要快速酶的变构调节是体内代谢途径的重要快速调节方式之一。调节方式之一。（二）酶的化学修饰调节是通过某些化学（二）酶的化学修饰调节是通过某些化学基团与酶的共价结合与分离实现的基团与酶的共价结合与分离实现的在其他酶的催化作用下，某些酶在其他酶的催化作用下，某些酶蛋白肽链上的一些基团可与某种化学基蛋白肽链上的一些基团可与某种化学基团发生可逆的共价结合，从而改变酶的团发生可逆的共价结合，从而改变酶的活性，此过程称为共价修饰。活性，此过程称为共价修饰。n共价修饰共价修饰(covalent modification)磷酸化与脱磷酸化（最常见）磷酸化与脱磷酸化（最常见）n 常见类型常
49、见类型酶的化学修饰是体内快速调节的另一种重要方式。酶的化学修饰是体内快速调节的另一种重要方式。酶的磷酸化与脱磷酸化酶的磷酸化与脱磷酸化-OHThrSerTyr酶蛋白酶蛋白H2OPi磷蛋白磷酸酶磷蛋白磷酸酶 ATPADP蛋白激酶蛋白激酶ThrSerTyr-O-PO32-酶蛋白酶蛋白1 核酶核酶（ribozyme）又称催化RNA，是具有生物催化活性的RNA。核酶的底物是RNA分子，可催化RNA的切割和剪接。其作用特点是：切割效率低，易被RNase破坏；催化类型包括RNA的转核苷酰反应、水解反应（RNA限制性内切酶的反应）和连接反应（聚合酶活性）等；还可能具有氨基酸酯酶，氨基酰tRNA合成酶和肽基转
50、移酶活性，表明核酶在翻译过程中和核糖体发挥功能中起着重要作用。五、核酶和抗体酶五、核酶和抗体酶 2 2抗体酶是具有酶活性的抗体抗体酶是具有酶活性的抗体将底物的过渡态类似物作为抗原，注入将底物的过渡态类似物作为抗原，注入动物体内产生抗体，则抗体在结构上与动物体内产生抗体，则抗体在结构上与过渡态类似物互相适应并可相互结合。过渡态类似物互相适应并可相互结合。该抗体便具有能催化该过渡态反应的酶该抗体便具有能催化该过渡态反应的酶活性。当抗体和底物结合时，就可使底活性。当抗体和底物结合时，就可使底物转变为过渡态进而发生催化反应。物转变为过渡态进而发生催化反应。这种具有催化功能的抗体分子称为抗体这种具有催化
