1、细菌感染的检查方法与防治原则 检查方法检查方法 微生物学微生物学(细菌的细菌的形态学检查、形态学检查、分离培养和鉴定分离培养和鉴定）免疫学（免疫学（查查AgAg或或AbAb）分子生物学分子生物学（查核酸）（查核酸）一、标本的采集和送检原则一、标本的采集和送检原则无菌操作无菌操作适当的标本适当的标本（注意病程）（注意病程）早期采集早期采集采集双份血清采集双份血清做好标记做好标记尽快送检（尽快送检（标本必须新鲜）标本必须新鲜）第一节第一节 细菌感染的实验室诊断细菌感染的实验室诊断（一）细菌形态学检查（一）细菌形态学检查 针对一些在形态与染色上具有特征的针对一些在形态与染色上具有特征的 病原菌。病原
2、菌。1 1）光学显微镜）光学显微镜 2 2）染色法检查）染色法检查 （二）细菌分离培养与鉴定（二）细菌分离培养与鉴定主要内容：主要内容：1 1、细菌分离培养、细菌分离培养菌落大小、色素、溶血；菌落大小、色素、溶血；2 2、涂片、染色、镜检。涂片、染色、镜检。尤其用于在形态、排列和染色性方面无特尤其用于在形态、排列和染色性方面无特征的某些病原菌的检查。征的某些病原菌的检查。阳性率高于直接镜检，但时间长。阳性率高于直接镜检，但时间长。革兰染色原理：细胞壁结构不同。革兰染色原理：细胞壁结构不同。G G+结构致密、肽聚糖层厚、乙醇不易透入；结构致密、肽聚糖层厚、乙醇不易透入；乙醇使胞壁脱水形成一道屏障
3、，短暂阻止结晶乙醇使胞壁脱水形成一道屏障，短暂阻止结晶紫紫-碘复合物从胞内渗出；碘复合物从胞内渗出；G-G-疏松、肽聚糖层薄、外膜均含大量脂质，易疏松、肽聚糖层薄、外膜均含大量脂质，易被乙醇溶解，使胞壁通透性增高，胞内结晶紫被乙醇溶解，使胞壁通透性增高，胞内结晶紫-碘复合物被溶解脱出而脱色。碘复合物被溶解脱出而脱色。革兰染色实际意义革兰染色实际意义-鉴别细菌鉴别细菌选择用药选择用药研究细菌致病性研究细菌致病性其它染色有：其它染色有：单染色、抗酸染色、特殊染色等。单染色、抗酸染色、特殊染色等。抗酸染色法抗酸染色法特殊染色法：鞭毛染色特殊染色法：鞭毛染色 荚膜染色荚膜染色 负染色法负染色法2 2、
4、生化反应、生化反应 现有现有“程序控制的自动分析仪程序控制的自动分析仪”。3 3、血清学鉴定：用已知、血清学鉴定：用已知AbAb鉴定从标本中分离鉴定从标本中分离培养出的未知菌（玻片法简便易行）。培养出的未知菌（玻片法简便易行）。分群、分型分群、分型4 4、动物试验、动物试验 用于：分离鉴定病原菌；用于：分离鉴定病原菌；测定细菌的毒力及产毒性测定细菌的毒力及产毒性 选用高度易感、健康等条件的动物。选用高度易感、健康等条件的动物。如：毒素如：毒素-抗毒素中和试验抗毒素中和试验-小白鼠；小白鼠；钩端螺旋体钩端螺旋体-幼龄豚鼠、金地鼠。幼龄豚鼠、金地鼠。5 5、药物敏感试验、药物敏感试验 指导临床选择
5、用药，及时治疗和控制感指导临床选择用药，及时治疗和控制感染有重要意义。染有重要意义。药敏试验（纸片法）药敏试验（纸片法）优选细菌感染的检查方法与防治原则乙醇使胞壁脱水形成一道屏障，短暂阻止结晶紫-碘复合物从胞内渗出；enzymes such as peroxidase react with appropriate substrates such as革兰染色原理：细胞壁结构不同。若升高4倍或以上，有辅助诊断价值。核酸疫苗缺点：安全性问题阳性率高于直接镜检，但时间长。d、可利用化学试剂分解病毒体。指导临床选择用药，及时治疗和控制感乙醇使胞壁脱水形成一道屏障，短暂阻止结晶紫-碘复合物从胞内渗出；方
6、法：凝集试验，中和试验，ELISA等。更特异、敏感、快速现有“程序控制的自动分析仪”。a、去除引起副反应的物质；核酸疫苗缺点：安全性问题c、消除肿瘤病毒潜在的致癌作用；单染色、抗酸染色、特殊染色等。形式：整合于病毒、细菌基因组或质粒接种少量抗原可使人体产生良好免疫应答，且接种反应轻微。1、死疫苗伤寒、霍乱等。6 6、自动微生物鉴定和药敏分析系统：、自动微生物鉴定和药敏分析系统：微生物编码鉴定技术微生物编码鉴定技术-数据库数据库 微量培养微量培养 自动监测分析自动监测分析 自动记录药敏结果自动记录药敏结果（三）（三）细菌抗原的检测细菌抗原的检测 用已知用已知AbAb检测未知抗原（检测未知抗原（A
7、g-AbAg-Ab反应）。反应）。优点优点-特异、灵敏、简便特异、灵敏、简便方法：玻片凝集、协同凝集、间接血凝试验、方法：玻片凝集、协同凝集、间接血凝试验、乳胶凝集、对流免疫、酶免疫技术、免疫荧光乳胶凝集、对流免疫、酶免疫技术、免疫荧光技术。技术。载体颗粒载体颗粒SPASPA、乳胶、乳胶特异性特异性Ab待检待检Ag凝集凝集协同凝集试验示意图协同凝集试验示意图常用的免疫学技术有常用的免疫学技术有-协同凝集试验协同凝集试验 乳胶凝集试验乳胶凝集试验enzymes such as peroxidase react with appropriate substrates such as 3,3,5,5
8、-Tetramethylbenzidine),this causes a change in color.（四）（四）细菌核酸的检测细菌核酸的检测核酸杂交、核酸杂交、PCRPCR、16S rRNA16S rRNA基因测序、基因芯基因测序、基因芯片等技术。片等技术。更特异、敏感、快速更特异、敏感、快速5353PCR35355535353353555353535353535353535353三、细菌感染的血清学诊断三、细菌感染的血清学诊断(serological diagnosis)(serological diagnosis)查查AbAb：检测病人血液中由于细菌感染而产生的：检测病人血液中由于细
9、菌感染而产生的特异性抗体，辅助临床诊断。特异性抗体，辅助临床诊断。广泛用于多种病原体的微生物诊断和流行广泛用于多种病原体的微生物诊断和流行病学调查。病学调查。双份血清：早期（急性期）双份血清：早期（急性期）晚期（恢复期）晚期（恢复期）结果：根据双份血清中测到的抗体效价，结果：根据双份血清中测到的抗体效价，若升高若升高4 4倍或以上，有辅助诊断价值。倍或以上，有辅助诊断价值。方法：凝集试验，中和试验，方法：凝集试验，中和试验，ELISAELISA等。等。方法：凝集试验，中和试验，ELISA等。核酸疫苗缺点：安全性问题b、便于贮藏和运输；乙醇使胞壁脱水形成一道屏障，短暂阻止结晶紫-碘复合物从胞内渗
10、出；用已知Ab检测未知抗原（Ag-Ab反应）。核酸疫苗缺点：安全性问题变及灭活全疫苗发生感染性复活的可能；（二）细菌分离培养与鉴定一、人工主动免疫(artificial active immunization)利用现代生物技术，除去细菌或病毒无关有害成分，分离提取纯化对人体有保护性的抗原。核酸疫苗原理：将病原体的保护性抗原基因与质粒重组，重组体注入机体，使机体持续表达该抗原，诱导体液和细胞免疫。优选细菌感染的检查方法与防治原则6、自动微生物鉴定和药敏分析系统：用于：分离鉴定病原菌；6、核酸疫苗（DNA Vaccine）微生物学(细菌的形态学检查、分离培养和鉴定）若升高4倍或以上，有辅助诊断价值
11、。三、细菌感染的血清学诊断(serological diagnosis)G-疏松、肽聚糖层薄、外膜均含大量脂质，易被乙醇溶解，使胞壁通透性增高，胞内结晶紫-碘复合物被溶解脱出而脱色。酶联免疫吸附试验(ELISA,间接法)测定细菌的毒力及产毒性致病菌的检验程序致病菌的检验程序药物敏感试验药物敏感试验直接涂片染色直接涂片染色分离培养分离培养生化试验生化试验血清学试验血清学试验动物试验动物试验明明确确诊诊断断初步诊断初步诊断分子生物学技术分子生物学技术其他检测技术其他检测技术第二节第二节 细菌感染的特异性预防细菌感染的特异性预防 一、人工主动免疫一、人工主动免疫(artificial active
12、immunization)（一）疫苗、类毒素（一）疫苗、类毒素 1 1、死疫苗、死疫苗伤寒、霍乱等。伤寒、霍乱等。2 2、活疫苗、活疫苗BCGBCG、鼠疫等。、鼠疫等。疫苗接种疫苗接种区别点区别点死疫苗死疫苗活疫苗活疫苗制剂特点制剂特点死，强毒株死，强毒株活，减毒株活，减毒株接种剂量与特点接种剂量与特点量大，量大，2323次次量较小，量较小，1 1次次保存及有效期保存及有效期易保存，约易保存，约1 1年年不易保存不易保存免疫效果免疫效果较低，较低，维持数月维持数月2年年较高，较高，维持维持35年甚至更长年甚至更长死疫苗与活疫苗的比较死疫苗与活疫苗的比较3 3、亚单位疫苗、亚单位疫苗(subun
13、it vaccine)(subunit vaccine)利用现代生物技术，除去细菌或病毒无关有利用现代生物技术，除去细菌或病毒无关有害成分，分离提取纯化对人体有保护性的抗害成分，分离提取纯化对人体有保护性的抗原。如：肺炎链球菌、脑膜炎球菌的荚膜多原。如：肺炎链球菌、脑膜炎球菌的荚膜多糖疫苗，糖疫苗，+佐剂即成。佐剂即成。接种少量抗原可使人体产生良好免疫应接种少量抗原可使人体产生良好免疫应答，且接种反应轻微。答，且接种反应轻微。优点优点 a a、去除引起副反应的物质；、去除引起副反应的物质；b b、因不含核酸可免去减毒活疫苗回复突、因不含核酸可免去减毒活疫苗回复突变及灭活全疫苗发生感染性复活的可
14、能；变及灭活全疫苗发生感染性复活的可能；c c、消除肿瘤病毒潜在的致癌作用；、消除肿瘤病毒潜在的致癌作用；d d、可利用化学试剂分解病毒体。、可利用化学试剂分解病毒体。4 4、基因工程疫苗、基因工程疫苗本质上是亚单位疫苗本质上是亚单位疫苗如：含宋内志贺菌表面抗原质粒的伤如：含宋内志贺菌表面抗原质粒的伤寒沙门菌寒沙门菌Ty21aTy21a优点：安全、经济、可批量生产；优点：安全、经济、可批量生产；缺点：抗原的回收纯化困难。缺点：抗原的回收纯化困难。5 5、重组载体疫苗、重组载体疫苗将抗原表位的目的基因片段转入减毒的病将抗原表位的目的基因片段转入减毒的病毒或细菌。毒或细菌。形式：整合于病毒、细菌基
15、因组或质粒形式：整合于病毒、细菌基因组或质粒本质：活疫苗本质：活疫苗核酸疫苗原理：将病原体的保护性抗原核酸疫苗原理：将病原体的保护性抗原基因与质粒重组，重组体注入机体，使基因与质粒重组，重组体注入机体，使机体持续表达该抗原，诱导体液和细胞机体持续表达该抗原，诱导体液和细胞免疫。免疫。优点：优点：a a、制备简便、成本低；、制备简便、成本低；b b、便于贮藏和运输；、便于贮藏和运输；c c、免疫应答持久。、免疫应答持久。接种少量抗原可使人体产生良好免疫应答，且接种反应轻微。荚膜染色单染色、抗酸染色、特殊染色等。接种少量抗原可使人体产生良好免疫应答，且接种反应轻微。3,3,5,5-Tetramet
16、hylbenzidine),this causes a change in color.若升高4倍或以上，有辅助诊断价值。尽快送检（标本必须新鲜）enzymes such as peroxidase react with appropriate substrates such asc、免疫应答持久。乳胶凝集试验选用高度易感、健康等条件的动物。enzymes such as peroxidase react with appropriate substrates such as尤其用于在形态、排列和染色性方面无特优选细菌感染的检查方法与防治原则G-疏松、肽聚糖层薄、外膜均含大量脂质，易被乙醇溶解
17、，使胞壁通透性增高，胞内结晶紫-碘复合物被溶解脱出而脱色。晚期（恢复期）阳性率高于直接镜检，但时间长。核酸疫苗缺点：安全性问题核酸疫苗缺点：安全性问题a a、人们担心外源、人们担心外源DNADNA整合到宿主染色体中整合到宿主染色体中而激活癌基因和影响抑癌基因的表达，而激活癌基因和影响抑癌基因的表达，导致细胞的恶性转化。导致细胞的恶性转化。b b、可能诱导自身免疫性疾病。、可能诱导自身免疫性疾病。（二）类毒素（二）类毒素 概念：概念：可诱导机体建立特异性抗毒素免疫。可诱导机体建立特异性抗毒素免疫。+吸附剂（佐剂）吸附剂（佐剂）如：白喉如：白喉-百日咳百日咳-破伤风三联疫苗（破伤风三联疫苗（DPTDPT）
