1、1.21.2基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序有了目的基因，才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。有了目的基因，才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。单独的单独的DNA片段片段目的基因，是不能稳定遗传的。目的基因，是不能稳定遗传的。含有目的基因的表达载体只有进入受体细胞，并且维持稳定和表含有目的基因的表达载体只有进入受体细胞，并且维持稳定和表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。目的基因导入受体细胞后，是否可以目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定稳定维持和表达其遗传特维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。性，只
2、有通过检测与鉴定才能知道。1 1.从自然界中已有的物种中分离出来，如从基因组从自然界中已有的物种中分离出来，如从基因组文库或文库或cDNA文库中获取。文库中获取。3 3.利用利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因通过通过PCR技术可对已获取的目的基因进行扩增，以获技术可对已获取的目的基因进行扩增，以获取大量的目的基因。取大量的目的基因。2 2.人工合成目的基因人工合成目的基因常用的方法有反转录法和化学合成法常用的方法有反转录法和化学合成法（DNA合成合成仪）仪）。（一）目的基因：（一）目的基因：（二）获取方法：（二）获取方法：主要是指编码蛋白质的基因。主要是指编码蛋白质的基因。mRNAmR
3、NA反转录成反转录成cDNAcDNA蛋白质的蛋白质的 氨基酸序列氨基酸序列mRNAmRNA的的 核苷酸序列核苷酸序列目的基因目的基因 核苷酸序列核苷酸序列目的目的基因基因化学化学合成合成根据已知的氨基酸序列合成根据已知的氨基酸序列合成DNADNA：化学化学合成目的基因合成目的基因推测推测推测推测从基因文库中获取目的基因从基因文库中获取目的基因基因文库基因文库：将含有某种生物不同基因的许多片段，导入受体菌将含有某种生物不同基因的许多片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为为基因文库。基因文库。受体菌包含了某
4、种生物所有的基因，该受体菌群体称为这受体菌包含了某种生物所有的基因，该受体菌群体称为这种生物的基因组文库。种生物的基因组文库。受体菌包含了一种生物部分基因，该受体菌群体称为这种受体菌包含了一种生物部分基因，该受体菌群体称为这种生物的部分基因文库，如生物的部分基因文库，如cDNAcDNA文库。文库。基因组文库含有一种生物的全部基因，而cDNA文库指含有一种生物的部分基因，二者都是基因文库；有了基因文库，就可随时从中提取所需要的目的基因，导入受体细胞使之表达。用适当用适当限制酶切割限制酶切割与载体连接与载体连接导入受体菌群导入受体菌群与载体连接与载体连接导入受体菌群导入受体菌群基因文库的构建基因文
5、库的构建（1 1）基因组文库的构建）基因组文库的构建提取某生物提取某生物全部全部DNADNA许许 多多DNADNA片段片段该生物基该生物基因组文库因组文库（每个受体菌含有一段不同的（每个受体菌含有一段不同的DNADNA片段）片段）（2 2）cDNAcDNA文库的构建文库的构建mRNAmRNA反转录形成反转录形成该生物该生物cDNAcDNA文库文库基因组文库和部分基因组文库基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库文库)比较比较（1 1）基因文库基因文库组组的构建方法的构建方法通过通过对受对受体菌体菌的培的培养而养而储存储存基因基因1 1、原核细胞的基因结构、原核细胞的基因结构非非编码区编码区非非
6、编码区编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 与与RNARNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点启动子启动子终止子终止子启动子：启动子：一段一段有有特殊特殊结构结构的的DNADNA片断，片断，位于基因的位于基因的首端首端，它是它是RNARNA聚合酶聚合酶识别和结合的部位，有了它识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出才能驱动基因转录出mRNAmRNA，最终获得，最终获得所需要的所需要的蛋蛋白质白质。终止子：终止子：位于基因的尾端的一段特殊的位于基因的尾端的一段特殊的DNADNA片断，片断，能终止能终止mRNAmRNA的转录的转录。不能转录为信使不能转录为信使RNARNA，不能
7、不能 编码蛋白质。编码蛋白质。：能转录相应的信使：能转录相应的信使RNARNA，能能 编码蛋白质编码蛋白质 编码区编码区非编码区非编码区（含启动（含启动子和终止子和终止子等）子等）原核原核细胞细胞的的 基因基因结构结构有调控遗传信息表达的核有调控遗传信息表达的核 苷酸序列苷酸序列.包括启动子和终止子包括启动子和终止子非非编码区编码区非非编码区编码区编码区编码区编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 启动子启动子终止子终止子2 2、真核细胞的基因结构、真核细胞的基因结构编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与与RNARNA聚合酶聚合酶结合位点结合位点内含子内含子 外显子外显子 能够编码
8、蛋白质的序列叫做外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内不能够编码蛋白质的序列叫做内含子含子启动子启动子终止子终止子编码区上游编码区上游 编码区下游编码区下游 内含子：内含子：外显子：外显子：真核真核细胞细胞的的 基因基因结构结构编码区编码区非编码区非编码区外显外显子：能编码蛋白质的序列子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用的核苷酸序列，：有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的包括位于编码区上游的RNARNA 聚合酶结合位点（启动子）。聚合酶结合位点（启动子）。非非编码序列：编码序列：包括非编码区和内含子包括非
9、编码区和内含子3 3、原核细胞与真核细胞的基因结构比较、原核细胞与真核细胞的基因结构比较思思考考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续连续不连续不连续编码区编码区非编码非编码（PCRPCR，polymerase chain reaction）PCRPCR扩增仪扩增仪多多聚酶链式反应聚酶链式反应 概念概念：PCRPCR全称为全称为_，是一项，是一项 在生物在生物_复制复制_的核酸合成技术的核酸合成技术 条件：条件：_、_、_ _、_、_._.等等原理：原理：_方式：以方式：以_方式扩增，即方式扩增，即_
10、（n n为扩增为扩增循循 环的次数）环的次数）结果：结果：多聚多聚酶链式反应酶链式反应体外体外特定特定DNADNA片段片段双链双链DNADNA复制复制四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸一对引物一对引物DNADNA聚合酶聚合酶指数指数2 2n n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增要有一段已知目的基因的核苷酸序列（前提条件）要有一段已知目的基因的核苷酸序列（前提条件）温度温度过程：过程：a a、DNADNA变性变性（90-9590-95）：双链）：双链DNADNA模板模板 在热作用下，在热作用下，_断裂，形成断裂，形成_b b、退火退火（复性复性55-655
11、-60 0）：系统温度降低，引）：系统温度降低，引 物与物与DNADNA模板结合，形成局部模板结合，形成局部_。c c、延伸延伸（70-7570-75）：在）：在TaqTaq酶的作用下，酶的作用下，合成与模板互补的合成与模板互补的_。氢键氢键单链单链DNADNA双链双链DNADNADNADNA链链d d、变性、退火、延伸、多次重复、变性、退火、延伸、多次重复用用_切割目的基因，切割目的基因，使其产生使其产生 。用一定的用一定的 切割质粒，切割质粒，使其出现一个切口，产生使其出现一个切口，产生_。(基因工程的核心基因工程的核心)将切下的目的基因片段插入质粒的将切下的目的基因片段插入质粒的_处，再
12、加处，再加入适量入适量_，形成了一个重组，形成了一个重组DNADNA分子分子(重组质重组质粒粒)。限制酶限制酶黏性末端黏性末端同种限制酶同种限制酶同种同种黏性末端黏性末端切口切口DNADNA连接酶连接酶（一）构建目的（一）构建目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可遗传使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。（二）构建零件及其作用（二）构建零件及其作用目的基因目的基因启动子启动子基因表达载体的组成基因表达载体的组成 RNA RNA聚合酶识别和结合的聚合酶识别和结合的一段特殊结构的一段特殊结构的DN
13、ADNA片段，位片段，位于基因的首端，于基因的首端，RNARNA聚合酶与聚合酶与之结合才能驱动基因转录出之结合才能驱动基因转录出mRNAmRNA，进而获得需要的蛋白质。，进而获得需要的蛋白质。终止子终止子标记基因标记基因 一段特殊结构的一段特殊结构的DNADNA片片段，位于基因的尾端，作段，位于基因的尾端，作用是使转录在所需要的地用是使转录在所需要的地方停止。方停止。鉴别受体细胞中是否鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出有目的基因的细胞筛选出来。来。三三 将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞（一）转化：（一）转化：（二）方法（二）方法将目
14、的基因导入将目的基因导入植物细胞植物细胞将目的基因导入将目的基因导入动物细胞动物细胞将目的基因导入将目的基因导入微生物细胞微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法显微注射法显微注射法感受态细胞感受态细胞目的基因进入目的基因进入_内，并且在内，并且在 受体细胞内维持受体细胞内维持_和和_的过程的过程受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达1 1、将目的基因导入植物细胞的方法：、将目的基因导入植物细胞的方法：（1）农杆菌转化法农杆菌转化法 农杆菌特点：农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力数单子叶植物没有感
15、染能力原理：原理：Ti质粒上的质粒上的T-DNA可以转可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的色体的DNA上。上。过程：过程：优点优点：经济、有效经济、有效（2）基因枪法基因枪法（3）花粉管通道法花粉管通道法2 2、将目的基因导入动物细胞、将目的基因导入动物细胞方法：显微注射法方法：显微注射法程序：程序：显微注射法显微注射法含目的基因含目的基因的表达载体的表达载体动物的动物的受精卵受精卵含目的基因含目的基因的受精卵的受精卵早期胚胎早期胚胎雌性动物输雌性动物输卵管或子宫卵管或子宫转基因转基因动物动物为什么将目的基因导入动物细胞常用的受体细胞是受精卵？为什么将目
16、的基因导入动物细胞常用的受体细胞是受精卵？显微显微注射注射分裂分裂分化分化移移 植植发育发育3 3、将目的基因导入微生物细胞、将目的基因导入微生物细胞原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少方法：方法：用用Ca2+处理细胞处理细胞 感受态细胞感受态细胞 表表达载体与感受态细胞混合达载体与感受态细胞混合 感受态感受态细胞吸收细胞吸收DNA分子分子四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定检查是否成功检查是否成功(检查是否成功检查是否成功)分子水平分子水平检测检测个体水平鉴定：个体水平鉴定：检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNADNA上是否
17、插入了目的基因上是否插入了目的基因检测目的基因是否转录出检测目的基因是否转录出了了mRNAmRNA检测目的基因是否翻译成检测目的基因是否翻译成蛋白质蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等DNADNA分子杂交分子杂交DNADNA分子杂交分子杂交抗原抗原-抗体杂交抗体杂交1.1.检测转基因生物的检测转基因生物的DNADNA上是否插入了目的上是否插入了目的基因基因 提取受体生提取受体生物全部物全部DNADNA适当限制适当限制酶切割酶切割DNADNA片段片段与与同位素标记的同位素标记的含含目的基因片段目的基因片段基因探基因探针针杂交杂交（表明目的基因已插入）（表明目的基因已
18、插入）显出杂交带显出杂交带提取受体生提取受体生物全部物全部DNADNA适当限制适当限制酶切割酶切割与与同位素标记的同位素标记的含含目的基因片段目的基因片段基因探基因探针针杂交杂交显出杂交带显出杂交带（表明目的基因已插入）（表明目的基因已插入）提取受体生提取受体生物全部物全部DNADNA适当限制适当限制酶切割酶切割与与同位素标记的同位素标记的含含目的基因片段目的基因片段基因探基因探针针杂交杂交显出杂交带显出杂交带（表明目的基因已插入）（表明目的基因已插入）提取受体生提取受体生物全部物全部DNADNA适当限制适当限制酶切割酶切割与与同位素标记的同位素标记的含含目的基因片段目的基因片段基因探基因探针
19、针杂交杂交显出杂交带显出杂交带2.2.检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNA mRNA 用同位素标记的用同位素标记的目的基因片段杂交目的基因片段杂交显出杂交带显出杂交带（表明目的基因已转录出了（表明目的基因已转录出了mRNAmRNA）检测检测DNADNA利用的是利用的是DNADNA与与DNADNA杂交，检测杂交，检测mRNAmRNA利用的是利用的是DNADNA与与mRNAmRNA杂交。杂交。提取受体生物提取受体生物的的mRNAmRNA方法方法:分分 子子 杂杂 交交过程过程:方法：方法：抗原抗原抗体杂交抗体杂交3 检测目的基因是否翻译出蛋白质检测目的基因是否翻译出蛋白质 提取
20、受体生物的提取受体生物的蛋白质蛋白质与相应抗体杂交与相应抗体杂交显出杂交带显出杂交带（表明目的基因已形成蛋白质产品）（表明目的基因已形成蛋白质产品）（二）、鉴定（个体生物学水平）（二）、鉴定（个体生物学水平）抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 过程：过程：归纳步骤归纳:基因工程的基本操作程序1.1.获取目的基因获取目的基因q 从基因文库从基因文库q 利用利用PCRPCRq 化学方法人工合成化学方法人工合成2.2.构建基因表达载体构建基因表达载体q 目的基因、启动子、终止子、标记基因目的基因、启动子、终止子、标记基因3.3.将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞q
21、 农杆菌转化法、显微注射法农杆菌转化法、显微注射法4.4.目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定q 检测：是否插入、转录、翻译检测：是否插入、转录、翻译q 鉴定：鉴定：练习练习1：(2008理综山东卷理综山东卷)为扩大可耕地面积，为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。了耐盐水稻新品系。（1）获得耐盐基因后，构建重组）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所分子所用的限制性内切酶作用于图中的用的限制性内切酶作用于图中的 处，处，DNA连接酶作
22、用于连接酶作用于 处。（填处。（填“a”或或“b”）练习练习1：(2008理综山东卷理综山东卷)为扩大可耕地面积，增为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。水稻新品系。（2）将重组）将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方分子导入水稻受体细胞的常用方法有农杆菌转化法和法有农杆菌转化法和 法。法。（3）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要）由导入目的基因的水稻细胞培养成植株需要利用利用 技术，该技术的核心是技术，该技术的核心是 和和 。
23、（4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的要用放射性同位素标记的 作探针进行分子杂交作探针进行分子杂交检测，又要用检测，又要用 方法从个体水平鉴定水稻植株方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。的耐盐性。答案：（答案：（1）a a （2）基因枪）基因枪法（花粉管通道法）法（花粉管通道法）（3）植物组织培养（）植物组织培养（1分）分）脱分化脱分化（去分化）（去分化）再分化再分化（4）耐盐基因（目的基因）耐盐基因（目的基因）一定一定浓度盐水浇灌（移栽到盐碱地中）浓度盐水浇灌（移栽到盐碱地中）1）以下说法正确的是）以下说法正确的是 （）A、
24、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来基因控制的性状都能在后代表现出来C C2）不属于质粒被选为基因运载体的理由是）不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制能复制 （）B、有、有多个限制酶切点多个限制酶切点 C、具有标记基因具有标记基因 D、它是环状它是环状DNA3）有关基因工程的叙述中，错误的是）有关基因工程的
25、叙述中，错误的是（）A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性内切酶用于目的基因的获得限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞目的基因须由运载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶人工合成目的基因不用限制性内切酶4）有关基因工程的叙述正确的是）有关基因工程的叙述正确的是 （）A、限制酶只在获得目的基因时才用限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料资料5
26、）基因工程是在）基因工程是在DNA分子水平上进行设计分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是碱基互补配对的步骤是 （）A、人工合成目的基因人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达(四四)目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定检查是否成功检查是否成功检测检测鉴定鉴定检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNA DNA 上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转
27、录出了mRNAmRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法方法方法方法方法方法DNADNA分子杂交分子杂交分子杂交分子杂交（注意与上不同之处）（注意与上不同之处）抗原抗体杂交抗原抗体杂交常用的受体细胞：常用的受体细胞：动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。将目的基因导入受体细胞的原理：将目的基因导入受体细胞的原理：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。转化转化目的基因进入目的基因进入_内，并且在受体内，并且在受体细胞内维持细胞内维持_和
28、和_的过程。的过程。受体细胞受体细胞稳定稳定表达表达方法方法导入植物细胞导入植物细胞导入动物细胞导入动物细胞导入微生物细胞导入微生物细胞农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法显微注射法显微注射法感受态细胞吸收感受态细胞吸收DNADNA分子分子(检查是否成功检查是否成功)分子水平分子水平检测检测个体水平鉴定：个体水平鉴定：检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNADNA上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因检测目的基因是否转录出检测目的基因是否转录出了了mRNAmRNA检测目的基因是否翻译成检测目的基因是否翻译成蛋白质蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴
29、定、抗病鉴定、活性鉴定等DNADNA分子杂交分子杂交DNADNA分子杂交分子杂交抗原抗原-抗体杂交抗体杂交易感染双子叶植物和裸子植物。易感染双子叶植物和裸子植物。TiTi质粒的质粒的T-DNAT-DNA可转移至受体细胞的染色体上可转移至受体细胞的染色体上农杆菌特点：农杆菌特点：农杆菌转化法农杆菌转化法2.2.微生物作受体细胞原因：微生物作受体细胞原因：将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞3.3.转化方法：转化方法：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 处理细胞处理细胞 细胞细胞表达载体与感表达载体与感受态细胞混合受态细胞混合_细胞吸收细胞吸收DNAD
30、NA分子。分子。CaCa2+2+感受态感受态感受态感受态1.1.常用菌：常用菌：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌等。大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌等。显微注射法显微注射法含目的基因含目的基因的表达载体的表达载体动物的动物的受精卵受精卵含目的基因含目的基因的受精卵的受精卵早期胚胎早期胚胎雌性动物输雌性动物输卵管或子宫卵管或子宫转基因转基因动物动物为什么将目的基因导入动物细胞常用的受体细胞是受精卵？为什么将目的基因导入动物细胞常用的受体细胞是受精卵？显微显微注射注射分裂分裂分化分化移移 植植发育发育 该方法是根据碱基互补配对原则，把该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链互补的双链DNADNA解开
31、，把单链的解开，把单链的DNADNA小片段小片段用同位素、荧光分子或化学发光剂等进行用同位素、荧光分子或化学发光剂等进行标记，之后同被检测的标记，之后同被检测的DNADNA中的同源互补序中的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的列杂交，从而检出所要查明的DNADNA或基因。或基因。分子杂交技术分子杂交技术1.1.检测转基因生物的检测转基因生物的DNADNA上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因 提取受体生提取受体生物全部物全部DNADNA适当限制适当限制酶切割酶切割DNADNA片段片段用同位素标记的用同位素标记的目的基因片段杂交目的基因片段杂交（表明目的基因已插入）（表明目的基因已插入）分子杂
32、交技术分子杂交技术显出杂交带显出杂交带2.2.检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNA mRNA 用同位素标记的用同位素标记的目的基因片段杂交目的基因片段杂交显出杂交带显出杂交带（表明目的基因已转录出了（表明目的基因已转录出了mRNAmRNA）检测检测DNADNA利用的是利用的是DNADNA与与DNADNA杂交，检测杂交，检测mRNAmRNA利用的是利用的是DNADNA与与mRNAmRNA杂交。杂交。提取受体生物提取受体生物的的mRNAmRNA检测目的基因是否翻译出蛋白质检测目的基因是否翻译出蛋白质 抗原抗原抗体杂交抗体杂交提取受体生物的提取受体生物的蛋白质蛋白质与相应抗体杂交与相应抗体杂交显出杂交带显出杂交带（表明目的基因已形成蛋白质产品）（表明目的基因已形成蛋白质产品）
