1、第第15讲骨代谢异常生物化学诊断讲骨代谢异常生物化学诊断教学目标与要求教学目标与要求1.掌握掌握钙、磷、镁代谢异常与代谢性骨病的关系钙、磷、镁代谢异常与代谢性骨病的关系骨矿物质的激素调节与代谢性骨病的关系骨矿物质的激素调节与代谢性骨病的关系血清钙、磷和镁的检测方法血清钙、磷和镁的检测方法骨钙素、骨性碱性磷酸酶、骨钙素、骨性碱性磷酸酶、型胶原前肽和型胶原前肽和型胶原交联降解产物在代谢性骨病型胶原交联降解产物在代谢性骨病诊断中的意义诊断中的意义 2020/12/1922.熟悉熟悉骨组织的基本组成、成骨作用与钙化、溶骨作用与脱钙骨组织的基本组成、成骨作用与钙化、溶骨作用与脱钙甲状旁腺素、降钙素和甲状
2、旁腺素、降钙素和1,25-(OH)2D3的主要生理作用的主要生理作用 PTH、CT、维生素、维生素D的常用测定方法的常用测定方法 3.了解了解PTH、CT与与1,25-(OH)2D3的合成与分泌及其调节的合成与分泌及其调节骨形成和吸收标志物的测定方法骨形成和吸收标志物的测定方法教学目标与要求教学目标与要求2020/12/193骨组织组成骨组织组成 2020/12/194 骨组织与体内钙、磷代谢密切相关。由于多种原因引起骨组织中钙、磷等矿物质、成骨骨组织与体内钙、磷代谢密切相关。由于多种原因引起骨组织中钙、磷等矿物质、成骨细胞和细胞和/或破骨细胞功能异常，造成骨基质、骨细胞代谢紊乱，使骨组织处于
3、异常的疾病或破骨细胞功能异常，造成骨基质、骨细胞代谢紊乱，使骨组织处于异常的疾病状态，总称为骨代谢疾病（异常），包括佝偻病、骨软化病、骨质疏松症等。状态，总称为骨代谢疾病（异常），包括佝偻病、骨软化病、骨质疏松症等。骨代谢异常（疾病）骨代谢异常（疾病）2020/12/195目录目录 钙磷镁代谢异常与代谢性骨病钙磷镁代谢异常与代谢性骨病1激素调节与代谢性骨病激素调节与代谢性骨病2血清钙磷镁的测定血清钙磷镁的测定3骨代谢异常的生物化学测定骨代谢异常的生物化学测定4小结与展望小结与展望5返回总目录返回总目录2020/12/196第一节第一节钙磷镁代谢异常与代谢性骨病钙磷镁代谢异常与代谢性骨病 202
4、0/12/1971.血钙血钙 钙被称为钙被称为“生命金属生命金属”，占人体体重的，占人体体重的1.5%2.0%，其中，其中99%存在于骨骼和牙齿中。存在于骨骼和牙齿中。血浆中的钙约占机体总钙的血浆中的钙约占机体总钙的0.1%，称为血钙。，称为血钙。一、钙代谢异常一、钙代谢异常（一）血钙与骨代谢（一）血钙与骨代谢2020/12/198血钙血钙离子钙（游离钙）（约离子钙（游离钙）（约50）结合钙（约结合钙（约50）与清蛋白结合与清蛋白结合（大部分）（大部分）与柠檬酸等结合与柠檬酸等结合（小部分）（小部分）可扩散钙可扩散钙不可扩散钙不可扩散钙血钙存在形式血钙存在形式2020/12/199人体钙分布人
5、体钙分布2020/12/19102.成骨作用（成骨作用（osteogenesis）骨的生长、修复或重建过程骨的生长、修复或重建过程 钙化（钙化（calcification）成骨过程中，成骨细胞合成和分泌胶原和蛋白多糖等细胞间质成分，形成成骨过程中，成骨细胞合成和分泌胶原和蛋白多糖等细胞间质成分，形成“类骨质类骨质”，继，继后将钙、磷吸收到纤维的孔隙中进行沉淀结晶的过程后将钙、磷吸收到纤维的孔隙中进行沉淀结晶的过程 2020/12/1911影响成骨作用（钙化）的主要因素影响成骨作用（钙化）的主要因素 血液与骨组织微环境中的血液与骨组织微环境中的CaP浓度乘积浓度乘积正常血中存在的焦磷酸盐等抑制骨
6、钙化正常血中存在的焦磷酸盐等抑制骨钙化 基质中的骨连接素促进羟磷石结晶的形成并规律排列基质中的骨连接素促进羟磷石结晶的形成并规律排列胶原纤维的成熟和类骨质的正常是骨盐沉积的基础胶原纤维的成熟和类骨质的正常是骨盐沉积的基础骨形态发生蛋白（骨形态发生蛋白（BMPs）与骨的生成相关）与骨的生成相关 2020/12/19123.溶骨作用（溶骨作用（osteolysis）骨的溶解和消失骨的溶解和消失，包括基质的水解和骨盐的溶解，主要由破骨细胞引起，包括基质的水解和骨盐的溶解，主要由破骨细胞引起。又称：骨吸收（又称：骨吸收（bone resorption）脱钙（脱钙（decalcification）202
7、0/12/1913（二）常见钙代谢异常（二）常见钙代谢异常1高钙血症高钙血症（hypercalcemia）概概 念：血钙浓度超过念：血钙浓度超过2.75 mmol/L常见表现：恶心、呕吐、便秘、嗜睡、神志不清等常见表现：恶心、呕吐、便秘、嗜睡、神志不清等 病程长时可发生组织内钙沉积病程长时可发生组织内钙沉积2020/12/1914常见病因：常见病因：原发性甲状旁腺功能亢进原发性甲状旁腺功能亢进 甲状旁腺素异位分泌甲状旁腺素异位分泌 恶性肿瘤骨转移恶性肿瘤骨转移 维生素维生素D中毒中毒 其它疾病其它疾病超过超过90902020/12/19152低钙血症低钙血症（hypocalcemia）概概 念
8、：血钙浓度低于念：血钙浓度低于2.25 mmol/L 常见表现：手足抽搐、肌痉挛、喉鸣、惊厥等常见表现：手足抽搐、肌痉挛、喉鸣、惊厥等 骨质钙化障碍包括佝偻病骨质钙化障碍包括佝偻病、骨质软化等、骨质软化等 2020/12/1916常见病因：常见病因：甲状旁腺功能低下甲状旁腺功能低下 维生素缺维生素缺D缺乏缺乏 慢性肾功能衰竭慢性肾功能衰竭 新生儿低钙血症新生儿低钙血症 长期低钙饮食或吸收不良等情况长期低钙饮食或吸收不良等情况2020/12/1917二、磷代谢异常二、磷代谢异常（一）常见磷代谢异常（一）常见磷代谢异常 1 1高磷血症高磷血症 （hyperphosphatemia ）概概 念：血磷
9、浓度念：血磷浓度成人大于成人大于1.61 mmol/L 儿童大于儿童大于1.90 mmol/L 常见表现：常见表现：低钙血症、骨质钙化障碍低钙血症、骨质钙化障碍 2020/12/1918高磷血症常见病因：高磷血症常见病因：甲状旁腺功能减退甲状旁腺功能减退 维生素维生素D增多症增多症 慢性肾功能不全或衰竭慢性肾功能不全或衰竭 多发性骨髓瘤与某些骨病多发性骨髓瘤与某些骨病 新生儿生理状况下血钙较成人低，而血磷明显高于成人新生儿生理状况下血钙较成人低，而血磷明显高于成人2020/12/19192低磷血症低磷血症（hypophosphatemia）概概 念：血磷浓度小于念：血磷浓度小于0.8 mmol
10、/L常见表现：鸭态步、骨痛、佝偻病、病理性骨折、常见表现：鸭态步、骨痛、佝偻病、病理性骨折、精神错乱、抽搐和昏迷等精神错乱、抽搐和昏迷等 2020/12/1920低磷血症常见病因：低磷血症常见病因：甲状旁腺功能亢进甲状旁腺功能亢进 佝偻病或骨软化症佝偻病或骨软化症 糖利用增加糖利用增加 乳糜泻乳糜泻 肝硬化和肾脏疾病肝硬化和肾脏疾病 使用雌激素、避孕药和苯巴比妥等药物使用雌激素、避孕药和苯巴比妥等药物2020/12/1921（二）低磷血症与代谢性骨病（二）低磷血症与代谢性骨病 1.低磷性佝偻病和骨软化症低磷性佝偻病和骨软化症血磷显著降低，并有明显的肌无力血磷显著降低，并有明显的肌无力病人下肢无
11、力，步态蹒跚或呈鸭态步病人下肢无力，步态蹒跚或呈鸭态步2.X连锁家族性低磷血症连锁家族性低磷血症又称遗传性低血磷性维生素又称遗传性低血磷性维生素D抵抗性佝偻病抵抗性佝偻病病因：肾小管对磷的重吸收障碍；肠道对磷的吸收减少病因：肾小管对磷的重吸收障碍；肠道对磷的吸收减少后果：血磷降低而引起佝偻病的骨改变后果：血磷降低而引起佝偻病的骨改变2020/12/1922三、镁代谢异常三、镁代谢异常（一）常见镁代谢异常（一）常见镁代谢异常 1 1低镁血症低镁血症（hypomagnesemia）概概 念：念：血清镁低于血清镁低于0.75 mmol/L常见表现：常见表现：神经神经-肌肉障碍和精神与行动的异常肌肉障
12、碍和精神与行动的异常 2020/12/1923 消化道吸收障碍消化道吸收障碍 尿路丢失增多尿路丢失增多 内分泌疾病内分泌疾病 其它疾病其它疾病低镁血症常见病因低镁血症常见病因2020/12/19242 2高镁血症高镁血症（hypermagnesemia）概概 念：念：血清镁高于血清镁高于1.25 mmol/L常见病因：常见病因：肾脏疾病肾脏疾病 内分泌疾病内分泌疾病 其它疾病其它疾病2020/12/1925（二）镁代谢异常与代谢性骨病（二）镁代谢异常与代谢性骨病 u大鼠实验表明，大鼠实验表明，低镁幼鼠的钙化骨减少、发生多种骨骼畸形低镁幼鼠的钙化骨减少、发生多种骨骼畸形 u高镁可影响成骨作用，发
13、生骨营养不良高镁可影响成骨作用，发生骨营养不良返回章目录返回章目录2020/12/1926第二节第二节激素调节与代谢性骨病激素调节与代谢性骨病 2020/12/1927一、甲状旁腺素一、甲状旁腺素（parathormone，PTH）（一）甲状旁腺素合成与分泌（一）甲状旁腺素合成与分泌甲状旁腺甲状旁腺主细胞主细胞 前甲状旁腺素前甲状旁腺素原原 115aa115aa甲状旁甲状旁腺素原腺素原 90aa90aaPTH PTH 84aa84aa2020/12/1928（二）（二）PTH的的生理作用：升高血钙、降低血磷生理作用：升高血钙、降低血磷 1.对骨的作用对骨的作用 动员骨钙入血，使血钙升高动员骨钙
14、入血，使血钙升高 增加骨吸收和骨生成，骨吸收大于骨生成增加骨吸收和骨生成，骨吸收大于骨生成 2.对肾的作用对肾的作用钙重吸收钙重吸收磷重吸收磷重吸收保钙排磷保钙排磷2020/12/19293.对小肠的作用对小肠的作用PTH激活肾脏激活肾脏1-1-羟化酶羟化酶 活性活性D D3 3增加增加 肠道吸收钙增加肠道吸收钙增加2020/12/1930（三）甲状旁腺功能异常与代谢性骨病（三）甲状旁腺功能异常与代谢性骨病轻型的原发性甲状旁腺功能亢进患者轻型的原发性甲状旁腺功能亢进患者中重型原发性甲状旁腺功能亢进患者中重型原发性甲状旁腺功能亢进患者典型骨病变：纤维性囊性骨炎（棕色瘤）典型骨病变：纤维性囊性骨炎
15、（棕色瘤）2020/12/1931二、降钙素二、降钙素（calcitonin，CT）（一）降钙素的合成与分泌（一）降钙素的合成与分泌甲状腺滤泡旁细胞合成和分泌甲状腺滤泡旁细胞合成和分泌单链多肽，由单链多肽，由32个氨基酸残基组成个氨基酸残基组成血钙是影响血钙是影响CT分泌的主要因素分泌的主要因素2020/12/1932抑制破骨、促进成骨抑制破骨、促进成骨抑制肾小管对钙、磷的重吸收抑制肾小管对钙、磷的重吸收抑制肾维生素抑制肾维生素D-1-羟化酶活性羟化酶活性因雌激素减少而减少因雌激素减少而减少（二）降钙素的生理作用（二）降钙素的生理作用降低血钙、降低血磷降低血钙、降低血磷其主要作用机制为：其主要
16、作用机制为：2020/12/1933三、三、活性维生素活性维生素D（一）活性维生素（一）活性维生素D的的生成生成 2020/12/1934（二）活性维生素（二）活性维生素D的生理作用：升高血钙、升高血磷的生理作用：升高血钙、升高血磷 基本途径基本途径活性维生素活性维生素D D靶细胞上维生素靶细胞上维生素D D受受体体激素受体复合物激素受体复合物二聚体二聚体维生素维生素D D反应元反应元件件相关基因的转录和相关基因的转录和翻译翻译钙磷代谢调钙磷代谢调控控视黄醛视黄醛X X受体受体 2020/12/19351.对小肠的作用：促进小肠对钙磷的吸收和转运对小肠的作用：促进小肠对钙磷的吸收和转运小肠粘膜
17、上皮细胞维生素小肠粘膜上皮细胞维生素D D受体受体活性维生素活性维生素D D相关基因的转录和翻译相关基因的转录和翻译钙结合蛋白表达上钙结合蛋白表达上调调Ca2+-Mg2+ATP酶酶增加增加小肠钙转运增小肠钙转运增加加2020/12/19362.对骨的作用：溶骨和成骨的双重作用对骨的作用：溶骨和成骨的双重作用 活性维生素活性维生素D D增加破骨细胞数量和活增加破骨细胞数量和活性性协同协同PTHPTH增加破骨细胞增加破骨细胞数量数量增加血钙增加血钙增加胶原增加胶原促进溶骨促进溶骨（低血钙时）（低血钙时）促进成骨促进成骨（高血钙时）（高血钙时）3.对肾脏的作用：促进肾小管对钙、磷的重吸收对肾脏的作用
18、：促进肾小管对钙、磷的重吸收 2020/12/1937（三）维生素（三）维生素D缺乏与代谢性骨病缺乏与代谢性骨病1 1佝偻病和骨软化症佝偻病和骨软化症 活性维生素活性维生素D D缺乏缺乏儿童儿童成人成人骨质软化症骨质软化症佝偻病佝偻病2020/12/19382 2肝性佝偻病肝性佝偻病 肝功能障碍肝功能障碍25-25-羟化酶下降羟化酶下降25-羟化酶 活性维生素活性维生素D D缺缺乏乏胆道阻塞钙皂形成胆道阻塞钙皂形成 维生素维生素D D吸收障吸收障碍碍维生素维生素D D缺乏缺乏佝偻病症状佝偻病症状2020/12/19393 3肾性佝偻病、肾性骨营养不良肾性佝偻病、肾性骨营养不良 （renal o
19、steodystrophy）肾功能障碍肾功能障碍1-1-羟化酶下羟化酶下降降活性维生素活性维生素D D缺缺乏乏尿磷减少尿钙尿磷减少尿钙增加增加血磷增加血钙血磷增加血钙减少减少佝偻病症状佝偻病症状2020/12/19404.维生素维生素D依赖性佝偻病（依赖性佝偻病（vitamin D depedent rickets，VDDR）又称假性维生素）又称假性维生素D缺乏症缺乏症。其特点为：其特点为：肾小管上皮细胞肾小管上皮细胞1-羟化酶先天性缺陷羟化酶先天性缺陷常染色体隐形遗传常染色体隐形遗传维生素维生素D缺乏症状典型，发病早缺乏症状典型，发病早大剂量活性维生素大剂量活性维生素D治疗可使疾病缓解治疗可
20、使疾病缓解 2020/12/19415.维生素维生素D抵抗（抵抗（vitamin D resistance）机体对正常剂量甚至大剂量的维生素机体对正常剂量甚至大剂量的维生素D或或1,25-(OH)2D3的低反应或无反应现象的低反应或无反应现象 其特点为：其特点为：维生素维生素D受体基因突变：常染色体隐性遗传受体基因突变：常染色体隐性遗传 常见的有三个主要位点：常见的有三个主要位点：Q259E、G319V和和R73X临床上具有典型的佝偻病症状和体征临床上具有典型的佝偻病症状和体征约约50%的患者对任何形式的维生素的患者对任何形式的维生素D治疗无效治疗无效2020/12/1942钙磷代谢的激素调节
21、钙磷代谢的激素调节2020/12/1943包括雌激素和雄激素，对处于生长阶段的个体骨骼发育和成熟十分重要。包括雌激素和雄激素，对处于生长阶段的个体骨骼发育和成熟十分重要。雌激素对雌激素对1,25-(OH)2D3的合成、降钙素和的合成、降钙素和PTH分泌均有重要的调节作用。分泌均有重要的调节作用。雄性激素能促进蛋白质和骨基质的合成，促进肌肉和骨骼生长。雄性激素能促进蛋白质和骨基质的合成，促进肌肉和骨骼生长。国内外报道中老年人骨矿物质丢失速度与血清性激素含量呈负相关。国内外报道中老年人骨矿物质丢失速度与血清性激素含量呈负相关。四、性激素四、性激素2020/12/1944 定义：骨质疏松症是一种全身
22、性的骨量减少，以骨组织显微结构退化为特征，并引起骨定义：骨质疏松症是一种全身性的骨量减少，以骨组织显微结构退化为特征，并引起骨脆性增加、骨强度降低的疾病。此时骨矿物质和骨基质等比例减少，基本特点在于单位体积内脆性增加、骨强度降低的疾病。此时骨矿物质和骨基质等比例减少，基本特点在于单位体积内骨组织量减少。骨组织量减少。分类：分类：原发性原发性 继发性（其中退行性骨质疏松症发病率最高继发性（其中退行性骨质疏松症发病率最高）骨质疏松症骨质疏松症2020/12/1945退行性骨质疏松症的分型退行性骨质疏松症的分型型骨质疏松症（绝经后骨质疏松症）型骨质疏松症（绝经后骨质疏松症）型骨质疏松症（老年性骨质疏
23、松症）型骨质疏松症（老年性骨质疏松症）2020/12/1946（一）（一）型骨质疏松症型骨质疏松症基本原因是雌激素分泌不足基本原因是雌激素分泌不足破骨细胞过于活跃，骨转换增加破骨细胞过于活跃，骨转换增加 骨矿含量减少，导致骨质疏松骨矿含量减少，导致骨质疏松 表现为单位体积内的骨量减少表现为单位体积内的骨量减少 血液生化指标基本正常血液生化指标基本正常 但骨形成和骨吸收的指标有增高但骨形成和骨吸收的指标有增高 2020/12/1947（二）（二）型骨质疏松症型骨质疏松症中老年人骨的吸收大于骨形成，导致骨质疏松中老年人骨的吸收大于骨形成，导致骨质疏松 细胞学基础：破骨细胞的吸收增加细胞学基础：破骨
24、细胞的吸收增加 成骨细胞功能衰减成骨细胞功能衰减主要由于老年人身体各机能退化而致主要由于老年人身体各机能退化而致骨形成与骨吸收的生化指标均有降低倾向骨形成与骨吸收的生化指标均有降低倾向 返回章目录返回章目录2020/12/1948第三节第三节血清钙磷镁的测定血清钙磷镁的测定 2020/12/1949一、血清钙的测定一、血清钙的测定（一）血清钙测定方法概述（一）血清钙测定方法概述总钙测定总钙测定 v标标 本：本：血清或低浓度肝素抗凝血浆血清或低浓度肝素抗凝血浆v测定方法：滴定法、比色法、火焰光度法、测定方法：滴定法、比色法、火焰光度法、原子吸收分光光度法、同位素稀释质谱法等原子吸收分光光度法、同
25、位素稀释质谱法等 v决定性方法：同位素稀释决定性方法：同位素稀释-质谱法质谱法（IFCC）v参考方法：原子吸收分光光度法参考方法：原子吸收分光光度法（IFCC）v常规方法：邻甲酚酞络合酮常规方法：邻甲酚酞络合酮（O-CPC）法法（卫生部）（卫生部）2020/12/1950（二）血清钙测定方法概述（二）血清钙测定方法概述离子钙测定离子钙测定 标标 本：本：血清、低浓度肝素抗凝血浆或全血血清、低浓度肝素抗凝血浆或全血测定方法：生物学法、透析法、超滤法、测定方法：生物学法、透析法、超滤法、金属指示剂法、金属指示剂法、ISE法等法等参考方法：参考方法：ISE法法2020/12/1951（三）血清钙测定
26、（三）血清钙测定总钙测定总钙测定O-CPC 法法1.测定原理测定原理（总）钙（总）钙O-CPC紫红色螯合物（紫红色螯合物（575nm）pH108-羟基喹啉羟基喹啉2.方法评价方法评价操作简便、快速、稳定，同时适于手工和自动化分析操作简便、快速、稳定，同时适于手工和自动化分析反应体系的反应体系的pH值对结果影响较大值对结果影响较大 2020/12/1952（四）血清钙测定（四）血清钙测定离子钙测定离子钙测定ISE 法法1.测定原理测定原理 Nernst方程式：在一定条件下，方程式：在一定条件下，ISE的电位与溶液中的被测离子浓度的电位与溶液中的被测离子浓度的对数成正比的对数成正比 2.方法评价方
27、法评价操作简便、快速、重复性好操作简便、快速、重复性好准确度和敏感性高，影响因素少准确度和敏感性高，影响因素少 2020/12/1953二、血清磷的测定二、血清磷的测定（一）血清磷测定方法概述（一）血清磷测定方法概述标标 本：血清、肝素化血浆本：血清、肝素化血浆常用方法：磷钼酸还原法、磷钼酸紫外分光光度法、酶法、原子吸收分光光度法、同位素稀常用方法：磷钼酸还原法、磷钼酸紫外分光光度法、酶法、原子吸收分光光度法、同位素稀释质谱法等释质谱法等决定性方法：同位素稀释质谱法决定性方法：同位素稀释质谱法常规方法：磷钼酸紫外分光光度法、磷钼酸还原法常规方法：磷钼酸紫外分光光度法、磷钼酸还原法2020/12
28、/1954（二）血清磷测定（二）血清磷测定磷钼酸还原法磷钼酸还原法 1.测定原理测定原理无机磷无机磷钼酸铵钼酸铵 磷钼酸复合磷钼酸复合物物 钼蓝（钼蓝（650nm）硫酸亚铁硫酸亚铁或米吐尔或米吐尔2.方法评价方法评价方法简便、快速，稳定方法简便、快速，稳定体系中加入体系中加入Triton X-100等表面活性剂，则不需要除蛋白即可直接测定等表面活性剂，则不需要除蛋白即可直接测定2020/12/1955（三）血清磷测定（三）血清磷测定酶法酶法 1.测定原理测定原理次黄嘌呤核次黄嘌呤核苷苷 嘌呤核苷磷嘌呤核苷磷酸化酶酸化酶 次黄嘌次黄嘌呤呤 黄嘌呤氧化酶黄嘌呤氧化酶 H H2 2O O2 2尿酸尿
29、酸无机磷无机磷TrinderTrinder反应反应 2.方法评价方法评价血清磷测定的发展方向血清磷测定的发展方向显色稳定，线性范围宽，干扰因素小，可用于自动化分析显色稳定，线性范围宽，干扰因素小，可用于自动化分析所用的酶试剂比较贵所用的酶试剂比较贵 2020/12/1956三、血清镁的测定三、血清镁的测定（一）血清镁测定方法概述（一）血清镁测定方法概述标标 本：血清（本：血清（非钙离子络合抗凝剂）非钙离子络合抗凝剂）测定方法：比色法、原子吸收分光光度法测定方法：比色法、原子吸收分光光度法 酶法、同位素稀释质谱法等酶法、同位素稀释质谱法等决定性方法：同位素稀释质谱法决定性方法：同位素稀释质谱法参
30、考方法：原子吸收分光光度法参考方法：原子吸收分光光度法常规方法：甲基麝香草酚蓝（常规方法：甲基麝香草酚蓝（MTB）比色法）比色法 Calmagite染料结合法染料结合法2020/12/1957（二）血清镁测定（二）血清镁测定比色法比色法1.测定原理测定原理镁离子镁离子MTBEGTA掩蔽钙离子掩蔽钙离子蓝紫色复合物（蓝紫色复合物（600nm600nm）2.方法评价方法评价方法简单、实用，可用于自动化分析方法简单、实用，可用于自动化分析采血后应尽快分离血清，而且避免溶血采血后应尽快分离血清，而且避免溶血 EGTA(乙二醇二乙醚二胺四乙酸 EGTA：乙二醇二乙醚二胺四乙酸乙二醇二乙醚二胺四乙酸 20
31、20/12/1958（三）血清镁测定（三）血清镁测定酶法酶法1.测定原理测定原理异柠檬酸异柠檬酸 -酮戊二酸酮戊二酸 NADPNADP+NADPHNADPH（340nm340nm处吸光度下降）处吸光度下降）镁离子，镁离子，ICD2.方法评价方法评价成本低廉、影响因素小，线性范围宽成本低廉、影响因素小，线性范围宽试剂稳定性欠佳，试剂稳定性欠佳，4下只能保存下只能保存2周左右周左右 返回章目录返回章目录2020/12/1959第四节第四节 骨代谢异常的生物化学测定骨代谢异常的生物化学测定2020/12/1960一、骨代谢调节激素的测定一、骨代谢调节激素的测定（一）甲状旁腺素的测定（一）甲状旁腺素的
32、测定1.测定方法概述测定方法概述 v存在形式：存在形式：PTH-N、PTH-C和和PTH-Mv测定形式：测定形式：PTH-C、PTH-M和完整和完整PTHv主要方法：主要方法：RIA、IRMA、ELISA、ICMA等等 国外采用国外采用IRMA法和法和ICMA法测定完整的法测定完整的PTH分子分子 国内应用最普遍的是国内应用最普遍的是RIA法法2020/12/1961IRMA：免疫放射法：免疫放射法ICMA：免疫化学发光法：免疫化学发光法 2.RIA法测定法测定PTHv测定对象：测定对象：PTH-M和和PTH-Cv方法类型：竞争性方法类型：竞争性RIA法法 125I 标记标记PTH-M和和PT
33、H-C 125I标记的标记的PTH-M和和PTH-C与病人样本中的与病人样本中的PTH-M和和PTH-C竞争抗体结合位点。竞争抗体结合位点。2020/12/1962（二）维生素（二）维生素D的测定的测定1.测定方法概述测定方法概述 v 25-(OH)D3是反映机体维生素是反映机体维生素D营养状态的理想指标营养状态的理想指标v 1,25-(OH)2D3更适合用受体结合法进行分析更适合用受体结合法进行分析v 25-(OH)D3的测定方法：的测定方法：RIA-CPB和和HPLC等等v 1,25-(OH)2D3的测定方法：的测定方法：RIA、RRA、生物学方法等、生物学方法等 以以RRA和和RIA最为
34、普遍最为普遍RIA-CPB：放免竞争性蛋白结合法：放免竞争性蛋白结合法RRA：放射受体法：放射受体法 2020/12/19632.25-(OH)D3的测定的测定 v目前主要采用目前主要采用RIA法法v佝偻病大鼠血清中维生素佝偻病大鼠血清中维生素D结合蛋白为特异性的结合物结合蛋白为特异性的结合物v基本流程：有机溶剂提取血清基本流程：有机溶剂提取血清 与放射性标记物竞争与维生素与放射性标记物竞争与维生素D结合蛋白结合结合蛋白结合 反应平衡后分离游离型和结合型标记物反应平衡后分离游离型和结合型标记物 液闪计数、计算浓度液闪计数、计算浓度v评价：评价：方法简便，结合蛋白较稳定方法简便，结合蛋白较稳定
35、测定前都需要对测定前都需要对25-(OH)D3提取纯化提取纯化2020/12/19643.1,25-(OH)2D3的测定的测定 （1）RRAv采用维生素采用维生素D缺乏或正常的鸡肠道维生素缺乏或正常的鸡肠道维生素D受体受体v采用采用Sep-Pak色谱柱代替高效液相色谱的纯化步骤色谱柱代替高效液相色谱的纯化步骤（2）RIAv采用佝偻病大鼠血清中维生素采用佝偻病大鼠血清中维生素D结合蛋白作为特异性的结合物，比受体更稳定，更方便结合蛋白作为特异性的结合物，比受体更稳定，更方便2020/12/1965（三）降钙素的测定（三）降钙素的测定1.生物分析法：降血钙效应分析生物分析法：降血钙效应分析2.放射免
36、疫分析法：样品放射免疫分析法：样品CT、放射性标记、放射性标记CT竞争性地与竞争性地与CT特异性抗体结合特异性抗体结合 3.夹心放射免疫分析：快速、灵敏、特异夹心放射免疫分析：快速、灵敏、特异2020/12/1966二、骨形成标志物的测定二、骨形成标志物的测定（一）骨钙素（一）骨钙素（osteocalcin,OC）的测定的测定v又称骨又称骨-羧基谷氨酸蛋白（羧基谷氨酸蛋白（BGP）v由成骨细胞合成和分泌的一种活性多肽由成骨细胞合成和分泌的一种活性多肽v主要生理功能是维持骨的正常矿化速率主要生理功能是维持骨的正常矿化速率v血骨钙素是反映骨代谢状态的一个特异和灵敏的生化指标血骨钙素是反映骨代谢状态
37、的一个特异和灵敏的生化指标v测定测定BGP的方法应用最多的是放射免疫法和酶联免疫法的方法应用最多的是放射免疫法和酶联免疫法2020/12/1967（二）骨性碱性磷酸酶（二）骨性碱性磷酸酶（B-ALP）测定测定 v ALP是在碱性条件下催化磷酸酯水解的酶类是在碱性条件下催化磷酸酯水解的酶类v B-ALP来自成骨细胞，是骨形成的特异性标志物来自成骨细胞，是骨形成的特异性标志物v 血清血清B-ALP测定方法：测定方法：总体分为电泳法和非电泳法总体分为电泳法和非电泳法 应用较多的方法是放射免疫法应用较多的方法是放射免疫法 HPLC是目前是目前B-ALP测定分辨率最高的方法测定分辨率最高的方法2020/
38、12/1968vB-ALP增高常见于：甲状腺、甲状旁腺功能亢进增高常见于：甲状腺、甲状旁腺功能亢进 恶性肿瘤骨转移恶性肿瘤骨转移 佝偻病、骨软化病佝偻病、骨软化病 骨折和绝经后骨质疏松症等骨折和绝经后骨质疏松症等vB-ALP测定意义：测定意义：骨病早期诊断骨病骨病早期诊断骨病 疗效的评价和预后的判断疗效的评价和预后的判断 骨转移癌的病程和治疗效果的监测骨转移癌的病程和治疗效果的监测2020/12/1969v 型胶原前肽是胶原的延伸段型胶原前肽是胶原的延伸段v 多检测多检测型前胶原羧基前肽型前胶原羧基前肽(PICP)来评价骨形成来评价骨形成v PICP的检测大多采用的检测大多采用RIA和电化学发
39、光免疫分析（和电化学发光免疫分析（ECL）v 血清中血清中型胶原前肽水平在一定范围内是反映成骨细胞活动和骨形成以与反映型胶原前肽水平在一定范围内是反映成骨细胞活动和骨形成以与反映型胶原合成速型胶原合成速率的特异指标率的特异指标（三）（三）型胶原前肽测定型胶原前肽测定2020/12/1970三、骨吸收标志物的测定三、骨吸收标志物的测定v HOP是体内胶原代谢的终产物之一是体内胶原代谢的终产物之一v 尿尿HOP排出量可以反映骨吸收和骨转换程度排出量可以反映骨吸收和骨转换程度v 尿尿HOP增高见于：儿童生长期、甲状旁腺功能亢进增高见于：儿童生长期、甲状旁腺功能亢进 骨转移癌、慢性肾功能不全骨转移癌、
40、慢性肾功能不全 畸形性骨炎、佝偻病和软骨病畸形性骨炎、佝偻病和软骨病 高转换的骨质疏松患者高转换的骨质疏松患者v 尿尿HOP指标特异性较差，也缺乏灵敏性指标特异性较差，也缺乏灵敏性v 尿尿HOP测定方法：分光光度法测定方法：分光光度法 离子交换色谱法和反相离子交换色谱法和反相HPLC法法（一）尿羟脯氨酸（一）尿羟脯氨酸（hydroxyproline,HOP）2020/12/1971 吡啶酚，脱氧吡啶酚吡啶酚，脱氧吡啶酚v型胶原降解产物型胶原降解产物 型胶原交联型胶原交联N末端肽末端肽 型胶原交联型胶原交联C末端肽末端肽v型胶原降解产物是反映骨吸收和骨转换的良好指标型胶原降解产物是反映骨吸收和骨
41、转换的良好指标（二）（二）型胶原交联降解产物测定型胶原交联降解产物测定2020/12/1972v脱氧吡啶酚（脱氧吡啶酚（D-Pyr）和吡啶酚（）和吡啶酚（Pyr）是）是型胶原分子之间构成胶原纤维的交联物型胶原分子之间构成胶原纤维的交联物v 尿中尿中Pyr和和D-Pyr浓度是反映骨胶原降解和骨吸收的最灵敏和特异的生化指标之一浓度是反映骨胶原降解和骨吸收的最灵敏和特异的生化指标之一v 尿中尿中D-Pyr的含量通常用尿肌酐来校正的含量通常用尿肌酐来校正v 常用方法：常用方法：HPLC-荧光检测法、竞争性酶免疫法荧光检测法、竞争性酶免疫法2020/12/1973v型胶原交联型胶原交联C末端肽（末端肽（
42、CTX）和）和型胶原交联型胶原交联N末端肽（末端肽（NTX）均是）均是型胶原分解的产物。型胶原分解的产物。v血清血清CTX水平是破骨细胞胶原降解的灵敏指标：水平是破骨细胞胶原降解的灵敏指标：与骨形态计量学骨吸收参数呈显著正相关与骨形态计量学骨吸收参数呈显著正相关 与其它骨吸收生化指标如与其它骨吸收生化指标如Pyr和和D-Pyr呈正相关呈正相关v常用常用ELISA法测定法测定2020/12/1974vTRAP主要存在于破骨细胞主要存在于破骨细胞v血血TRAP水平主要反映破骨细胞活性和骨吸收状态水平主要反映破骨细胞活性和骨吸收状态v血浆血浆TRAP增高见于：增高见于：原发性甲状旁腺机能亢进、慢性肾
43、功能不全、畸形性骨炎原发性甲状旁腺机能亢进、慢性肾功能不全、畸形性骨炎 骨转移癌、卵巢切除术后、高转换率的骨质疏松等骨转移癌、卵巢切除术后、高转换率的骨质疏松等v血浆血浆TRAP降低见于：降低见于：骨吸收降低的疾病，如甲状旁腺功能降低骨吸收降低的疾病，如甲状旁腺功能降低vTRAP活性测定方法：免疫法活性测定方法：免疫法 （缺少特异性识别骨（缺少特异性识别骨TRAP的检测方法）的检测方法）（三）抗酒石酸酸性磷酸酶（三）抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）返回章目录返回章目录2020/12/19751.骨组织包括细胞和细胞间质两部分，前者主要有骨细胞、成骨细胞和破骨细胞三类，骨组织包括细胞和细胞间质两部
44、分，前者主要有骨细胞、成骨细胞和破骨细胞三类，后者包括钙、磷、镁、钾、钠和锰等无机成分和胶原、非胶原蛋白、蛋白多糖和脂质组后者包括钙、磷、镁、钾、钠和锰等无机成分和胶原、非胶原蛋白、蛋白多糖和脂质组成的有机成分。成的有机成分。2.钙、磷、镁以与骨组织的正常代谢受多种激素的严密调控，包括钙、磷、镁以与骨组织的正常代谢受多种激素的严密调控，包括PTH、CT、活性维、活性维生素生素D3和性激素等。和性激素等。PTH由甲状旁腺合成和分泌，升高血钙、降低血磷；降钙素降低血由甲状旁腺合成和分泌，升高血钙、降低血磷；降钙素降低血钙、降低血磷；活性维生素钙、降低血磷；活性维生素D3升高血钙、升高血钙、升高血磷
45、。升高血磷。【小结小结】2020/12/19763.测定血清矿物质以与相关激素的水平对于代谢性骨病的诊断、鉴别诊断等有重要的测定血清矿物质以与相关激素的水平对于代谢性骨病的诊断、鉴别诊断等有重要的意义，包括血钙测定、血磷测定、血镁测定以及血清中意义，包括血钙测定、血磷测定、血镁测定以及血清中PTH、CT、维生素、维生素D及其代及其代谢产物、谢产物、骨钙素和骨性碱性磷酸酶等物质的测定。骨钙素和骨性碱性磷酸酶等物质的测定。【小结小结】2020/12/1977 骨代谢异常生化诊断方面目前的进展主要在于：骨代谢异常生化诊断方面目前的进展主要在于：开发灵敏度、特异性更高、操作更简便的测定方法用于更方便、更准确地测开发灵敏度、特异性更高、操作更简便的测定方法用于更方便、更准确地测定这些物质成分。定这些物质成分。探索骨代谢疾病新的生化标志物并确定其参考范围、临床意义。探索骨代谢疾病新的生化标志物并确定其参考范围、临床意义。【展望展望】2020/12/1978
