1、医学免疫学实验医学免疫学实验第一讲抗原抗体反应antigen-antibody reaction什么是抗原抗体反应？抗原与相应抗体的特异性结合反应称为抗原抗体反应。抗原抗体反应既可在体内作为体液免疫应答的效应机制自然发生，也可在体外作为免疫学实验的结果出现。在体内，可表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素等作用，有时亦可引起免疫病理损伤，在体外，依相应抗原物理性状(颗粒状或可溶性)以及反应的条件(电解质、补体等)不同，可出现凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反应。抗原抗体反应的基础 抗原抗体反应的特点1.特异性 Ab 1Ab2Ab3抗原抗体反应的特点2.比例 性抗体过剩抗原过剩抗原抗体比例合适通过
2、搭桥作用使红细胞凝集静置3分钟，观察凝聚现象，判定实验结果抗球蛋白可以和IgG反应1、对流免疫电泳试验中如果抗原、抗体的正极和负极放反了是否会出现沉淀线？为什么？Karl Landsteiner免疫标记的抗原抗体反应。血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的体外抗原抗体反应的影响因素第一讲抗原抗体反应antigen-antibody reaction不同蛋白质分子根据其氨基酸组成及所在溶液的pH值，携带的静电荷不尽相同，致使它们在电场中的迁移率各异，从而达到分理的目的。ABO血型系统发现者-奥地利科学家
3、Ag Concentration1：载玻片、打孔器、三角烧瓶、移液管、洗耳球、10%的琼脂、记号笔在两区分别滴加一滴抗A定型试剂和抗B定型试剂，立即用牙签混匀抗原抗体反应既可在体内作为体液免疫应答的效应机制自然发生，也可在体外作为免疫学实验的结果出现。了解血型鉴定实验的用途。1901年发现的人类第一个血型系统-ABO血型检查临床意义抗原抗体反应的特点 3.可逆性 体外抗原抗体反应的影响因素电电 解解 质质 温温 度度 酸酸 碱碱 度度 作用时间作用时间抗原抗体反应类型 可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应 颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的凝集反应 抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应
4、细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应 免疫标记的抗原抗体反应。凝集反应-ABO-ABO血型的鉴定血型的鉴定体外抗原抗体反应的影响因素抗原抗体反应既可在体内作为体液免疫应答的效应机制自然发生，也可在体外作为免疫学实验的结果出现。1901年发现的人类第一个血型系统-不同蛋白质分子根据其氨基酸组成及所在溶液的pH值，携带的静电荷不尽相同，致使它们在电场中的迁移率各异，从而达到分理的目的。对流免疫电泳实质上是由电泳定向加速的双向扩散抗原在电泳时从负极向正极移动抗原抗体反应的基础抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的
5、糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的抗球蛋白法检测IgG抗体的原理1：载玻片、打孔器、三角烧瓶、移液管、洗耳球、10%的琼脂、记号笔在形成白色沉淀线。了解血型鉴定实验的用途。总电流4mA/cm x 2.通过搭桥作用使红细胞凝集母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病，主要是依靠血型血清学检查来诊断。实 验 目 的熟悉凝集反应的定义及血型鉴定实验的原理。掌握血型鉴定实验的操作及结果的正确观察与判断。了解血型鉴定实验的用途。凝集反应定义：在一定浓度的电解质环境中，颗粒性抗原（红细胞、细菌、乳胶颗粒等）和相应抗体反应能够产生肉眼可见的凝集块 直接凝集 间接凝集 间接凝集抑制试验 抗球蛋
6、白试验直接凝集反应直接凝集反应间接凝集反应间接凝集反应间接凝集抑制间接凝集抑制抗球蛋白法检测抗球蛋白法检测IgG抗体的原理抗体的原理概 述 1901年发现的人类第一个血型系统-ABO血型系统发现者-奥地利科学家 Karl Landsteiner【实验原理】血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的+实验器材1：载玻片、采血针、牙签等：载玻片、采血针、牙签等2：A型和B型标准血清、酒精棉球操作步骤1.取载玻片，酒精消毒正面，在背面标记A和B两区2.酒精消毒指端皮肤和采血针后，用采血针刺破皮肤，挤出少量血液，
7、涂在玻片A、B两区，并立即用无菌干棉球压迫止血3.在两区分别滴加一滴抗A定型试剂和抗B定型试剂，立即用牙签混匀4.静置3分钟，观察凝聚现象，判定实验结果实验结果实验结果 ABO血型检查临床意义 1.输血：输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血完全相合才能输血。2.母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病，主要是依靠血型血清学检查来诊断。3.器官移植时受者与供者也必须ABO血型相符合才能移植，血型不符极易引起急性排异反应、导致移植失败。4.ABO血型与疾病之间的联系也有一些报道，某些看来造血系统无关的疾病实际上可能与红细胞血型抗原有关。沉淀反应-对流免疫电泳对流免疫电泳沉淀反应 可溶
8、性抗原在有适量电解质存在的条件下与相应的抗体结合，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应 类型：沉淀反应沉淀反应环状沉淀反应环状沉淀反应絮状反应絮状反应琼脂扩散琼脂扩散单向扩散单向扩散双向扩散双向扩散 电泳电泳火箭电泳火箭电泳对流免疫电泳对流免疫电泳单向扩散Ag ConcentrationDiameter2AgAgAgAgAb in gel单向扩散双向扩散 即将抗原和抗体分别加入琼脂对应的孔中，二者会向四周扩散，在形成白色沉淀线。二者比例合适处二者比例合适处双向扩散电 泳 定义：即带电颗粒在电场的作用下向着相反的电极移动，称为电泳。原理：蛋白质分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及侧链的游离基团而
9、成为带电颗粒，并可在电场内移动，其移动方向取决于蛋白质分子所带静电荷。不同蛋白质分子根据其氨基酸组成及所在溶液的pH值，携带的静电荷不尽相同，致使它们在电场中的迁移率各异，从而达到分理的目的。火箭免疫电泳火箭免疫电泳对流免疫电泳 对流免疫电泳实质上是由电泳定向加速的双向扩散 抗原在电泳时从负极向正极移动 抗体由正极向负极移动实验器材1 1：载玻片、打孔器、三角烧瓶、移液管、洗耳：载玻片、打孔器、三角烧瓶、移液管、洗耳球、球、10%10%的琼脂、记号笔的琼脂、记号笔2：酒精灯、火柴、电炉、电泳仪、电泳槽3：微量加样器、抗原及抗体样品操作步骤制板制板打孔打孔封底封底加样加样电泳电泳34ml琼脂琼脂孔间距孔间距3mm约约7ul切割火焰切割火焰23次次总电流总电流4mA/cm x 2.5cm(板宽板宽)x N(板数）板数）30分钟分钟 抗原抗原 抗体抗体对流免疫电泳实验结果对流免疫电泳思 考 题1、对流免疫电泳试验中如果抗原、抗体的正极和负极放反了是否会出现沉淀线？为什么？2、抗原抗体反应检测的临床意义有哪些？实验操作录像实验操作录像实验报告 实验原理 实验方法 实验结果及分析 思考题参考书籍及网站
