1、血型分子诊断技术进展与应用血型分子诊断技术进展与应用血型分子诊断技术进展与应用1主要内容主要内容 红细胞血型系统分子诊断红细胞血型系统分子诊断红细胞血型系统分子基础红细胞血型系统分子基础ABOABO血型系统血型系统RhRh血型系统血型系统H H血型系统血型系统(类孟买型类孟买型)红细胞血型系统分子诊断技术及其应用红细胞血型系统分子诊断技术及其应用 小结小结血型分子诊断技术进展与应用2有关分子生物学概念有关分子生物学概念 点突变点突变同义突变同义突变无义突变无义突变有义突变有义突变起始密码突变起始密码突变 缺失缺失 插入插入 重排重排血型分子诊断技术进展与应用3有关分子生物学概念有关分子生物学概
2、念 基因结构异常或表达异常基因结构异常或表达异常 点突变点突变 插入插入 缺失缺失 易位和重排易位和重排 拷贝数扩增拷贝数扩增 DNADNA多态性多态性 基因的检测基因的检测血型分子诊断技术进展与应用4常见突变示意图常见突变示意图 ATG CGG TAG CGT AGT CTG ATG CGA TAG CGT AGT CTG ATA CGG TAG CGT AGT CTG ATG CGGG TAG CGT AGT CTG ATG CG TAG CGT AGT CTG血型分子诊断技术进展与应用5新等位基因形成新等位基因形成血型分子诊断技术进展与应用6红细胞血型系统红细胞血型系统 4040个基因个
3、基因 12501250个个等位基因等位基因(截止截止20122012年年5 5月月1212日日)参见参见Blood Group Antigen Gene Mutation Blood Group Antigen Gene Mutation DatabaseDatabase血型分子诊断技术进展与应用7红细胞血型分子机制红细胞血型分子机制 点突变点突变同义突变、无义突变、同义突变、无义突变、有义突变、起始密码突变、有义突变、起始密码突变、拼接接受位点拼接接受位点 插入插入 缺失缺失 基因重组（基因重组（RHD/RHCE）基因部分重复基因部分重复 http:/=bgmut/systems血型分子诊断
4、技术进展与应用8ABOABO血型分子生物学研究血型分子生物学研究 19901990年年YamamotoYamamoto等首次克隆等首次克隆 基因定位于染色体基因定位于染色体9q349q34ABOABO基因基因cDNAcDNA，其分子量为，其分子量为41,000 Dalton41,000 Dalton，DNADNA长度为长度为1062bp1062bp ABOABO血型系统为三复等位基因，有血型系统为三复等位基因，有A A、B B、O O三个基因三个基因ABOABO基因包括基因包括7 7个外显子个外显子，长度大于，长度大于18kb18kb 大多数编码序列位于大多数编码序列位于第第6 6和和7 7外
5、显子外显子血型分子诊断技术进展与应用9ABOABO基因示意图基因示意图血型分子诊断技术进展与应用10常见等位基因常见等位基因A A和和B B基因基因 编码的蛋白都是编码的蛋白都是353353个氨基酸，个氨基酸，O O基因编码的蛋基因编码的蛋白只有白只有 115 115个氨基酸个氨基酸A101A101、A102A102、B101B101、O01O01、O02O02A101A101作为参考序列作为参考序列A102A102等位基因等位基因 C467T(Pro-Leu)C467T(Pro-Leu)B101B101基因在基因在297297、526526、657657、703703、796796、8038
6、03、930930、10961096位位有有8 8个核苷酸与个核苷酸与A101A101基因不同基因不同 但只有但只有526526、703703、796796、803803四个核苷酸的变化造成了氨基酸序列四个核苷酸的变化造成了氨基酸序列的变化（的变化（A101A101依次是精氨酸、甘氨酸、亮氨酸和甘氨酸，依次是精氨酸、甘氨酸、亮氨酸和甘氨酸，B101B101依次是甘氨酸、丝氨酸、蛋氨酸和丙氨酸）依次是甘氨酸、丝氨酸、蛋氨酸和丙氨酸）O01O01基因在基因在261261位的位的G G缺失缺失,提前终止提前终止血型分子诊断技术进展与应用11ABOABO亚型频率分布亚型频率分布 ABOABO血型中存在
7、血型中存在ABOABO亚型亚型 临床输血和献血者检测中常见临床输血和献血者检测中常见440617440617份份A A亚型亚型2222份份 AxB 11AxB 11例，例，AelB 3AelB 3例，例，Ax 3Ax 3例，例，Ael 2Ael 2例，例，Amh 2Amh 2例，例，A A3 3 1 1例例B B亚型亚型4141份份 Bx11Bx11例，例，B B3 39 9例，例，ABx7ABx7例，例，ABAB3 3 5 5例，例，Bel3Bel3例，例，Bm 2Bm 2例，例，ABel 1ABel 1例，例，ABend 1ABend 1例，例，ABm 1ABm 1例，例，Bend 1Be
8、nd 1例。例。B(A)1B(A)1例例CisAB2CisAB2例例A A2 2 14 14例例A A2 2B 35B 35例例引自中国输血杂志引自中国输血杂志20062006，1919（1 1）：）：2525血型分子诊断技术进展与应用12ABOABO亚型的分子研究亚型的分子研究 通过检测通过检测261261、526526、703703、796796、803803位的核苷酸位的核苷酸可以确认大多数典型的可以确认大多数典型的ABOABO血型的基因型血型的基因型 近年来对血清学分类的近年来对血清学分类的ABOABO血型亚型抗原，应用血型亚型抗原，应用PCRPCR、DNADNA测序测序等技术，在核苷
9、酸和酶蛋白氨基酸等技术，在核苷酸和酶蛋白氨基酸序列水平上进行研究序列水平上进行研究结果表明：原为同一亚型的抗原存在异质性，即血清结果表明：原为同一亚型的抗原存在异质性，即血清学上同一亚型，在核苷酸和酶蛋白氨基酸序列水平上学上同一亚型，在核苷酸和酶蛋白氨基酸序列水平上有可能存在差异。有可能存在差异。几个位点以外的核苷酸变化引起的几个位点以外的核苷酸变化引起的ABOABO血型亚型常会血型亚型常会引起检测结果的偏差引起检测结果的偏差 发现的等位基因数为发现的等位基因数为290290个（个（20122012年年0505月月2222日）日）血型分子诊断技术进展与应用13A A等位基因等位基因 可简要分为
10、可简要分为7 7大类等位基因大类等位基因 A1A1、A2A2、A3A3、AxAx、AelAel、AwAw、AmAmA101A101等位基因序列作为参照标准等位基因序列作为参照标准A102A102(C467T)(C467T)（在中国人群中比例大于（在中国人群中比例大于A101A101)A103A103(C467T,C564T)(C467T,C564T)A104A104(A297G)(A297G)A105A105(A297G,B-O1(A297G,B-O1重组重组)A106A106(B-O02(B-O02重组重组)A205(A1009G)A205(A1009G)血型分子诊断技术进展与应用14B B
11、等位基因型等位基因型 可简要分为可简要分为5 5大类等位基因大类等位基因 B1B1、B3B3、BxBx、BelBel、BwBw B B等位基因中等位基因中297297、703703、796796、803803位基本恒定位基本恒定B101-B101-B118B118B101B101:A297G;:A297G;C526GC526G;C657T;G703A;C796A;G8;C657T;G703A;C796A;G803C;G930A;G1096A03C;G930A;G1096AB301-B308B301-B308B301B301:A297G,C526G,C657T,G703A,C796A,:A297
12、G,C526G,C657T,G703A,C796A,G803C,G930A,G1096A,C1054TG803C,G930A,G1096A,C1054T血型分子诊断技术进展与应用15O O等位基因等位基因O01O01O74O74 大多数大多数261nt261nt缺失，缺失，1313个个261nt261nt不缺失不缺失O01O01:261delG:261delGO02O02:261delG:261delG、T646AT646A、G681TG681T、C771TC771T、G829AG829A 人群中常见人群中常见003003:261G261G、A297G,C526G,G802AA297G,C52
13、6G,G802AO50O50血型分子诊断技术进展与应用16CisABCisAB和和B(A)B(A)等位基因等位基因CisAB01-CisAB01-0606CisAB01CisAB01:C467T,G803C:C467T,G803CCisAB02CisAB02:C526G,C657T,G703A,G803C,:C526G,C657T,G703A,G803C,B(A)01-06B(A)01-06B(A)B(A)型单克隆试剂应用于临床后，抗型单克隆试剂应用于临床后，抗A A试剂偶尔与试剂偶尔与原定为原定为B B型的红细胞发生反应，这类含有大量型的红细胞发生反应，这类含有大量B B抗原抗原极少极少A
14、A抗原的红细胞称之为抗原的红细胞称之为B(A)B(A)型型B(A)01B(A)01:A297G,C526G,796A,G803C,G930A,G1096A:A297G,C526G,796A,G803C,G930A,G1096AB(A)02B(A)02:A297G,C526G,C657T,C700G,G703A,:A297G,C526G,C657T,C700G,G703A,C796A,G803C,G930A,G1096AC796A,G803C,G930A,G1096A血型分子诊断技术进展与应用17实验室发现的实验室发现的ABOABO等位基因等位基因A208 alleleA208 allele*C
15、467T;G539C C467T;G539CA210 alleleA210 allele*268TC;467CT A211 alleleA211 allele*266CT;467CT B112 alleleallele*297AG;526CG;559CT;657CT;703GA;796CA;803GC;930GA B305 alleleallele*297AG;425TC;526CG;657CT;703GA;796CA;803GC;930GA B307 alleleallele*297AG;410CT;526CG;657CT;703GA;796CA;803GC;930GA Bw12 allel
16、eBw12 allele*C278T C278TCisAB05 alleleCisAB05 allele*A297G;C526G;C657T;G703A;C 796A;G930A O61 alleleallele*261del 743C血型分子诊断技术进展与应用18ABO基因诊断 PCR-SSP PCR-RFLP PCR-SSO PCR-SSCP PCR-SBT 261G干扰干扰 正反定型不一致正反定型不一致血型分子诊断技术进展与应用19ABOABO亚型分子机制和诊断亚型分子机制和诊断 凝集强度改变凝集强度改变 正反定型不一致正反定型不一致 点突变为主点突变为主 PCR-SSP 261G PC
17、R-SBT SNP(单核苷酸多态性单核苷酸多态性)血型分子诊断技术进展与应用20ABOABO亚型分子机制和诊断亚型分子机制和诊断 PCR-SBTPCR-SBT 常见为常见为6-76-7外显子扩增外显子扩增 双向测序双向测序 存在风险：扩增引物存在风险：扩增引物SNPSNP 多态性位点在其它位置多态性位点在其它位置 其它机制：表观遗传、其它其它机制：表观遗传、其它血型分子诊断技术进展与应用21ABOABO亚型分子机制和诊断亚型分子机制和诊断 PCR-SBTPCR-SBT 1-71-7外显子扩增技术外显子扩增技术和策略和策略 全长全长18kb18kb 一般一般3 3对引物以上对引物以上 外显子上的
18、突变外显子上的突变 ATGATG位置突变位置突变 其它机制？其它机制？血型分子诊断技术进展与应用22ABOABO亚型分子机制和诊断亚型分子机制和诊断 基层实验室如何有效获取信息基层实验室如何有效获取信息 血清学结果血清学结果 家系分析家系分析 保存抗凝全血保存抗凝全血-20以下以下 寻求寻求分子诊断实验室帮助分子诊断实验室帮助血型分子诊断技术进展与应用23RhRh血型基因血型基因 基因位于基因位于1 1号染色体短臂上，即号染色体短臂上，即1P34361P3436 两个基因：两个基因：RHDRHD编码编码D D抗原，抗原，RHCERHCE编码编码CcEeCcEe抗原抗原RHDRHD和和RHCER
19、HCE基因同源性高达基因同源性高达96%96%以上以上RHDRHD和和RHCERHCE基因均有基因均有1010个外显子个外显子血型分子诊断技术进展与应用24RHDRHD基因第基因第1 1、2 2、8 8、1010外显子的编码序列与外显子的编码序列与RHCERHCE的相对应序列相同的相对应序列相同RHDRHD基因第基因第3 3、4 4、5 5、6 6和第和第9 9外显子序列与外显子序列与RHCERHCE基因有区别基因有区别 两个两个RHRH基因紧密连锁，相隔基因紧密连锁，相隔30000bp30000bp 两个基因两个基因的的33末端面对面末端面对面 两个基因之间有一个独立的基因两个基因之间有一个
20、独立的基因SMP1SMP1RHDRHD和和RHCERHCE两个基因之间以及外侧分别有两个基因之间以及外侧分别有1 1个个RhesusRhesus盒盒SMP1SMP1基因距中间一个基因距中间一个RhesusRhesus盒下游仅盒下游仅15bp15bp血型分子诊断技术进展与应用25RHCERHCE和和RHDRHD基因组成示意图基因组成示意图1p34-p36血型分子诊断技术进展与应用26RhRh血型等位基因血型等位基因RHAGRHAGRHDRHDRHCERHCE突变和缺失、基因转换、基因重组突变和缺失、基因转换、基因重组RHDRHD 218 218RHCERHCE 104 104RHAGRHAG 2
21、3 23血型分子诊断技术进展与应用27RHDRHD等位基因等位基因 RhDRhD阳性阳性正常正常RhDRhD阳性阳性弱弱D(weak D)D(weak D)部分部分D(partial D)D(partial D)DelDel RhDRhD阴性阴性RHDRHD基因缺失基因缺失RHDRHD基因基因功能丧失功能丧失血型分子诊断技术进展与应用28部分弱部分弱D D的分子突变点的分子突变点RHD weak D type 1RHD weak D type 1 T809G T809GRHD weak D type 1.1RHD weak D type 1.1 C5G;T809G C5G;T809GRHD w
22、eak D type 2RHD weak D type 2 G1154A G1154ARHD weak D type 3RHD weak D type 3 C8G C8GRHD weak D intron 55A intron3 5 G5ARHD weak D type33(Taiwan1)G520ARHD weak D type Taiwan2 T809ARHD weak D type 51 A594T;C602GRHD weak D type 52 92TC RHD weak D type 53 T740G分子机制分子机制 碱基突变碱基突变 缺失缺失 mRNAmRNA拼接位点变异拼接位点变
23、异血型分子诊断技术进展与应用29部分部分D D分子机制分子机制 Partial D Partial D 发现等位基因发现等位基因7070多个多个 -RHD Va 2RHD Va 2 T667G;G697C;G712A;G1273C T667G;G697C;G712A;G1273C RHD Va 3RHD Va 3 G697A G697A RHD Va 4RHD Va 4 hybrid D(1-4)CE5 D(6-10)hybrid D(1-4)CE5 D(6-10)RHD VI type IRHD VI type I hybrid(D1-3)CE(4,5)D(6-10)hybrid(D1-3)
24、CE(4,5)D(6-10)RHD VI type IIRHD VI type II hybrid D(1-3)CE(4-6)D(7-10)hybrid D(1-3)CE(4-6)D(7-10)RHD VI type IIIRHD VI type III hybrid D(1,2)CE(3-6)D(7-10)hybrid D(1,2)CE(3-6)D(7-10)RHD VI type IVRHD VI type IV hybrid D1 Ce(2/3-5)D(6-10)hybrid D1 Ce(2/3-5)D(6-10)分子机制分子机制基因交换基因交换RHD-CE-DRHD-CE-D点突变点突
25、变血型分子诊断技术进展与应用30部分部分D D分子机制示意图分子机制示意图血型分子诊断技术进展与应用31DelDel分子机制分子机制 DelDel（D elutionD elution）亚洲人群常见亚洲人群常见 RHD DEL(Cde)1 intron 3 G1A RHD DEL(Cde)2 G885T RHD DEL(Cde)3 intron 9 G1A;G1227A RHD DEL(Cde)4 intron 5 38delCTCT RHD DEL(Cde)5 1252insT RHD DEL(Cde)6 T1203A RHD Del(Cde)7 G3A RHD Del(Cde)8 C28T
26、 RHD Del(Cde)9 T53C RHD Del(Cde)10 T251C RHD DEL T1222C RHD Del intron 8-9:del 1013 RHD DEL exon8 del 995nt including 3intron7+exon8+5intron8血型分子诊断技术进展与应用32RhDRhD阴性的机制阴性的机制不同不同RhRh阴性表现型频率不同阴性表现型频率不同RHDRHD阴性的可能机制阴性的可能机制RHDRHD基因缺失基因缺失RHDRHD基因发生改变基因发生改变RHD-CE-DRHD-CE-D融合基因融合基因RHDRHD基因的第基因的第3 3到到9 9外显子被
27、外显子被RHCERHCE基因取代基因取代RHDRHD阴性个体中约阴性个体中约1/31/3具有完整的具有完整的RHDRHD基因基因非洲非洲D D阴性个体具有阴性个体具有RHDRHD（假基因）（假基因）血型分子诊断技术进展与应用33RHCERHCE等位基因等位基因RHCERHCE等位基因等位基因104104个个正常正常RHCERHCERHce 48C RHce 48C RHCE RHCE G48CG48CRHCE(1)D(2-10)RHCE(1)D(2-10)RHCERHCE(1)D(2-10)(1)D(2-10)RHCE RHCE D-Chinese D-Chinese RH(D1-9CE10)
28、RH(D1-9CE10)RH(CE1 D2-7 CE8-10)RH(CE1 D2-7 CE8-10)hybrid CE(1)D(2-7)hybrid CE(1)D(2-7)CE(8-10)CE(8-10)RHCE 685-687delRHCE 685-687del 685-687delAGA 685-687delAGA RHCERHCE null amorph 2 Intron 4:G1T null amorph 2 Intron 4:G1T血型分子诊断技术进展与应用34 9 9例弱例弱D D样本样本 RHD 845A 5RHD 845A 5例（例（RHD weak D type 15RHD
29、weak D type 15）RHD 1227A 3RHD 1227A 3例（例（D-el(CDe);minimal expression of D antigen;）RHD 1013C 1RHD 1013C 1例（例（RHD weak D type 24RHD weak D type 24）1010例部分例部分D D样本样本 Dva(Kou)1Dva(Kou)1例例 Dva(Hus)1Dva(Hus)1例例 DVa-like(YH)1DVa-like(YH)1例例 DVI type III 7DVI type III 7例例Molecular basis of D variants in C
30、hinese persons.Transfusion.2007;47(3):471-7 RhRh表型表型 样本量样本量 RHD+RHD+/RHD+RHD+RHD+RHD+/RHD-RHD-RHD-RHD-/RHD-RHD-RhDRhD阳性阳性198198186186（93.94%93.94%）1212（6.06%6.06%）0 0（0 0）Weak DWeak D32323 3（9.37%9.37%）2929（93.63%93.63%）0 0（0 0）RhDRhD阴性阴性 2082081010（4.81%4.81%）5353（25.48%25.48%）145145（69.71%69.71%）血
31、型分子诊断技术进展与应用35RHD血型分子诊断血型分子诊断 RhD阴性阴性 多重多重PCR技术技术 FQ-PCR PCR-RFLP D Variant PCR-SSP 测序技术测序技术血型分子诊断技术进展与应用36RHD血型分子诊断血型分子诊断 分子机制复杂分子机制复杂 RhDRhD阴性分子机制阴性分子机制基因交换基因交换RHD-CE-DRHD-CE-D 疑难标本疑难标本单一技术难以判定单一技术难以判定多种技术并存多种技术并存血清学结果血清学结果血型分子诊断技术进展与应用37H H血型系统血型系统H H抗原与抗原与ABOABO血型，血型，LewisLewis血型密切相关，属血型密切相关，属于于
32、HhHh血型系统（血型系统（ISBT018ISBT018）血型分子诊断技术进展与应用38血型分子诊断技术进展与应用39其它血型系统 血清学特性 分子机制 点突变 基因重组 PCR-SSP 基因芯片血型分子诊断技术进展与应用40其它血型系统 罕见表型罕见表型 血清学特性血清学特性 基因定位基因定位 测序技术测序技术 体外表达体外表达血型分子诊断技术进展与应用41红细胞血型系统分子诊断技术的应用红细胞血型系统分子诊断技术的应用 红细胞血型的诊断红细胞血型的诊断 人群遗传的分析人群遗传的分析 谱细胞血型的诊断谱细胞血型的诊断 罕见表型分子机制研究罕见表型分子机制研究 疑难血型的判断疑难血型的判断 多
33、次输血后的血型检测多次输血后的血型检测 产前血型的诊断产前血型的诊断血型分子诊断技术进展与应用42红细胞血型系统分子诊断技术的应用红细胞血型系统分子诊断技术的应用 罕见表型罕见表型 多次输血病人多次输血病人 ABOABO、RhDRhD血型的不一致血型的不一致 RhDRhD变异体变异体 弱表达的基因情况弱表达的基因情况RHDRHD杂合度杂合度 筛选稀有系统（抗体缺乏）筛选稀有系统（抗体缺乏）谱细胞谱细胞血型分子诊断技术进展与应用43红细胞血型中采用的技术红细胞血型中采用的技术 PCR-RFLPPCR-RFLP PCR-SSPPCR-SSP多重多重PCRPCR技术技术 PCR-SBTPCR-SBT
34、 PCR-SSCPPCR-SSCP PCR-RQPCR-RQ 基因芯片基因芯片 方法的优缺点方法的优缺点 与血清学方法的比较与血清学方法的比较血型分子诊断技术进展与应用44红细胞血型系统基因分型技术红细胞血型系统基因分型技术 PCR-RFLP(PCR-RFLP(限制性片段长度多态性限制性片段长度多态性)通过通过PCRPCR扩增出包含突变位点的特定片段扩增出包含突变位点的特定片段 利用限制性内切酶消化利用限制性内切酶消化 片段经凝胶电泳片段经凝胶电泳 不同的片断大小检测便能确认基因型不同的片断大小检测便能确认基因型 方法特性方法特性操作较简单操作较简单酶切过程需要控制酶切过程需要控制血型分子诊断
35、技术进展与应用45PCR-RFLPPCR-RFLP 复合PCR-RFLP技术检测ABO基因型.中华医学遗传学杂志,1999年第2期 复合复合PCR PCR 技术在技术在ABO ABO 血型基因血型基因分型中的应用分型中的应用,北京医学北京医学2007 2007 年第年第29 29 卷第卷第2 2 期期血型分子诊断技术进展与应用46PCR-SSPPCR-SSP 利用利用33碱基特性碱基特性 分别分别设计设计一系列序列一系列序列特异性引物特异性引物 直接扩增出目的基因片段直接扩增出目的基因片段 通过凝胶电泳观察通过凝胶电泳观察 方法特性方法特性简单快捷简单快捷易于操作易于操作基于已知序列基于已知序
36、列血型分子诊断技术进展与应用47血型分子诊断技术进展与应用48PCR-SSCPPCR-SSCP 选择性扩增基因片段选择性扩增基因片段 加热或用变性剂解开加热或用变性剂解开DNADNA双链双链 由于等位基因的核苷酸顺序的不同，由于等位基因的核苷酸顺序的不同，二二级结构产生差异级结构产生差异 在聚丙烯酰胺凝胶电泳中在聚丙烯酰胺凝胶电泳中电泳迁移率电泳迁移率不不同同 分析电泳带型即可区别开等位基因分析电泳带型即可区别开等位基因血型分子诊断技术进展与应用49血型分子诊断技术进展与应用50血型分子诊断技术进展与应用51DNADNA测序法测序法 通过通过PCRPCR扩增基因的主要片段，然后对产物扩增基因的
37、主要片段，然后对产物进行序列分析测定，分析发生突变的碱基进行序列分析测定，分析发生突变的碱基便可确认血型便可确认血型 血型及其亚型的分子基础血型及其亚型的分子基础 本方法结果本方法结果准确可靠准确可靠 需要特殊的仪器设备需要特殊的仪器设备 操作烦琐，成本高操作烦琐，成本高血型分子诊断技术进展与应用52测序技术测序技术 测序技术测序技术 双脱氧终止法双脱氧终止法 化学降解法化学降解法 高通量测序高通量测序血型分子诊断技术进展与应用53Partial sequence in exon 6Partial sequence in exon 6O01 alleleBw12 allelevA novel
38、allele血型分子诊断技术进展与应用54基因芯片技术基因芯片技术 20052005年年Transfusion 45(5):654-9Transfusion 45(5):654-9 Transfusion 45(5):667-679 Transfusion 45(5):667-679高通量高通量同时分析多个系统同时分析多个系统多个位点多个位点(等位基因）等位基因）快速可靠快速可靠可可自动化自动化国外产品为主国外产品为主血型分子诊断技术进展与应用55血型分子诊断技术进展与应用56血型分子诊断技术进展与应用57血型分子诊断技术进展与应用58实时荧光技术实时荧光技术(PCR-RQ)(PCR-RQ)P
39、rediction of fetal Rh D and Rh CcEe phenotype Prediction of fetal Rh D and Rh CcEe phenotype from maternal plasma with real-time polymerase from maternal plasma with real-time polymerase chain reaction.Transfusion and Apheresis chain reaction.Transfusion and Apheresis Science 27(2002)217223Science 2
40、7(2002)217223 实时定量 荧光基团 特异性探针 产前诊断血型分子诊断技术进展与应用59血型分子诊断技术进展与应用60血型分子诊断技术进展与应用61RT-PCRRT-PCR 逆转录逆转录 mRNAmRNA和和cDNAcDNA 全部编码序列全部编码序列 无内含子区域无内含子区域 功能研究功能研究克隆克隆体外表达体外表达突变功能突变功能血型分子诊断技术进展与应用62RT-PCR to amplify the full RT-PCR to amplify the full length cDNA of length cDNA of RHDRHD2000bp1000bp 1 2 MPrime
41、r:RHF&RHR血型分子诊断技术进展与应用63国内红细胞血型系统基因诊断情况国内红细胞血型系统基因诊断情况 基因分型方法的建立基因分型方法的建立 分子遗传多态性检测分子遗传多态性检测 罕见表型分析罕见表型分析RHDRHD基因基因ABOABO血型亚型血型亚型 类孟买型类孟买型 其他其他 功能表达功能表达血型分子诊断技术进展与应用64红细胞血型基因分型红细胞血型基因分型 不能完全取代传统的血清学方法，不能完全取代传统的血清学方法，其原因有：其原因有：血清学方法快速、简单，易于操作血清学方法快速、简单，易于操作血清学试验比血清学试验比PCRPCR方法成本低方法成本低DNADNA技术不能用于抗体筛选
42、，至少目前尚没有合适技术不能用于抗体筛选，至少目前尚没有合适的方法的方法DNADNA技术只能预测血型表现型技术只能预测血型表现型 基因分型方法：基因分型方法：样本来源更广，保存时间更长样本来源更广，保存时间更长稀有表型鉴定稀有表型鉴定 、疑难样本鉴定、阐明分子机理等、疑难样本鉴定、阐明分子机理等目前目前DNADNA分型结果应该与血清学结果相互补充分型结果应该与血清学结果相互补充血型分子诊断技术进展与应用65血型分子诊断发展血型分子诊断发展 小结：小结：血型分子机制血型分子机制ABOABORHDRHDFUT1FUT1 诊断技术诊断技术血型分子诊断技术进展与应用66血型分子诊断发展血型分子诊断发展 高通量技术高通量技术 表观遗传表观遗传 RNARNA干扰干扰 等位基因数量等位基因数量 分子机制分子机制 表达调控表达调控血型分子诊断技术进展与应用67谢谢各位同仁的支持！不当之处请指正血型分子诊断技术进展与应用68
