1、2022-10-12本章要求v熟悉药物及其制剂的含量限度表示方法熟悉药物及其制剂的含量限度表示方法v掌握掌握容量分析法容量分析法的特点、原理与含量计算方法的特点、原理与含量计算方法v掌握掌握UVUV法法测定药物含量的原理、测定方法与计算测定药物含量的原理、测定方法与计算v掌握掌握HPLCHPLC法和法和GCGC法法的系统适用性试验、含量计算的系统适用性试验、含量计算v熟悉常用熟悉常用HPLCHPLC、GCGC色谱柱、检测器、条件的选择色谱柱、检测器、条件的选择v熟悉药物含量测定分析方法的验证实验熟悉药物含量测定分析方法的验证实验v了解荧光分光光度法和原子吸收分光光度法的应用了解荧光分光光度法和
2、原子吸收分光光度法的应用2022-10-13评价药品质量的三种分析手段：评价药品质量的三种分析手段：鉴别（鉴别（identificationidentification）检查（检查（test for puritytest for purity）含量测定含量测定（assayassay）准确测定有效成分的含量准确测定有效成分的含量优劣度优劣度 第一节第一节 概述概述含量测定含量测定（assay）理化方法测定理化方法测定 效价测定效价测定（assay of potency）生物学方法或生物学方法或 酶学方法测定酶学方法测定原料药：强调方法的精密度、准确度原料药：强调方法的精密度、准确度 制剂：偏重方
3、法的选择性制剂：偏重方法的选择性2022-10-14含量限度的表示方法含量限度的表示方法v原料药：以百分含量表示（一般以干燥品计）地塞米松磷酸钠 按干燥品计算，含C22H28FNaO8P应为96.0%-102.0%。硫酸庆大霉素 按无水物计算，每1mg的效价不得少于590庆大霉素单位。阿司匹林含C9H6O4不得少于99.5%氢氧化铝含氢氧化铝按Al2O3计算，不得少于48.0。例子101.0%干燥失干燥失重测定重测定水分测水分测定定2022-10-15以标示量%表示直接用%含量规定范围以重量规定含量范围标示量标示量=规格量规格量=处方量处方量例：维生素例：维生素B1B1注射液含维生素注射液含维
4、生素B1B1 应为标示量的应为标示量的95.0%95.0%105.0%105.0%例：复方碘溶液例：复方碘溶液 含含 I I 应为应为4.50%4.50%5.50%5.50%含含 KI KI 应为应为9.5%9.5%10.5%10.5%例：复方磺胺甲噁唑片例：复方磺胺甲噁唑片磺胺甲噁唑磺胺甲噁唑 0.3600.3600.440g/0.440g/片片 甲氧苄氨嘧啶甲氧苄氨嘧啶72.072.088.0mg/88.0mg/片片v制剂：按标示量计算（一般以干燥品计）2022-10-16常用含量测定方法常用含量测定方法(2005年版年版ChP）仪器法 容量法 其他法 HPLC 29.4%非水法 15.3
5、%生物学 8.1%VIS-UV 21%酸碱法 7.5%重量法 0.8%旋光 0.5%银量法 3.4%原子吸收 0.3%碘量法 3.3%GC 0.3%EDTA法 2.9%荧光 0.1%亚硝酸钠法 2.1%其他容量法 5%2022-10-17v特点：特点：操作简便、快速、实验条件易实现，但是灵操作简便、快速、实验条件易实现，但是灵敏度低，专属性差敏度低，专属性差 通常用于通常用于高含量和中含量的原料药物高含量和中含量的原料药物 (只要求准确度和精密度只要求准确度和精密度)v滴定方式：滴定方式：直接滴定法直接滴定法 剩余滴定法剩余滴定法 置换滴定法置换滴定法 7 第二节第二节 容量分析法（滴定）容量
6、分析法（滴定）2022-10-18v滴定类型滴定类型：v关键问题关键问题：滴定终点的把握：滴定终点的把握 被测物与滴定液定量关系被测物与滴定液定量关系 滴定液消耗的体积滴定液消耗的体积 酸碱滴定法酸碱滴定法 非水滴定法非水滴定法 氧化还原滴定法（碘量法）氧化还原滴定法（碘量法）溴量法溴量法 反应的化学计量点反应的化学计量点指示剂显示的滴定终点指示剂显示的滴定终点2022-10-19n 直接滴定法直接滴定法 含量含量%100FTWVv含量的计算含量的计算2022-10-110l定量关系：定量关系：aA bBaA bB 被测药物被测药物 滴定液滴定液化学计量关系化学计量关系 nA/anB/b WA
7、/aMAWB/bMBABBABABBAMbaVCMbanaMbMWW2022-10-111l滴定度：滴定度：1mL1mL某物质的量浓度的滴定液相当于某物质的量浓度的滴定液相当于被测药物的重量，中国药典用被测药物的重量，中国药典用mgmg表示。表示。l滴定度的计算：滴定度的计算：MbaCTT滴定度滴定度(mg/ml)c滴定液浓度滴定液浓度(mol/L)M被测物质分子量被测物质分子量ABBAMbaVCW2022-10-112 IIVitCH去去氢氢抗抗坏坏血血酸酸2l)8.806(mg/m11176.13050.MCTba以以I2（0.05mol/l）计，反应摩尔比）计，反应摩尔比 1 1例子20
8、22-10-113l浓度校正因子浓度校正因子F F：实际工作中配制的实际工作中配制的滴定液浓度与药典滴定液浓度与药典中的规定浓度不一致中的规定浓度不一致，须对滴定液浓度校正，须对滴定液浓度校正l含量计算公式含量计算公式TBAVW含量含量 100WVT规定实际CCF F 含量含量%100FTWV2022-10-114n 剩余滴定法剩余滴定法 加入加入滴定液滴定液A 与被测药物完全反应，再以与被测药物完全反应，再以滴滴定液定液B 回滴剩余的滴定液回滴剩余的滴定液 A 滴定液滴定液A 与与滴定液滴定液B 的浓度是相当的，的浓度是相当的，根据根据消耗回滴的滴定液体积进行计算消耗回滴的滴定液体积进行计算
9、 本法需进行本法需进行空白试验校正空白试验校正含量含量 100WFTVVB)(02022-10-115 称取异烟肼约0.25g，置100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取25mL，加水50 mL与盐酸20 mL，加甲基橙指示液1滴，用溴酸钾滴定液(0.01667mol/L)缓缓滴定至粉红色消失。已知：异烟肼取样0.2545g，消耗溴酸钾滴定液(F=1.005)18.30mL，每1mL溴酸钾滴定液（0.01667 mol/L）相当于3.429mg异烟肼。百分含量%=V TF/W100%例子例子 18.30 3.4291.005 0.254525/100103 100%=99.1%
10、=2022-10-116取阿司匹林约取阿司匹林约0.3g，精密称定（，精密称定（0.2908g），加中性乙醇），加中性乙醇20ml溶解后，精密加入溶解后，精密加入0.1mol/L NaOH40ml，置水浴中加热煮沸，置水浴中加热煮沸15分钟，放冷，用分钟，放冷，用0.05mol/L H2SO4滴定至终点，同时用滴定至终点，同时用空白试空白试验验进行校正。每进行校正。每1ml 0.1mol/L NaOH相当于相当于18.02mg阿司匹林。阿司匹林。已知：供试品消耗硫酸滴定液已知：供试品消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L）23.84ml，空白试验消耗硫酸滴定液（空白试验消耗硫酸滴定液（0.0
11、5015mol/L）39.88ml。2NaOH（过量）H2SO4 Na2SO42H2OCOONaOCOCH3+NaOHCOONaOH+CH3COONa(定量过量）?百分含量%=(V0-V)TF/W100%0.0 5 0 1 51 8.0 2(3 9.8 82 3.8 4)3.5 8 4 00.0 50.3 4 8 41 0 0 01 01 0 0%0.39 9.4%(39.88-23.84)18.020.2908 103100%=99.4%例子例子2022-10-117原料药原料药百分含量百分含量制剂制剂标示量百分含量标示量百分含量标示量标示量平均片重平均片重 片剂：每片含量相当于标示量的片剂
12、：每片含量相当于标示量的%每每g实际含量实际含量区分区分1标示量每每mL实际含量实际含量注射剂：每注射剂：每mL含量相当于标示量的含量相当于标示量的%100FTWV%100VFT注射液V片粉重注射液体积2022-10-118取阿司匹林片取阿司匹林片10片，称总重，研细片，称总重，研细后称取后称取适量适量，精密称定，精密称定，加加中性乙醇中性乙醇20ml后，迅速用后，迅速用0.1mol/L NaOH滴定至终点滴定至终点。精密精密加入加入0.1mol/L NaOH40ml，置水浴中加热煮沸，置水浴中加热煮沸15分钟，放冷，分钟，放冷，用用0.05mol/L H2SO4滴定至终点，同时用滴定至终点，
13、同时用空白试验空白试验进行校正。进行校正。每每1ml 0.1mol/L NaOH相当于相当于18.02mg阿司匹林。阿司匹林。例子例子已知：已知：10片重片重3.0840g，取片粉，取片粉0.2908g，供试品及空白试验供试品及空白试验分别消耗硫酸滴定液（分别消耗硫酸滴定液（0.05015mol/L）23.84ml、39.88ml，规格，规格0.3g/片片标示量标示量 100标示量标示量平均片重平均片重 WFTVVB)(00.0 5 0 1 51 8.0 2(3 9.8 82 3.8 4)3.5 8 4 00.0 50.3 4 8 41 0 0 01 01 0 0%0.39 9.4%(39.8
14、8-23.84)18.020.2908 103100%0.30840.32022-10-119v利用物质的光谱特性进行定量利用物质的光谱特性进行定量 （吸光度、发光强度与浓度成正比关系）（吸光度、发光强度与浓度成正比关系）l紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法l荧光分光光度法荧光分光光度法l原子吸收原子吸收紫外吸收光谱图紫外吸收光谱图 第三节第三节 光谱分析法光谱分析法2022-10-120n波长范围波长范围200760nmn定量分析基本原理：定量分析基本原理：朗伯朗伯-比尔定律比尔定律 A=ECLn特点：灵敏度高特点：灵敏度高(10(10-4-41010-7-7 g/mL)g/mL)；准确度
15、高；准确度高；仪器便宜；易操作仪器便宜；易操作 专属性稍差专属性稍差l紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法2022-10-121（一）对溶剂的要求（一）对溶剂的要求 列出名称、列出名称、A尽量小尽量小（二）溶剂空白试验（二）溶剂空白试验 校零校零（四）测定波长确证（四）测定波长确证 2nm（三）供试液的浓度（三）供试液的浓度 A=0.30.7n吸收度的测定要求吸收度的测定要求2022-10-122n测定方法测定方法对照品比较法对照品比较法:配制供试品溶液和对照品溶液，配制供试品溶液和对照品溶液，相同条件下测定吸收度相同条件下测定吸收度 C C供试供试C C对照对照 要求：对照品与供试品溶液中的
16、被测成分浓度应一致要求：对照品与供试品溶液中的被测成分浓度应一致（标示量的标示量的 10%10%）AA供试对照WDC 含量 100100%AcDAW供对对=标准曲线法（多点对照）标准曲线法（多点对照）绘制绘制对照液浓度吸光度对照液浓度吸光度标准曲线（至少标准曲线（至少5 5点）点）拟合回归方程，求出供试液浓度拟合回归方程，求出供试液浓度标准曲线标准曲线吸收系数法吸收系数法（不需要对照品）（不需要对照品）测定测定 处吸收度，以该品种在规定条件下的吸收系数处吸收度，以该品种在规定条件下的吸收系数计算（计算（E值小于100的一般不宜采用）lcEA%1cm1 LEAg/100mlC%1cm1 ）（10
17、0LEAg/mlC%1cm1 ）（WDC 含量 100%100100%11WDLEAcm=2022-10-125盐酸氯丙嗪含量测定盐酸氯丙嗪含量测定:精密称取精密称取0.2368g，置，置500ml量量瓶中，加盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密瓶中，加盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液量取续滤液1ml，置，置100ml量瓶中，加同一溶剂稀释量瓶中，加同一溶剂稀释至刻度，摇匀，在至刻度，摇匀，在254nm波长处测得吸收度为波长处测得吸收度为0.435，按吸收系数为按吸收系数为915计算，求其百分含量。计算，求其百分含量。百分含量4.100%1002368.0500100100915
18、435.0%100WD100%11lEAcm百分含量4.100%1002368.0500100100915435.0%100WD100%11lEAcm例子例子2022-10-126制剂制剂标示量百分含量标示量百分含量片剂：片剂：g/片片区分区分W标示量%100100%11WDLEAcm注射剂：注射剂：g/mL1标示量%100100%11WDLEAcmV注射注射2022-10-127 维生素维生素B12注射液规格为注射液规格为0.1mgm1，含量测定如下：，含量测定如下：精密量取本品精密量取本品7.5m1，置，置25ml量瓶中，加蒸馏水稀释至量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，混匀，置刻度，混匀，置lc
19、m石英池中，以蒸馏水为空白，在石英池中，以蒸馏水为空白，在3611nm波长处吸收度为波长处吸收度为0.593，按，按 为为207计算维生计算维生素素B12按标示量计算的百分含量为按标示量计算的百分含量为1%1cmE标示量稀释倍数注射1%100V100%11cmEA1.01%1005.725100207593.0 例子例子2022-10-128计算分光光度法计算分光光度法 多波长校正计算分光光度法多波长校正计算分光光度法双波长分光光度法双波长分光光度法（复方磺胺类药物的测定）（复方磺胺类药物的测定）三波长分光光度法三波长分光光度法（维生素（维生素A的测定）的测定）导数光谱法导数光谱法解联立方程法
20、解联立方程法2022-10-129比色法比色法 加入适当显色剂显色后可见波长处测定加入适当显色剂显色后可见波长处测定酸性染料比色法酸性染料比色法 （硫酸阿托品片）（硫酸阿托品片）四氮唑比色法、异烟肼比色法四氮唑比色法、异烟肼比色法KoberKober反应法反应法 （甾体激素类药物）（甾体激素类药物）蛋白质的双缩脲反应蛋白质的双缩脲反应 （硫酸软骨素的测定）（硫酸软骨素的测定）总黄酮、总生物碱的测定总黄酮、总生物碱的测定（中药制剂）（中药制剂）2022-10-130n测定的是物质分子的发射光谱测定的是物质分子的发射光谱n定量分析：定量分析：物质的低溶液浓度物质的低溶液浓度 荧光（发射光）强度荧光
21、（发射光）强度n特点：特点：灵敏度高灵敏度高(10(10-10-101010-12-12 g/mL)g/mL)；专属性好专属性好 适于低浓度溶液分析（自熄灭）适于低浓度溶液分析（自熄灭）干扰因素多（空白试验）干扰因素多（空白试验）衍生后测定（利血平）衍生后测定（利血平）l荧光分光光度法荧光分光光度法正比关系正比关系2022-10-131Cx=RxRxbRrRrbCr 药物的浓度与相应的荧光读数之间的线性范围药物的浓度与相应的荧光读数之间的线性范围较窄，故较窄，故(RxRxb)/(RrRrb)应在应在0.52n测定方法测定方法对照品对照法对照品对照法:配制供试品溶液和对照品溶液，配制供试品溶液和
22、对照品溶液，相同条件下测定两者及其空白的荧光强度相同条件下测定两者及其空白的荧光强度测定前，常用基准溶液（硫酸奎宁、蓝色荧光）测定前，常用基准溶液（硫酸奎宁、蓝色荧光）校正仪器灵敏度校正仪器灵敏度2022-10-132n测定呈原子状态的测定呈原子状态的金属元素金属元素和部分非金属元素和部分非金属元素n定量分析：定量分析：测定测定该特征谱线辐射光强度减弱的该特征谱线辐射光强度减弱的程度，求出供试品中待测元素的含量程度，求出供试品中待测元素的含量n特点：特点：灵敏度高、专属性好灵敏度高、专属性好n测定方法：测定方法：标准曲线法、标准加入法标准曲线法、标准加入法 l原子吸收分光光度法原子吸收分光光度
23、法2022-10-133v特点：高灵敏度、高专属性、分析速度快特点：高灵敏度、高专属性、分析速度快 适用于药物制剂或复杂样品适用于药物制剂或复杂样品l高效液相色谱法（高效液相色谱法（HPLCHPLC）l气相色谱法（气相色谱法（GCGC）第四节第四节 色谱分析法色谱分析法分离分析分离分析方法方法2022-10-134 类类 型型 特特 点点HPLCHPLCGCGC分离效能高分离效能高（理论板数（理论板数 n n）10104 410105 5填充柱填充柱 10103 3毛细管柱毛细管柱=10=106 6分析速度快分析速度快几分钟几十分钟几分钟几十分钟 几分钟几十分钟几分钟几十分钟灵敏度高灵敏度高
24、（最小检出量）（最小检出量）UVD 10UVD 10-9-9g g FD 10 FD 10-13-13g gTCD 10TCD 10-8-8g gFID 10FID 10-13-13g g适用范围宽适用范围宽80%80%有机化合物有机化合物20%20%有机化合物有机化合物仪器化程度高仪器化程度高智能化智能化智能化智能化绝大部分药物绝大部分药物2022-10-135n固定相、流动相及检测器的选择固定相、流动相及检测器的选择常用系统（反相体系常用系统（反相体系RP-HPLCRP-HPLC）固定相：非极性色谱柱固定相：非极性色谱柱流动相：极性溶剂流动相：极性溶剂检测器：紫外吸收检测器检测器：紫外吸收
25、检测器适用于中等极性、弱极性的药物适用于中等极性、弱极性的药物l高效液相色谱法高效液相色谱法2022-10-136应用情况应用情况vHPLCHPLC法是药物制剂、多组分样品分析的法是药物制剂、多组分样品分析的首选方法首选方法，是各国药典收载的方法中应用最广的方法，是各国药典收载的方法中应用最广的方法v在原料药的含量测定中，在原料药的含量测定中，HPLCHPLC法主要用于法主要用于多组分多组分抗生素或生化药品抗生素或生化药品，或因所含，或因所含杂质干扰测定杂质干扰测定的化的化学品种。如：学品种。如：庆大霉素的组分测定，庆大霉素的组分测定，-内酰胺类、大环内酯类、四内酰胺类、大环内酯类、四环素类等
26、抗生素环素类等抗生素 甾体激素类药物甾体激素类药物2022-10-137n 色谱柱：十八烷基及其他化学键合硅胶结构示意图色谱柱：十八烷基及其他化学键合硅胶结构示意图蒲 公 英 图372022-10-138分析型色谱柱分析型色谱柱最常用：最常用：C18/ODSC18/ODS、C8C8内径：内径：4.6mm4.6mm长度：长度：15mm15mm、25mm25mm柱填料粒度：柱填料粒度：2 21010 mmpHpH：28282022-10-139n流动相：极性溶剂流动相：极性溶剂 过滤脱气过滤脱气多元体系多元体系缓冲盐缓冲盐甲醇甲醇-水水乙腈乙腈-水水四氢呋喃四氢呋喃-水水2022-10-140流动
27、相选择v调洗脱力强弱：四氢呋喃调洗脱力强弱：四氢呋喃乙腈乙腈甲醇甲醇水水v用过缓冲盐或酸碱流动相后，色谱柱必须用低用过缓冲盐或酸碱流动相后，色谱柱必须用低浓度甲醇溶液冲洗，再用甲醇冲洗浓度甲醇溶液冲洗，再用甲醇冲洗例如 乙腈（乙腈（30）乙腈乙腈-水水(15:15)乙腈乙腈-四氢呋喃四氢呋喃(15:15)2022-10-141灯灯 室室流通池流通池n检测器检测器 紫外检测器（紫外检测器（UVD UVD 最常用最常用）、）、二极管阵列（二极管阵列（DVDDVD）、）、以及荧光、电化学、示差折光、蒸发光散射（以及荧光、电化学、示差折光、蒸发光散射（ELSDELSD）和质谱检测器（和质谱检测器（MS
28、MS）紫外检测器外观图紫外检测器外观图2022-10-142n系统适用性试验系统适用性试验 理论板数理论板数（n）分离度分离度（R）重复性重复性（RSD）拖尾因子拖尾因子（T）用规定的对照品对仪器进行试验和调整用规定的对照品对仪器进行试验和调整2022-10-143 1 1）色谱柱的理论板数（）色谱柱的理论板数（n n）n n值越大柱效越高，值越大柱效越高，应高于规定的最小理论板数应高于规定的最小理论板数2R)Wt5.54(n21t tR R 保留时间保留时间W Wh/2h/2 半高峰宽半高峰宽2022-10-144 2 2）分离度（）分离度（R R）R R值越大分离效果越好值越大分离效果越好
29、 在规定的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，计算待在规定的条件下，注入对照液或供试液，记录色谱图，计算待测峰（定量峰）与相邻峰的分离度，应大于测峰（定量峰）与相邻峰的分离度，应大于1.51.5。=21)(212WWttRRR2022-10-145 3 3）重复性）重复性 考察测量的精密度考察测量的精密度 在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样在规定条件下，取一定量的对照液，连续进样3 35 5次，其峰面次，其峰面积测量值的相对标准偏差（积测量值的相对标准偏差（RSDRSD）应不大于）应不大于2.02.0。系统的精密度：系统的精密度：每次开机后，首先要做的日常工作，不能作为分析每次开机后
30、，首先要做的日常工作，不能作为分析方法学研究中的精密度试验方法学研究中的精密度试验 2022-10-146份号份号12345A20617.25 19663.07 19543.30 20412.41 19254.30 例题例题 取某对照品溶液取某对照品溶液10l，连续进样，连续进样5次，记录各次色谱峰峰次，记录各次色谱峰峰面积如下，试判断色谱系统重复性是否符合规定。面积如下，试判断色谱系统重复性是否符合规定。X=19898.1 S=586.789RSD=2.9%不符合规定不符合规定2022-10-147 4 4）拖尾因子（）拖尾因子（T T）考察色谱峰的对称性考察色谱峰的对称性 T T 值越接近
31、于值越接近于1.0 1.0 色谱峰的对称性越好，测量的准确度色谱峰的对称性越好，测量的准确度越高。越高。T T应在应在0.950.951.051.05之间。之间。105.02dWThWW0.05h0.05h为为0.050.05峰高处的峰宽峰高处的峰宽d d1 1为峰极大至峰前沿之间的距离为峰极大至峰前沿之间的距离为满足系统适用性试验要求，可以改变一些条件，如色谱柱内径、长度、牌号、载体粒度、流动相流速、组成比例、柱温等，但不能改变固定相种类，流动相组成和检测器类型2022-10-148组成复杂、多成分组成复杂、多成分内标法内标法需要内标物需要内标物外标法外标法对照品对照品能够精确进样量能够精确
32、进样量面积归一化法面积归一化法所有组分都出峰所有组分都出峰n测定方法测定方法2022-10-149被测成分与其峰面积成被测成分与其峰面积成正比关系正比关系要求供试液与对照液要求供试液与对照液浓度相近（相同条件）浓度相近（相同条件）=A供供A对对C供供对对样品样品C供供=C对对A供供A对对对照对照 外标法外标法含量计算公式同紫外2022-10-150外标法（标准曲线法）外标法（标准曲线法）绘制对照液浓度峰面积绘制对照液浓度峰面积(峰高峰高)标准曲线；标准曲线；拟合回归方程并计算拟合常数；拟合回归方程并计算拟合常数；测定供试品峰面积测定供试品峰面积(峰高峰高)，带入，带入方程，求浓度。方程，求浓度
33、。2022-10-151选择适宜的物质作为内标物，以待测组分和内标物的峰高比或选择适宜的物质作为内标物，以待测组分和内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法称为内标法峰面积比求算试样含量的方法称为内标法 内标法的关键是选择合适的内标物内标法的关键是选择合适的内标物 校正因子（f f）其含义为：内标物峰面积与其浓度之比（As/CsAs/Cs）是对照品峰面积与其浓度之比（AR/CRAR/CR）的多少倍f=As/CsAR/CR 内标加校正因子法内标加校正因子法2022-10-152对照对照+内标内标样品样品+内标内标样品样品内标内标对照对照内标内标C样样=f A A样样/(A/(A内内/C/C内内
34、)校正因子校正因子f=(A=(A内内/C/C内内)/(A)/(A对对/C/C对对)2022-10-153 醋酸氢化可的松的含量测定 取对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每1mL中约含0.35mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液（0.30mg/mL炔诺酮甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10L注入液相色谱仪。另取本品适量，同法测定，按内标法计算含量。5221345/61228455467824/612584336.2mg35.5mg 100%=97.4%例子例子已知：对照品取样已知：对照品取样36.2mg，样品取样，样品取样35.5mg，测得对照液中，测得对照液
35、中醋酸氢化可的松和内标的峰面积分别为醋酸氢化可的松和内标的峰面积分别为5467824和和6125843，供试液液中两者的峰面积分别为供试液液中两者的峰面积分别为5221345和和61228452022-10-154特点及区别：特点及区别：内标法使用校正因子，进样量不影响测定结果内标法使用校正因子，进样量不影响测定结果 外标法不使用校正因子，可达一定准确性，外标法不使用校正因子，可达一定准确性，操作条件变化对结果准确性影响较大操作条件变化对结果准确性影响较大 对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的快速分析快速分析2022-10-155n色
36、谱柱、载气及检测器色谱柱、载气及检测器氢火焰离子化检测器氢火焰离子化检测器热导检测器热导检测器 电子捕获检测器电子捕获检测器以气体为流动相的色谱法以气体为流动相的色谱法载气系统载气系统进样系统进样系统色谱柱色谱柱检测系统检测系统温控系统温控系统N2填充柱填充柱毛细管柱毛细管柱l气相色谱法气相色谱法进样室和检测器温度高于柱温进样室和检测器温度高于柱温2022-10-156溶液直接进样手动进样时应注意操作的一致性，以达到良好的精密度要求填充柱进样量不超过数微升毛细管柱进样不超过1微升，分流进样顶空进样 体积一般为1毫升 手动自动n进样方式进样方式2022-10-157n系统适用性试验：同系统适用性
37、试验：同HPLCHPLC法法n测定方法：测定方法：手动进样时，进样口温度高，注射器插入胶垫后针尖部分手动进样时，进样口温度高，注射器插入胶垫后针尖部分受热，以致针尖内溶液受热膨胀，部分溶液会被挤入进样受热，以致针尖内溶液受热膨胀，部分溶液会被挤入进样口，使进样量发生偏差。口，使进样量发生偏差。以内标法为主，操作及计算方法同以内标法为主，操作及计算方法同HPLCHPLC法法n 应用应用较少较少 维生素维生素E及其制剂的含量测定及其制剂的含量测定 有机溶剂残留检查有机溶剂残留检查 中药中乙醇、甲醇量测定中药中乙醇、甲醇量测定2022-10-158l专属性专属性（空白、可能的杂质、辅料、破坏试（空白
38、、可能的杂质、辅料、破坏试验、粗品），提供相应图谱验、粗品），提供相应图谱l线性与范围线性与范围（至少（至少5 5个浓度系列标准液）个浓度系列标准液）l精密度精密度（重复性、中间精密度），用高中低（重复性、中间精密度），用高中低浓度浓度9 9次测定结果评价次测定结果评价l准确度准确度（回收试验、加样回收试验），高中（回收试验、加样回收试验），高中低浓度低浓度9 9次测定结果评价次测定结果评价l耐用性耐用性（不同牌号柱、流动相组成比例、流（不同牌号柱、流动相组成比例、流速、速、pHpH、温度、测定液稳定性等）、温度、测定液稳定性等）第五节第五节 药物含量测定方法验证药物含量测定方法验证2022-10-159v理解原料药及制剂的含量表示方法及测定方法选择理解原料药及制剂的含量表示方法及测定方法选择v熟悉含量限度范围熟悉含量限度范围v熟悉各类定量分析方法的特点，掌握容量分析法、熟悉各类定量分析方法的特点，掌握容量分析法、紫外分光光度法及色谱法用于含量测定的定量方法，紫外分光光度法及色谱法用于含量测定的定量方法，定量以及及计算定量以及及计算v掌握色谱系统适用性试验、熟悉掌握色谱系统适用性试验、熟悉HPLC实验条件实验条件v熟悉含量测定方法验证内容熟悉含量测定方法验证内容知识点回顾知识点回顾
