1、共表达siRNA-Stat3与GRIM-19质粒对甲状腺癌细胞的抑制效应及机理探讨2022-10-4一、研究背景一、研究背景甲状腺癌癌基因Stat3促凋亡因子GRIM-19 甲状腺癌1.内分泌系统最常见肿瘤2.近年发病率上升3.约15%恶性度较高4.复发后再次手术难度大 癌基因Stat31.公认的癌基因2.抗凋亡、促进增殖转化3.已作为抗肿瘤靶基因 促凋亡因子GRIM-191.促凋亡因子2.抑制STAT3转录激活功能3.肿瘤中低表达STAT3是JAK-STAT信号转导途径中，Janus激酶的底物。该途径调节细胞的生长增殖，如果持续性激活，可导致细胞异常增殖与恶性转化，目前已在多种肿瘤组织中，证
2、实有Stat3的持续高表达，已被定义为癌基因。应用 RNAi 沉默Stat3的表达后，发现有显著的抗肿瘤效应。GRIM-19是STAT3的特异性抑制蛋白，可与STAT3蛋白TAD域结合，抑制其转录激活功能，从而阻止细胞生长增殖、促其凋亡。在哺乳动物细胞中，RNAi并不能完全阻断基因的表达，尤其是异常高表达的基因，为了寻求更好的治疗方案以加强疗效，我们采取了siRNA-Stat3联合GRIM-19的基因治疗方法。二、研究目的二、研究目的 观察协同抑制效应 探讨作用机制 哺乳动物细胞RNAi不能完全阻断基因表达：（1）异常高表达的基因 （2）siRNA同源序列的选择 （3）siRNA表达量及稳定性
3、 （4）残余mRNA所翻译蛋白抑制RNAi STAT3信号传导通路GRIM-19对STAT3的抑制机制真核表达质粒实验流程及方法三、方法路线三、方法路线四种真核表达质粒结构图 mock组 psi-Scramble组psi-Stat3组 pGRIM-19组 pGS组 RT-PCRWestern blot 检测基因表达显微镜观察细胞形态转染细胞MTT实验检测细胞增殖活性划痕实验Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力Transwell小室131.各组SW579细胞形态及增殖情况四、实验结果四、实验结果142.各组细胞增殖能力（48h）(*P0.05 versus Mock and pSi-Scr
4、amble;#P0.05 versus pGRIM-19 and pSi-Stat3)153.各组细胞Stat3、GRIM-19 mRNA表达水平 1:mock;2:pSi-Scramble;3:pSi-Stat3;4:pGRIM-19;5:pGS(*P0.01 versus Mock and psi-Scramble;P0.01 versus pSi-Stat3 and pGRIM-19)1:mock;2:pSi-Scramble;3:pSi-Stat3;4:pGRIM-19;5:pGS(*P0.01 versus Mock and pSi-Scramble;P0.05 versus psi
5、-Stat3 and pGRIM-19)175.各组细胞迁移能力 (*P0.01 versus Mock and pSi-Scramble;#P0.01 versus pGRIM-19)186.各组细胞侵袭能力 (*P0.01 versus Mock and pSi-Scramble;#P0.01 versus psi-Stat3 and pGRIM-19)19 五五、结、结 论论 质粒的作用质粒的作用1.psi-Stat3可抑制SW579细胞增殖与侵袭、促进凋亡2.pGRIM-19可抑制SW579细胞增殖促进凋亡3.pGS有明显的协同作用 可能的作用机制可能的作用机制1.RNAi使STAT3蛋白表达下降2.GRIM-19表达增强抑制了STAT3的转录激活功能，间接抑制了MMP9和Bcl-2基因表达3.两者协同抑制Stat3,致使细胞增殖、侵袭和迁移能力下降21 致 谢 衷心感谢我的导师XXX老师！感谢您三年来的辛勤培养与耐心指导，感谢您在学习和生活上的关心与照顾。您严谨的治学作风，不倦的敬业精神是我学习的楷模，在事业上激励我不断进取。衷心感谢XX外科XX主任、XX教授、XX教授等各位老师与同学在学习与生活上的教育支持 与帮助。衷心感谢基础医学院XX教授与XX教授的精心培养严格要求与无私帮助。
