1、中药制剂中中药制剂中各类化学成分分析各类化学成分分析第一节第一节 生物碱类成分分析生物碱类成分分析生物碱生物碱 *生物体内含氮有机化合物，碱性生物体内含氮有机化合物，碱性一、概述一、概述含生物碱成分的制剂常选生物碱为检测指标含生物碱成分的制剂常选生物碱为检测指标*一般具有强烈的生理活性，不少一般具有强烈的生理活性，不少 还有毒性，临床使用须十分慎重还有毒性，临床使用须十分慎重（一）生物碱在植物界的分布（一）生物碱在植物界的分布 1 1、发育较低级的植物类群中生物碱分布很少；、发育较低级的植物类群中生物碱分布很少；2 2、发育较高级的植物类群中生物碱分布很广：、发育较高级的植物类群中生物碱分布很
2、广：裸子植物：如麻黄科麻黄属、松柏科松属等裸子植物：如麻黄科麻黄属、松柏科松属等;被子植物被子植物(单子叶单子叶)：如百合科、石蒜科等；：如百合科、石蒜科等；被子植物被子植物(双子叶双子叶)：如毛茛科、罂粟科、：如毛茛科、罂粟科、木兰科、小檗科等；木兰科、小檗科等；3 3、生物碱类型越特殊，其分布的植物类群越窄、生物碱类型越特殊，其分布的植物类群越窄（二）生物碱的存在形式（二）生物碱的存在形式1 1、主要存在形式：、主要存在形式：游离碱；游离碱；盐类盐类；酰胺类；酰胺类；N-N-氧化物；氧化物；氮杂缩醛类；烯胺、亚胺等氮杂缩醛类；烯胺、亚胺等.2 2、形成盐类的酸：、形成盐类的酸：草酸、柠檬酸
3、、盐酸、硫酸与硝酸等草酸、柠檬酸、盐酸、硫酸与硝酸等（三）生物碱的分类（三）生物碱的分类 *来源分类：鸦片生物碱、麦角生物碱来源分类：鸦片生物碱、麦角生物碱*化学分类：托品烷生物碱，异喹啉生物碱化学分类：托品烷生物碱，异喹啉生物碱*生源结合化学分类：鸟氨酸系，赖氨酸系，生源结合化学分类：鸟氨酸系，赖氨酸系，苯丙氨酸和酪氨酸系，色氨酸系，邻氨基苯苯丙氨酸和酪氨酸系，色氨酸系，邻氨基苯甲酸系，组氨酸系甲酸系，组氨酸系黄黄 连连 小檗碱、药根碱、巴马丁、黄连碱小檗碱、药根碱、巴马丁、黄连碱黄黄 柏柏 小檗碱、药根碱、木兰花碱小檗碱、药根碱、木兰花碱麻麻 黄黄 麻黄碱、伪麻黄碱、去甲麻黄碱、甲基麻黄碱
4、麻黄碱、伪麻黄碱、去甲麻黄碱、甲基麻黄碱马钱子马钱子 马钱子碱、伪马钱子碱、番木鳖碱（士的宁）马钱子碱、伪马钱子碱、番木鳖碱（士的宁）伪番木鳖碱伪番木鳖碱制川乌制川乌 乌头碱、次乌头碱、新乌头碱乌头碱、次乌头碱、新乌头碱延胡索延胡索 延胡索乙素、延胡索甲素、原阿片碱、黄连碱延胡索乙素、延胡索甲素、原阿片碱、黄连碱苦苦 参参 苦参碱、槐定碱、槐果碱、氧化苦参碱苦参碱、槐定碱、槐果碱、氧化苦参碱山豆根山豆根 苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱金雀花碱苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱金雀花碱防防 己己 粉防己碱、防己诺林碱、轮环藤酚碱、木兰碱粉防己碱、防己诺林碱、轮环藤酚碱、木兰碱二、结构特征与理化性质二、结构特
5、征与理化性质（一）结构特征（一）结构特征含含N杂环，含杂环，含N侧链侧链吡啶类吡啶类 毒芹、烟草毒芹、烟草喹啉类喹啉类 金鸡钠金鸡钠异喹啉类异喹啉类 黄连、罂粟、吗啡黄连、罂粟、吗啡吲哚类吲哚类 番木鳖、毒扁豆番木鳖、毒扁豆咪唑类咪唑类 毛果芸香毛果芸香嘌呤类嘌呤类 茶叶茶叶托烷类托烷类 颠茄、洋金花、古柯颠茄、洋金花、古柯其他其他 麻黄、乌头、秋水仙麻黄、乌头、秋水仙按氮原子所在基本母核的化学结构分类按氮原子所在基本母核的化学结构分类NCH3OCOHHNCHCH2HONCH3HOOHNOOH3COH3CO+NNOH3COCH3NNHNH5C2CH2OOCOCH3OHOCH3HOCH3OOAr
6、OCH3OHCH CH CH3OHNHCH3（二）理化性质（二）理化性质1.物理性质物理性质 （1）颜色）颜色 多数无色多数无色NCH3OHOOCH3OCH3+如如 小檗碱小檗碱药根碱药根碱共轭体系长、有助色团的可呈色共轭体系长、有助色团的可呈色（2）形态）形态 多数为结晶性固体多数为结晶性固体有些小分子的呈有些小分子的呈液态液态（烟碱、槟榔碱（烟碱、槟榔碱)麻黄碱具有麻黄碱具有挥发性挥发性咖啡因具有咖啡因具有升华性升华性NCH3COOCH3槟榔碱槟榔碱烟碱烟碱NCH3N咖啡因咖啡因NNNNOCH3CH3OH3CCH CH CH3OHNHCH3麻黄碱麻黄碱2.溶解性溶解性游游离离生生物物碱碱难
7、溶于水难溶于水易溶于有机溶剂易溶于有机溶剂易溶于水易溶于水难溶于有机溶剂难溶于有机溶剂 H生生物物碱碱盐盐 OH例例 盐酸吗啡盐酸吗啡 Ch.P.（2010）【性状性状】本品在水中溶解，在乙醇中略溶，在本品在水中溶解，在乙醇中略溶，在三氯甲烷或乙醚中几乎不溶。三氯甲烷或乙醚中几乎不溶。例例 盐酸麻黄碱盐酸麻黄碱 Ch.P.（2010）【性状性状】本品在水中易溶，在乙醇中溶解，在本品在水中易溶，在乙醇中溶解，在三氯甲烷或乙醚中不溶。三氯甲烷或乙醚中不溶。液体生物碱和一些小分子固体生物碱既溶于水也可溶于有机溶剂液体生物碱和一些小分子固体生物碱既溶于水也可溶于有机溶剂例例 盐酸小檗碱盐酸小檗碱 Ch
8、.P.（2010）【性状性状】本品在热水中溶解，在水或乙醇中微本品在热水中溶解，在水或乙醇中微溶，在三氯甲烷中极微溶解，在乙醚中不溶。溶，在三氯甲烷中极微溶解，在乙醚中不溶。季铵型生物碱易溶于水、难溶于盐酸溶液；季铵型生物碱易溶于水、难溶于盐酸溶液；季铵型生物碱盐难溶于水季铵型生物碱盐难溶于水3.沉淀反应沉淀反应 生生物物碱碱沉沉淀淀剂剂生生物物碱碱H+常用生物碱沉淀剂常用生物碱沉淀剂碘化汞钾、碘化铋钾、碘碘化汞钾、碘化铋钾、碘-碘化钾、氯化金、碘化钾、氯化金、氯化汞、铁氰化钾、硅钨酸、磷钨酸、磷钼酸氯化汞、铁氰化钾、硅钨酸、磷钨酸、磷钼酸苦味酸、四苯硼钠、雷氏盐（硫氰酸铬盐）苦味酸、四苯硼钠
9、、雷氏盐（硫氰酸铬盐）沉沉 淀淀 剂剂 沉沉 淀淀 颜颜 色色K2HgI4KBiI4I2-KIH3PO412MoO3苦味酸苦味酸白白 黄黄橙橙褐褐-暗褐暗褐蓝蓝（NH3H2O）黄黄白白黄黄4.显色反应显色反应常用显色剂常用显色剂硫酸、硝酸、甲醛硫酸、钒硫酸、钼硫酸、氯硫酸、硝酸、甲醛硫酸、钒硫酸、钼硫酸、氯酸钾、三氯化铁、香草醛、对二甲氨基苯甲醛酸钾、三氯化铁、香草醛、对二甲氨基苯甲醛呈色呈色生物碱生物碱显色剂显色剂例例 盐酸罂粟碱盐酸罂粟碱 Ch.P.（2010）【鉴别鉴别】（3）取本品）取本品5mg，加甲醛硫酸试液，加甲醛硫酸试液1ml，溶液应无色或显淡黄色，渐渐变成深玫瑰，溶液应无色或显
10、淡黄色，渐渐变成深玫瑰红色，最后变成紫色（吗啡或吗啡的酯化物立即红色，最后变成紫色（吗啡或吗啡的酯化物立即显紫色或紫堇色）。显紫色或紫堇色）。N.5.碱性碱性影响碱性强弱因素影响碱性强弱因素电子杂化方式电子杂化方式电效应电效应立体结构立体结构（1）氮原子上电子杂化方式的影响）氮原子上电子杂化方式的影响3sp2spspNHN N N四氢异喹啉四氢异喹啉N N异喹啉异喹啉NRC 腈腈（pKb4.5）（pKb8.6）（2）电效应与碱性强弱的关系）电效应与碱性强弱的关系电效应电效应（诱导效应和共轭效应）（诱导效应和共轭效应）氮原子上电子云密度氮原子上电子云密度 碱性碱性氮原子上电子云密度氮原子上电子云
11、密度 碱性碱性甲胺甲胺氨氨NHHCH3NHHH（pKb3.4）（pKb4.25）CHOHCHNH2CH3去甲麻黄碱去甲麻黄碱苯异丙胺苯异丙胺CH2CHNH2CH3（pKb4.2）（pKb5.0）NCHCH2HNCH3OCOHH奎宁奎宁pKb29.7pKb15.07NNOH3COCH3NNCH3NNOH3COCH3NNH茶碱茶碱咖啡因咖啡因（弱酸性）（弱酸性）（pKb14.15）H2O3HClOOHNCH3HO吗啡吗啡（两性）（两性）盐酸盐酸CH3ONNCOCOCH3OOCH3OOCH3OCH3OCH3H（3）立体结构与碱性的关系）立体结构与碱性的关系利血平利血平（pKa 6.07）6.紫外吸收
12、特征紫外吸收特征NCH3OCH3OOCH3OCH3延胡索乙素延胡索乙素max mix maxA 21A/A%1cm1E7.旋光性旋光性 多数具有旋光性多数具有旋光性CH CH CH3OHNHCH3（l）盐酸麻黄碱、硫酸奎宁、氢溴酸山莨菪碱盐酸麻黄碱、硫酸奎宁、氢溴酸山莨菪碱（d）盐酸伪麻黄碱、硫酸奎尼丁盐酸伪麻黄碱、硫酸奎尼丁（dl）硫酸阿托品）硫酸阿托品三、定性鉴别三、定性鉴别（一）理化鉴别（一）理化鉴别制剂中某些干扰成分可有假阳性反应制剂中某些干扰成分可有假阳性反应蛋白质、鞣质蛋白质、鞣质呈呈色色生生物物碱碱显显色色剂剂生生物物碱碱沉沉淀淀剂剂 H+麻黄碱不能与生物碱沉淀剂反应麻黄碱不能与
13、生物碱沉淀剂反应例例 马钱子散马钱子散 Ch.P.（2010）【处方处方】马钱子马钱子（沙烫）适量（含士的宁（沙烫）适量（含士的宁8.0g），地龙），地龙93.5g。【鉴别】取本品【鉴别】取本品1g，加浓氨试液数滴及三氯加浓氨试液数滴及三氯甲甲烷烷10ml，浸泡数小时，滤过，取滤液，浸泡数小时，滤过，取滤液1ml蒸干，蒸干，残渣加稀盐酸残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋钾试液使溶解，加碘化铋钾试液12滴滴,即生成黄棕色沉淀。即生成黄棕色沉淀。TLC法是法是Ch.P.中中药制剂常用药制剂常用鉴别方法，大多用硅胶为吸附剂鉴别方法，大多用硅胶为吸附剂1.TLC法法（二）（二）色谱法鉴别色谱法鉴别 硅
14、胶是弱酸性吸附剂，会吸附生物硅胶是弱酸性吸附剂，会吸附生物碱，用中性展开剂时，碱，用中性展开剂时，Rf 小，并会产生小，并会产生斑点拖尾现象斑点拖尾现象 防止斑点拖尾的措施防止斑点拖尾的措施C.改用其他吸附剂（改用其他吸附剂（例例碱性氧化铝碱性氧化铝）B.用硅胶铺板时加碱液（用硅胶铺板时加碱液（例例氢氧化钠氢氧化钠）A.展开剂中加入碱性试剂展开剂中加入碱性试剂 （例例氨水、二乙胺、吡啶氨水、二乙胺、吡啶）nm365UVG黄色荧光斑点黄色荧光斑点盐酸小檗碱对照品盐酸小檗碱对照品黄连对照药材黄连对照药材供试液供试液展开展开硅胶硅胶苯苯-乙酸乙酯乙酸乙酯-甲醇甲醇-异丙醇异丙醇-浓氨浓氨126331
15、例例 万氏牛黄清心丸万氏牛黄清心丸 Ch.P.（2010）为黄色荧光斑点为黄色荧光斑点 蒸蒸干干供供试试液液观观察察样样品品硅硅胶胶3434243CHCl)LNaOH/mol2.0(GOHNHCHClSOHOHNHCHCl游离、提取游离、提取成盐、提取成盐、提取游离、提取游离、提取溶解溶解士的宁对照品士的宁对照品马钱子碱对照品马钱子碱对照品盐酸麻黄碱对照品盐酸麻黄碱对照品三氯甲烷三氯甲烷-乙醇乙醇-环己烷环己烷(3:1:1)例例 九分散九分散 Ch.P.（20 10）【处方处方】马钱子粉，麻黄，乳香（制），没药（制）马钱子粉，麻黄，乳香（制），没药（制）稀碘化铋钾稀碘化铋钾茚三酮显色茚三酮显色
16、2.PC法法 （Ch.P.应用不多）应用不多）显色方法显色方法 荧光荧光 生物碱沉淀剂生物碱沉淀剂 （不宜用（不宜用H2SO4）3.HPLC法法以以tR为定性参数，对照品对照为定性参数，对照品对照一般与含量测定同时进行一般与含量测定同时进行四、含量测定四、含量测定化学方法化学方法 重量法重量法 容量法容量法仪器方法仪器方法 光谱法光谱法 色谱法色谱法总生物碱总生物碱单体生物碱单体生物碱生物碱类成分供试液常用制备方法生物碱类成分供试液常用制备方法 多根据生物碱碱性多根据生物碱碱性（可与酸成盐）（可与酸成盐）及溶解性及溶解性（多数游离生物碱易溶于低极性有机溶剂难溶于（多数游离生物碱易溶于低极性有机
17、溶剂难溶于水，生物碱盐易溶于水和极性有机溶剂）水，生物碱盐易溶于水和极性有机溶剂），固体，固体制剂可先用醇类提取，提取液浓缩后加酸溶解，制剂可先用醇类提取，提取液浓缩后加酸溶解，滤过酸不溶物，酸水液调滤过酸不溶物，酸水液调pH9以上，加三氯甲烷以上，加三氯甲烷萃取，萃取液浓缩至适量。液体制剂（固体制剂萃取，萃取液浓缩至适量。液体制剂（固体制剂亦可）可直接碱化后用三氯甲烷提取，浓缩。如亦可）可直接碱化后用三氯甲烷提取，浓缩。如果杂质多，可将浓缩液通过氧化铝柱等净化。果杂质多，可将浓缩液通过氧化铝柱等净化。（二）酸碱滴定法（二）酸碱滴定法*酸碱滴定法酸碱滴定法*非水碱量法非水碱量法（一）重量法（一
18、）重量法例例 昆明山海棠片昆明山海棠片 Ch.P.（2010）【含量测定含量测定】取本品取本品60片，除去包衣，精密片，除去包衣，精密称定，研细，取约称定，研细，取约7g，精密称定，置，精密称定，置200ml锥形锥形瓶中，加硅藻土瓶中，加硅藻土1.4g，混匀，加乙醇，混匀，加乙醇70ml，加热，加热回流回流40分钟，放冷，滤过，滤渣加乙醇分钟，放冷，滤过，滤渣加乙醇50ml，加，加热回流热回流30分钟，放冷，滤过，合并滤液，置水浴分钟，放冷，滤过，合并滤液，置水浴上蒸干，残渣加盐酸溶液（上蒸干，残渣加盐酸溶液（1100）30ml，置水，置水浴上搅拌使溶解，放冷，滤过，浴上搅拌使溶解，放冷，滤过
19、，残渣再用盐酸溶液（残渣再用盐酸溶液（1200）同法提取）同法提取3次（次（20ml、15ml、15ml），合并滤液于分液漏斗中，加），合并滤液于分液漏斗中，加氨试液使溶液呈碱性，用乙醚振摇提取氨试液使溶液呈碱性，用乙醚振摇提取4次（次（40ml、30ml、25ml、20ml），合并乙醚液，用水振），合并乙醚液，用水振摇洗涤摇洗涤2次，每次次，每次10ml，乙醚液滤过，醚液置已，乙醚液滤过，醚液置已在在100干燥至恒重的蒸发皿中，在低温水浴上蒸干燥至恒重的蒸发皿中，在低温水浴上蒸去乙醚，残渣在去乙醚，残渣在100干燥至恒重，称定重量，计干燥至恒重，称定重量，计算，即得。算，即得。例例 颠茄酊颠
20、茄酊 Ch.P（2005）【含量测定含量测定】精密量取本品精密量取本品100ml，蒸至约，蒸至约10ml，如，如有沉淀析出，可加乙醇适量使溶解，用有沉淀析出，可加乙醇适量使溶解，用0.1mol/L硫酸溶硫酸溶液液10ml分次洗涤容器，合并洗液，用三氯甲烷分次振摇分次洗涤容器，合并洗液，用三氯甲烷分次振摇提取，每次提取，每次10ml，至三氯甲烷层无色，合并三氯甲烷液，至三氯甲烷层无色，合并三氯甲烷液，用用0.1mol/L硫酸溶液硫酸溶液10ml振摇洗涤，洗液并入酸液中，振摇洗涤，洗液并入酸液中，加过量的浓氨试液使成碱性，迅速用三氯甲烷分次振摇加过量的浓氨试液使成碱性，迅速用三氯甲烷分次振摇提取，
21、至生物碱提尽。如发生乳化现象，可加乙醇数滴，提取，至生物碱提尽。如发生乳化现象，可加乙醇数滴，每次得到的三氯甲烷液均用同一的水每次得到的三氯甲烷液均用同一的水10ml洗涤，洗涤，弃去洗液，合并三氯甲烷液，蒸干，加乙醇弃去洗液，合并三氯甲烷液，蒸干，加乙醇3ml，蒸干，蒸干，并在并在80干燥干燥2小时，残渣加三氯甲烷小时，残渣加三氯甲烷2ml，必要时，微，必要时，微热使溶解，精密加硫酸滴定液（热使溶解，精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）20ml，置水，置水浴上加热，除去三氯甲烷，放冷，加甲基红指示液浴上加热，除去三氯甲烷，放冷，加甲基红指示液12滴，用氢氧化钠滴定液（滴，用氢氧化钠滴定液（0
22、.02mol/L）滴定。每）滴定。每1ml硫酸硫酸滴定液（滴定液（0.01mol/L）相当于）相当于5.788mg的莨菪碱的莨菪碱（C17H23NO3）。）。本品每本品每1ml含生物碱以莨菪碱计，应为含生物碱以莨菪碱计，应为0.280.32mg。471.测定方法测定方法 4HClOClOBHB4（二）非水碱量法（二）非水碱量法（1）原理原理 4HClOClOBHHAABH448（2）方法方法溶剂溶剂 冰醋酸、醋酐冰醋酸、醋酐滴定液滴定液 HClO4（0.1mol/L）指示终点指示终点 电位法电位法 结晶紫结晶紫49 2.适用范围适用范围Kb 10-8 10-10 冰醋酸冰醋酸Kb 10-10
23、10-12 冰醋酸冰醋酸+醋酐醋酐Kb 10-12 醋酐醋酐弱碱（弱碱（Kb10-8）50氢卤酸盐的含量测定氢卤酸盐的含量测定HXClOBHHClOXBH44 酸性较强酸性较强排除氢卤酸干扰方法排除氢卤酸干扰方法22HgXAcBH2HgAcXBH2 难解离难解离（三）光谱法（三）光谱法1.直接测定法直接测定法 适用于药味较少、干扰不适用于药味较少、干扰不大的制剂大的制剂2.比色法比色法（1）酸性染料比色法）酸性染料比色法（2）苦味酸盐比色法）苦味酸盐比色法（3）雷氏盐比色法）雷氏盐比色法（4）异羟肟酸铁比色法）异羟肟酸铁比色法（1）酸性染料比色法）酸性染料比色法 BHHB InHHIn+）（I
24、nBHA.原理原理A有机溶剂有机溶剂离子对离子对B.影响因素影响因素pH H+In-HIn*酸性染料以分子状态存在酸性染料以分子状态存在pH BH+B H+*生物碱游离，进入有机相生物碱游离，进入有机相*没有足夠的没有足夠的H+与生物碱結合与生物碱結合a.水相的最适水相的最适pH值值优点优点 *与离子对形成氢键，提取率高与离子对形成氢键，提取率高*不与水相混溶不与水相混溶*A样样大大b.有机溶剂的选择有机溶剂的选择 常用三氯甲烷常用三氯甲烷c.酸性染料的选择酸性染料的选择要求要求*与有机碱定量结合与有机碱定量结合 *所成离子对在有机溶剂中溶解所成离子对在有机溶剂中溶解 度大，且有较高的吸光度度
25、大，且有较高的吸光度 *染料不溶或难溶于有机溶剂染料不溶或难溶于有机溶剂常用常用 溴麝香草酚蓝溴麝香草酚蓝、溴甲酚绿、溴甲酚紫、溴甲酚绿、溴甲酚紫、溴酚蓝、甲基橙溴酚蓝、甲基橙 d.水分的影响水分的影响干扰干扰*使有机相混浊，使有机相混浊，A *带入水相染料，带入水相染料，A排除排除*加脱水剂加脱水剂（无水（无水Na2SO4）*用滤纸过滤用滤纸过滤（2）苦味酸）苦味酸盐比色法盐比色法OHNO2NO2O2N苦味酸苦味酸（三硝基苯酚）（三硝基苯酚）例例 万氏牛黄清心丸中黄连总碱的含量测定万氏牛黄清心丸中黄连总碱的含量测定残残渣渣过过滤滤丸丸捣捣碎碎水水醇醇苦苦味味酸酸钠钠索索氏氏提提取取器器硅硅藻
26、藻土土 421HPOKnm360ClCHA22 生物碱苦味酸盐生物碱苦味酸盐buffer等量拌匀等量拌匀甲醇提取甲醇提取挥干挥干溶解、定容溶解、定容溶解溶解盐酸小檗碱对照品法盐酸小檗碱对照品法（3）雷氏盐比色法）雷氏盐比色法 A.原理原理 生物碱在一定生物碱在一定pH溶液中能溶液中能 成为成为BH+，可与雷氏盐的阴离子，可与雷氏盐的阴离子 Cr(NH3)2(SCN)4-结合成为结合成为单盐单盐或或 双盐双盐沉淀，只要测得雷氏盐的吸光沉淀，只要测得雷氏盐的吸光 度，即可计算生物碱的含量度，即可计算生物碱的含量硫氰酸铬铵硫氰酸铬铵NH4Cr(NH3)2(SCN)4H2ONCH3COOCH3槟榔碱槟
27、榔碱结构中只含有结构中只含有1个个N，与雷氏盐反，与雷氏盐反应的沉淀组成受应的沉淀组成受pH值的影响较小值的影响较小NCHCH2HNCH3OCOHH奎宁奎宁酸性较小，生成单盐酸性较小，生成单盐酸性较大，生成双盐酸性较大，生成双盐与雷氏盐反应的沉淀组与雷氏盐反应的沉淀组成受成受pH值的影响较大值的影响较大CH3ONNCOCOCH3OOCH3OOCH3OCH3OCH3H利血平利血平碱性较小碱性较小酸性较大或小均生成单盐酸性较大或小均生成单盐NOOH3COH3CO+小檗碱小檗碱结构中有几个季铵结构中有几个季铵N，与几分子沉淀剂结合，与几分子沉淀剂结合B.测定方法测定方法A 丙丙酮酮雷雷氏氏盐盐生生物
28、物碱碱直接法直接法H+A 过过滤滤雷雷氏氏盐盐生生物物碱碱(定量过量定量过量)剩余法剩余法H+生物碱生物碱雷氏盐雷氏盐剩余的剩余的雷氏盐雷氏盐例例 产妇康颗粒中益母草总生物碱含量测定产妇康颗粒中益母草总生物碱含量测定 活活性性炭炭硫硫氰氰酸酸铬铬铵铵冰冰浴浴乙乙醇醇滤滤液液残残渣渣过过滤滤颗颗粒粒nm525LHCl/mol1.0A定容超声定容超声蒸干蒸干成盐、溶解成盐、溶解搅拌搅拌H+(定量过量定量过量)过滤过滤盐酸水苏碱对照品对照法盐酸水苏碱对照品对照法Ch.P（2000）（测定剩余雷氏盐）（测定剩余雷氏盐）（4）异羟肟酸铁比色法）异羟肟酸铁比色法Fe3+/3红色红色异异羟羟肟肟酸酸羧羧基基
29、酯酯键键羟羟胺胺 OH水解水解AORCORH2NOHORCNHOHFe3+/3H+ORCNHOFe3+/3红色红色ORCOH OH水解水解例例 附子注射液中酯型生物碱含量测定附子注射液中酯型生物碱含量测定乌头碱标准曲线法乌头碱标准曲线法 无水乙醇无水乙醇乙醚乙醚残渣残渣注射液注射液HClNOHH)ClO(FeOHNH23423A525nm游离游离提取提取蒸干蒸干溶解定容溶解定容OH-（四）色谱法（四）色谱法1.TLCS法法例例 九分散中士的宁的含量测定九分散中士的宁的含量测定 Ch.P（2000）OHNHCHClCHClOHNH233323残渣残渣粉末粉末硫酸液硫酸液点样点样 S=254nm
30、R=325nm游离游离提取提取成盐成盐游离游离提取提取挥干挥干CHCl3士的宁对照品对照法士的宁对照品对照法2.HPLC法法固定相固定相 硅胶硅胶-C4或或C8或或C18流动相流动相 甲醇甲醇-水水或或乙腈乙腈-水水 RP-HPLCOHOH应注意应注意 固定相固定相Si-OH的复盖率的复盖率复盖率越高，分离效果越好复盖率越高，分离效果越好 通常硅胶上通常硅胶上 Si-OH 数量约为数量约为68/nm2。在。在硅胶上直接键合烷基，平均键合量硅胶上直接键合烷基，平均键合量4/nm2，C4可可得到最佳复盖，而得到最佳复盖，而C18只有只有2/nm2复盖率小，易引起拖尾，解决方法复盖率小，易引起拖尾，
31、解决方法（1）改进流动相）改进流动相 A.加抑制剂加抑制剂（三乙胺）（三乙胺）掩蔽掩蔽Si-OH基基C.调整流动相的调整流动相的pH值值 改变流动相离子强度及促进离子对改变流动相离子强度及促进离子对 相互作用相互作用B.加季铵盐加季铵盐（溴化四甲基胺）（溴化四甲基胺）D.加离子对试剂加离子对试剂 当生物碱在酸性条件下以阳离子存在当生物碱在酸性条件下以阳离子存在时，离子对试剂的阴离子与之形成中性离时，离子对试剂的阴离子与之形成中性离子对，掩蔽了生物碱的碱性基团，使其不子对，掩蔽了生物碱的碱性基团，使其不与与Si-OH作用作用（辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠）（辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠）（2）改进固
32、定相）改进固定相B.对固定相采取封尾技术对固定相采取封尾技术 例例 键合后用三甲基氯硅烷（键合后用三甲基氯硅烷（TMCS）作封尾处理，减少残余羟基，增加作封尾处理，减少残余羟基，增加 单体覆盖率单体覆盖率A.选用碳链较短键合相硅胶填料选用碳链较短键合相硅胶填料 例例 C4或或 C8例例 舒风定痛丸中士的宁含量测定舒风定痛丸中士的宁含量测定流动相流动相 正己烷正己烷-二氯甲烷二氯甲烷-无水甲醇无水甲醇-三乙胺三乙胺47.547.550.4例例 烧伤止痛膏中小檗碱含量测定烧伤止痛膏中小檗碱含量测定流动相流动相 乙腈乙腈-0.045mol/LKH2PO4（pH5.0）4357含含0.013mol/L十二烷基硫酸鈉十二烷基硫酸鈉3.GC法法*适用于挥发性、遇热稳定生物碱类适用于挥发性、遇热稳定生物碱类*生物碱盐在约生物碱盐在约325急速加热下即游急速加热下即游 离，故分离测得的均为游离生物碱离，故分离测得的均为游离生物碱*提取、纯化时应避免加热提取、纯化时应避免加热
