1、IGF-基因启动子甲基化状态基因启动子甲基化状态 与肝癌发生关系研究与肝癌发生关系研究钱静 姚登福南通大学附属医院临床医学研究中心研究背景研究背景 肝细胞癌(HCC)是与慢性病毒感染密切相关 流行病调查，我国目前约9 300万乙肝病毒携带者，约4 000万丙型肝炎病毒感染者。预后差，5年生存率约11%。原癌基因激活原癌基因激活抑癌基因失活抑癌基因失活肝癌肝癌DNA 甲基化原理甲基化原理DNA甲基化主要发生在甲基化主要发生在CpG二核苷序列的胞嘧啶上二核苷序列的胞嘧啶上胰岛素样生长因子胰岛素样生长因子（IGF-）uIGF-是一种与肿瘤形成密切相关的促有丝分裂原，在是一种与肿瘤形成密切相关的促有丝
2、分裂原，在细胞增殖、分化、糖代谢调节方面有重要作用。细胞增殖、分化、糖代谢调节方面有重要作用。u IGF-在胎肝和新生儿肝脏中基因有大量表达在胎肝和新生儿肝脏中基因有大量表达,但出生但出生后基因迅速降低直至关闭后基因迅速降低直至关闭,肝细胞癌变时肝细胞癌变时IGF2 呈胚胎呈胚胎性过量表达性过量表达,并具有强烈的致有丝分裂剂作用并具有强烈的致有丝分裂剂作用,参与肿瘤参与肿瘤细胞增生及分化。细胞增生及分化。IGF-基因启动子与基因表达的关系基因启动子与基因表达的关系E1 E2 E3E4E5E6 E7 E8E9P1P2P3P4人人P2IGF-信号途径与肝癌信号途径与肝癌IGF-IRSSHCpppp
3、ppPI3KAktRasRafMAPKIGF-RProliferation Survival MetastasisIGF-IGF-实验目的实验目的 本研究动态观察鼠肝细胞癌变过程中IGF-基因启动子甲基化状态改变及其与IGF-基因表达的关系；同时分析人不同肝组织中IGF-基因启动子甲基化状态及与临床病理学特征之间的关系，探讨IGF-启动子甲基化状态改变在HCC形成中的作用机制。材料和方法材料和方法 以2-乙酰氨基芴（2-FAA）喂饲雄性Sprague-Dawley（SD）鼠诱发肝细胞癌变，通过病理组织学方法（HE染色）观察肝细胞形态学动态变化；以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测鼠IGF-
4、基因P2甲基化状态；以酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测鼠外周血和肝组织IGF-基因的蛋白表达水平；以MSP检测人类肝细胞癌、癌旁以及正常肝脏组织IGF-基因P3甲基化状态。图图1 诱癌过程中鼠肝大体标本和病理学变化（诱癌过程中鼠肝大体标本和病理学变化（HE染色染色200）A：正常；：正常；B：早期；：早期；C：中期；：中期；D：晚期：晚期结果与讨论结果与讨论图图2 癌变过程中鼠癌变过程中鼠IGF-P2 CpG岛甲基化状态电泳分析岛甲基化状态电泳分析M：甲基化；：甲基化；U：非甲基化；：非甲基化；1：正常肝；：正常肝；2：变性肝；：变性肝；3：癌前肝；：癌前肝；4：癌变肝；：癌变肝；5：部分
5、甲基化：部分甲基化表表1 诱癌过程中诱癌过程中IGF-P2甲基化状态的动态观察甲基化状态的动态观察 表表2 诱癌过程中鼠血和肝诱癌过程中鼠血和肝IGF-表达水平的定量分析表达水平的定量分析1、Pearson相关显示，鼠肝和血相关显示，鼠肝和血IGF-蛋白浓度呈正相关（蛋白浓度呈正相关（r=0.97，P=0.000）2、Spearman相关显示，相关显示，IGF-P2去甲基化与外周血（去甲基化与外周血（rs=-0.89，P=0.000）和鼠肝蛋白浓度均呈正相关（）和鼠肝蛋白浓度均呈正相关（rs=0.84，P=0.000）图图3 人肝癌组织人肝癌组织IGF-基因基因P3CpG岛甲基化电泳图谱岛甲基
6、化电泳图谱U:非甲基化；非甲基化；M：甲基化；：甲基化；T:癌；癌；NT：癌旁；：癌旁；N:正常肝；正常肝；m:marker表表3 人肝癌组织中人肝癌组织中IGF-基因基因P3甲基化率比较甲基化率比较 表表4 癌旁组织癌旁组织IGF-P3甲基化的临床病理学特征甲基化的临床病理学特征结结 论论1.随着肝细胞癌变，IGF-基因启动子的甲基化率逐步降低，甲基化状态的改变贯穿肝细胞癌变过程，这有助于探讨肝癌发病机制。2.IGF-基因启动子的去甲基化状态改变与蛋白表达水平呈现显著正相关，基因的去甲基化调控基因表达上调而导致蛋白水平增高，参与肝细胞癌变。3.IGF-II启动子CpG岛甲基化程度与HBV感染与否密切相关，而这对于HBV相关肝细胞癌发生的监测/预测具有潜在的应用前景。E-mail:
