1、丙肝抗体检测的困惑与对策丙肝抗体检测的困惑与对策 1第1页，共31页。背景背景1l我国我国HCVHCV感染以感染以1 1型为型为主主80%80%l其中以其中以1b1b型多见型多见64%64%l慢性化率慢性化率60%-80%60%-80%肝硬化肝硬化10%-15%10%-15%肝肝细胞癌细胞癌1%-7%1%-7%l无预防性疫苗无预防性疫苗2第2页，共31页。背景背景2l最有效治疗方案：聚乙二醇长效最有效治疗方案：聚乙二醇长效a-a-干扰素干扰素（PEG-IFN-aPEG-IFN-a）联合利巴韦林（）联合利巴韦林（Ribavirin)Ribavirin)l持续免疫学应答（持续免疫学应答（SVRSV
2、R）基因）基因1 1型患者低于型患者低于50%50%lHCVHCV抗体阳性率随年龄增加而上升抗体阳性率随年龄增加而上升l男女间无明显差异男女间无明显差异3第3页，共31页。Nature.Reviews.March 2019 Volume 54第4页，共31页。Nature.Reviews.March 2019 Volume 55第5页，共31页。实验诊断实验诊断-2019版丙型肝炎防治指南版丙型肝炎防治指南一、常规指标一、常规指标lALT AST ALT AST 白蛋白白蛋白 胆碱酯酶胆碱酯酶 PTPT二、二、HCVHCV抗体抗体l以以EIAEIA法对高危人群筛查法对高危人群筛查l免疫功能缺陷
3、、自免病、易假阳性，免疫功能缺陷、自免病、易假阳性，HCV RNA HCV RNA 有助于有助于确诊确诊HCVHCV感染感染l第三代试剂敏感性、特意性高，第三代试剂敏感性、特意性高，6第6页，共31页。2022-9-18临界值、灰区概念临界值、灰区概念 载自Chin Jab Med.July 2019 Vol29.No.7l应结合临床情况，慎重考虑灰区样本的检验结果应结合临床情况，慎重考虑灰区样本的检验结果7第7页，共31页。2022-9-18HCV抗体抗体S/CO比值分布比值分布载自 Clinical Chemistry 49:6 940944(2019)8第8页，共31页。2022-9-1
4、8举例：举例：HCV抗体阳性标本做确认实验抗体阳性标本做确认实验S/CO 比值阴性n(%)不确定n(%)阳性n(%)1.0-4.0(n=98)69(70%)20(20%)9(9%)4.1-8.0(n=31)14(45%)13(42%)4(13%)8.1-12.0(n=32)5(16%)13(41%)14(44%)12.1-20.0(n=63)0(0%)3(5%)60(95%)载自 Clinical Chemistry 49:6 940944(2019)9第9页，共31页。2022-9-18HCV抗体阳性标本做抗体阳性标本做HCV-RNA检测检测 S/CO比值阳性n(%)阴性n(%)1.0-8.
5、0(n=30)2(11%)28(89%)8.1-20(n=25)0(0%)25(100%)20.1-30(n=29)17(58%)12(42%)30.1-40(n=172)159(92%)13(8%)40(n=283)261(92%)22(8%)载自 Clinical Chemistry 49:6 940944(2019)10第10页，共31页。举例举例11第11页，共31页。J Clini Hepatol,January 2019,Vol.27,No.112第12页，共31页。J Clini Hepatol,January 2019,Vol.27,No.113第13页，共31页。需要需要HC
6、V检测的规范化流程检测的规范化流程 14第14页，共31页。HCV检测策略检测策略因目的而异：因目的而异：l诊断诊断l疫情监测疫情监测l血液筛查血液筛查丙型肝炎病毒实验室检测技术规范丙型肝炎病毒实验室检测技术规范上报稿上报稿15第15页，共31页。筛查试剂样品阴性反应初筛试验初筛试验阳性反应复检试验复检试验均阴性反应一阴一阳均阳性反应补充试验补充试验原有试剂双孔或原有试剂加另一种不同原理（或厂家）试剂报告阴性图3 HCV临床诊断筛查检测流程以诊断为目的的检测策略以诊断为目的的检测策略HCV临床诊断筛查检测流程临床诊断筛查检测流程16第16页，共31页。复检阳性反应样品阳性反应免疫印迹试验免疫印
7、迹试验阴性反应报告阴性图4 HCV直接进行补充试验检测流程可疑核酸检测核酸检测阳性反应阴性反应报告可疑报告阳性以诊断为目的的检测策略以诊断为目的的检测策略HCV直接进行补充试验检测流程直接进行补充试验检测流程17第17页，共31页。复检阳性样品可疑免疫印迹试验免疫印迹试验阴性反应报告阴性图5 HCV“根据试剂S/CO比值”的确证检测流程阳性反应报告阳性报告可疑根据S/CO值判断高S/CO值低S/CO值以诊断为目的的检测策略以诊断为目的的检测策略HCV考虑考虑S/Co比值的确证检测流程比值的确证检测流程仅限于试剂给出了特定阈值时使用18第18页，共31页。根据补充试验结果报告抗根据补充试验结果报
8、告抗-HCV-HCV检测结果的解释检测结果的解释 抗抗-HCV-HCV筛查结果筛查结果补充试验补充试验结果结果报报 告告解解 释释筛查试验阴性不需检测抗-HCV阴性未感染HCV，除非怀疑最近被感染或存在其它证据提示感染HCV。筛查试验阳性，且S/CO比值高未做抗-HCV阳性可能提示既往感染或现在感染了HCV；未做血清学补充试验。高S/CO比值的样品常被确证为阳性（95），但尚有1个月）重测抗-HCV或HCV RNA。筛查试验阳性NAT阳性抗-HCV阳性HCV RNA阳性提示活动性HCV感染。筛查试验阳性NAT阴性免疫印迹阳性抗-HCV阳性HCV RNA阴性存在抗-HCV，提示既往感染或现在感染
9、HCV；由于某些HCV慢性感染病人的HCV RNA间隙阳性，因此一次HCV RNA阴性结果不能排除活动性感染。筛查试验阳性NAT阴性RIBA阴性抗-HCV阴性HCV RNA阴性未感染HCV。筛查试验阳性NAT阴性RIBA可疑抗-HCV可疑HCV RNA阴性抗-HCV筛查结果可能是假阳性，在这种情况下，提示未感染HCV。19第19页，共31页。样品阴性反应初筛试验初筛试验阳性反应复检试验复检试验阴性反应阳性反应报告阴性筛查试剂（高敏感性）报告阳性筛查试剂（高特异性）图7 HCV感染疫情报告检测流程以疫情监测为目的的检测策略以疫情监测为目的的检测策略20第20页，共31页。另一种抗体筛查试剂或NA
10、T以血液筛查为目的的检测策略以血液筛查为目的的检测策略样品阳性反应初筛试验初筛试验阴性反应复检试验复检试验阳性反应阴性反应报告阳性待确证抗体筛查试剂报告阴性图6 HCV血液筛查检测流程21第21页，共31页。基本原则基本原则1l对于筛查试验阴性样品，不需要做进一步对于筛查试验阴性样品，不需要做进一步检测，可报告检测，可报告“抗抗HCVHCV阴性阴性”l对于筛查试验阳性样品，可选择对于筛查试验阳性样品，可选择S/COS/CO比值比值进行补充试验，或非进行补充试验，或非S/COS/CO比值的补充试验比值的补充试验22第22页，共31页。基本原则基本原则22a 2a 高比值高比值，可报告，可报告“抗
11、抗HCVHCV阳性阳性”，不需要做补，不需要做补充试验；低比值，最好做充试验；低比值，最好做RIBA.RIBA.此方案适合此方案适合特特定的筛查试剂定的筛查试剂（已证实高比值（已证实高比值95%95%补充试验阳补充试验阳性。性。2b2b所有筛查试验阳性标本，均进行所有筛查试验阳性标本，均进行RIBARIBA；或先作；或先作HCV RNAHCV RNA检测，阴性标本再测检测，阴性标本再测RIBARIBA23第23页，共31页。丙肝病毒及丙肝抗体试剂丙肝病毒及丙肝抗体试剂1l19891989年美国学者年美国学者ChooChoo等从感染输血后非甲非乙等从感染输血后非甲非乙型肝炎（型肝炎（PT-Non
12、APT-NonA、NonBNonB）病毒的黑猩猩肝组）病毒的黑猩猩肝组织中，首次获得病毒的全基因克隆织中，首次获得病毒的全基因克隆l同年，第一代同年，第一代EIA-1EIA-1实际问世（单一实际问世（单一NS4NS4重组抗重组抗原，即原，即C100-3C100-3）l19921992年，第二代年，第二代EIA-2EIA-2（增加（增加CoreCore和和NS3NS3重组抗重组抗原）原）24第24页，共31页。丙肝病毒及丙肝抗体试剂丙肝病毒及丙肝抗体试剂2l20192019年第三代年第三代EIA-3EIA-3出现出现l核心抗原比例降低核心抗原比例降低l重新构建重新构建NS3NS3和和NS4NS4
13、，使抗原活性提高，使抗原活性提高l增加增加NS5NS5抗原，诊断价值仍在探讨抗原，诊断价值仍在探讨l缩短检测窗口期（缩短检测窗口期（5858天）天）25第25页，共31页。假阳性问题假阳性问题l美国美国CDCCDC报道在报道在HCVHCV低流行率人群，如无偿献血低流行率人群，如无偿献血员（低于员（低于10%10%）l采用第二代采用第二代(Abbott)(Abbott)和第三代和第三代(Ortho)EIA(Ortho)EIA试剂试剂l假阳性率可达假阳性率可达30%30%l不能仅凭不能仅凭EIAEIA结果判断结果判断HCVHCV感染感染l以以RIBARIBA或或HCV RNAHCV RNA进行验证
14、进行验证26第26页，共31页。造成假阳性原因造成假阳性原因l高高IgGIgG血症：高浓度非特异性血症：高浓度非特异性IgGIgG可吸附到固相可吸附到固相载体上或包被的抗原上载体上或包被的抗原上lRFRF干扰干扰lSODSOD超氧化歧化酶干扰超氧化歧化酶干扰lHCVHCV抗原不纯抗原不纯27第27页，共31页。我国情况我国情况lRIBARIBA试剂昂贵，我国试验室、采血机构目前不做试剂昂贵，我国试验室、采血机构目前不做为补充试验为补充试验l假阳性结果引起部分就医者或献血员不必要的心假阳性结果引起部分就医者或献血员不必要的心理负担理负担l不同试剂盒对弱阳性的检出率不同不同试剂盒对弱阳性的检出率不
15、同l同一厂家不同批次的试剂，质量有差异同一厂家不同批次的试剂，质量有差异l我国我国HCVHCV不同感染率的人群，不同感染率的人群，S/COS/CO阈值数据缺阈值数据缺乏（美国主要乏（美国主要a a型型 ；中国；中国 主要主要1b1b型）型）l在我国，在我国，S/COS/CO高低不能预示真阳性的可能性大小高低不能预示真阳性的可能性大小28第28页，共31页。对策对策l加强与临床沟通，交流加强与临床沟通，交流HCVHCV检测技术特点检测技术特点l利用备注栏，做好解释，如利用备注栏，做好解释，如“复检复检”，建议，建议”病毒核酸病毒核酸”检测；检测；l关注标本状况，排除干扰因素关注标本状况，排除干扰因素l了解历史纪录，或与其他检验结果核对了解历史纪录，或与其他检验结果核对l了解病人临床情况了解病人临床情况l提高提高HCV RNAHCV RNA标本采集、运送、检验的全面质量标本采集、运送、检验的全面质量控制水平控制水平l计划提供计划提供HCVHCV抗原检测；抗原检测；RIBARIBA检测检测29第29页，共31页。30第30页，共31页。第31页，共31页。
