1、 学案学案38 38 微生物的利用微生物的利用 1.1.微生物的实验室培养微生物的实验室培养（1 1）培养基是指人们按照微生物对）培养基是指人们按照微生物对 的不同需的不同需求，配制出的供其求，配制出的供其 的营养基质。其成分一般都的营养基质。其成分一般都包含包含 、水和无机盐。按照物理性状可分、水和无机盐。按照物理性状可分为为 培养基和培养基和 培养基。培养基。（2 2）消毒的方法主要包括）消毒的方法主要包括 、化学、化学药剂消毒法和药剂消毒法和 ；灭菌的方法主要包括；灭菌的方法主要包括 、和和 。（3 3）牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备步骤包括计算）牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备步骤包括计算
2、溶化溶化灭菌灭菌 。（4 4）微生物的接种方法包括）微生物的接种方法包括 和和 。稀释涂布平板法稀释涂布平板法营养物质营养物质生长繁殖生长繁殖碳源碳源氮源氮源液体液体固体固体煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法紫外线消毒法紫外线消毒法灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌称量称量倒平板倒平板平板划线法平板划线法2.2.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（1 1）原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是由于它们）原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是由于它们的体内能合成的体内能合成 ，该物质在把尿素分解成无机物的过，该物质在把尿素分解成无机物的过
3、程中起到催化作用。程中起到催化作用。（2 2）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用 。（3 3）实验流程：土壤取样）实验流程：土壤取样制备制备 微生物的培养微生物的培养与观察与观察细菌的计数。细菌的计数。3.3.分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离（1 1）纤维素酶是一种复合酶，它包括）纤维素酶是一种复合酶，它包括 、和和 ，前两种酶可使纤维素分解成，前两种酶可使纤维素分解成 ，第三种酶将纤维二糖分解成第三种酶将纤维二糖分解成 。（2 2）可以与纤维素形成红色复合物，但并不可以与纤维素形成红色复合物，但并不与与 发生这种反应。纤维素分解菌能产生
4、纤发生这种反应。纤维素分解菌能产生纤维素酶分解维素酶分解 ，从而使菌落周围形成透明圈。，从而使菌落周围形成透明圈。纤维素纤维素脲酶脲酶稀释涂布平板法稀释涂布平板法培养基培养基C C1 1酶酶C Cx x酶酶葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶纤维二糖纤维二糖葡萄糖葡萄糖刚果红刚果红纤维二糖和葡萄糖纤维二糖和葡萄糖考点考点1 1 培养基的配制培养基的配制考点精讲考点精讲1.1.培养基的类型培养基的类型划分标划分标准准培养基种培养基种类类特点特点用途用途物理性物理性质质液体培养液体培养基基不加凝固剂不加凝固剂工业生产工业生产固体培养固体培养基基加凝固剂，如加凝固剂，如琼脂琼脂微生物分离、微生物分离、鉴定等鉴定等划
5、分标准划分标准培养基种类培养基种类特点特点用途用途用途用途选择培养基选择培养基培养基中加入某种化培养基中加入某种化学物质，用来抑制不学物质，用来抑制不需要的微生物的生长，需要的微生物的生长，促进所需要的微生物促进所需要的微生物的生长的生长培养和分离出特定微生培养和分离出特定微生物物(如分离酵母菌和霉菌，如分离酵母菌和霉菌，可以在培养基中加入青可以在培养基中加入青霉素霉素)鉴别培养基鉴别培养基根据微生物的代谢特根据微生物的代谢特点，在培养基中加入点，在培养基中加入某种指示剂或化学药某种指示剂或化学药品品鉴别不同种类的微生物，鉴别不同种类的微生物，如用伊红如用伊红美蓝培养基美蓝培养基鉴别饮用水或乳
6、制品中鉴别饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌是否含有大肠杆菌(若有，若有，则菌落呈深紫色并带有则菌落呈深紫色并带有金属光泽金属光泽)说明：（说明：（1 1）加入培养基中的凝固剂（如琼脂），一般不能被微生物利用，只起）加入培养基中的凝固剂（如琼脂），一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。到凝固作用。（2 2）选择培养基中一般只能生长具有特定目的的微生物，鉴别培养基中可以存）选择培养基中一般只能生长具有特定目的的微生物，鉴别培养基中可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。2.2.培养基的成分培养基的成分（1 1）碳源）碳源含义：能提供碳元素的物质。含义：能提
7、供碳元素的物质。作用：构成生物体的物质，异养生物的能源物质。作用：构成生物体的物质，异养生物的能源物质。主要来源主要来源无机物：无机物：COCO2 2、NaHCONaHCO3 3。有机物：糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等。有机物：糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等。（2 2）氮源）氮源含义：能提供氮元素的物质。含义：能提供氮元素的物质。作用：合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物。作用：合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物。主要来源主要来源无机物：无机物：N N2 2、NHNH3 3、铵盐、硝酸盐。、铵盐、硝酸盐。有机物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等。有机物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等。（3 3）生长因子）生长因子含义
8、：生长不可少的微量有机物。含义：生长不可少的微量有机物。作用：酶和核酸的成分。作用：酶和核酸的成分。主要包括：纤维素、氨基酸、碱基等。主要包括：纤维素、氨基酸、碱基等。（4 4）水）水含量：在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高。含量：在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高。作用：不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的作用：不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定。稳定。主要来源：培养基、大气、代谢产物等。主要来源：培养基、大气、代谢产物等。（5 5）无机盐）无机盐含义：为微生物提供除含义：为微生物提供除C C、H H、O O以外的各种重要元素，包以外的各种重要元素，包括
9、大量元素和微量元素。括大量元素和微量元素。作用：细胞内的组成成分，生理调节物质；某些化能自养作用：细胞内的组成成分，生理调节物质；某些化能自养菌的能源、酶的激活剂。菌的能源、酶的激活剂。主要来源：培养基、大气。主要来源：培养基、大气。典例剖析典例剖析【例例1 1】利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆在工业生产上具有利用微生物分解玉米淀粉生产糖浆在工业生产上具有 广阔的应用前景，但现有野生菌株对淀粉的转化效率低，广阔的应用前景，但现有野生菌株对淀粉的转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株。某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株。（1 1）实验目的：）实验目的：。（2 2）实验原理：（略）实
10、验原理：（略）（3 3）实验步骤：）实验步骤：配制固体培养基。该培养基中除了必须以配制固体培养基。该培养基中除了必须以 作为碳作为碳 源外，还必须要有源外，还必须要有 （成分）。培养基的灭菌处（成分）。培养基的灭菌处 理要求通常是理要求通常是 。将野生菌株接入已灭菌的培养基平板上。接种时应首将野生菌株接入已灭菌的培养基平板上。接种时应首 先将接种环在火焰上灼烧并冷却后才能接种的原因是先将接种环在火焰上灼烧并冷却后才能接种的原因是 。接种后立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是接种后立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是 。接种操作后须将培养皿倒置培养的原因是接种操作后须将培养皿倒置培养的原因是 。
11、菌落形成后，加入碘液，观察周围培养基的颜色变化和变菌落形成后，加入碘液，观察周围培养基的颜色变化和变 化范围的大小，周围出现化范围的大小，周围出现 现象的菌落即为初选菌现象的菌落即为初选菌 落。初选菌落经落。初选菌落经 、后才能达到实验目的。后才能达到实验目的。（4 4）实验现象分析：（略）实验现象分析：（略）解析：微生物生长一般需要碳源、氮源、无机盐、生长解析：微生物生长一般需要碳源、氮源、无机盐、生长因子和水；固体培养基的制作要加入琼脂；微生物的培养因子和水；固体培养基的制作要加入琼脂；微生物的培养要注意消毒和灭菌。要注意消毒和灭菌。答案：（答案：（1 1）利用人工诱变培养分离分解玉米淀粉
12、的高效）利用人工诱变培养分离分解玉米淀粉的高效菌株菌株（3 3）玉米淀粉）玉米淀粉 氮源、无机盐、水、生长因子、琼脂氮源、无机盐、水、生长因子、琼脂 121 121 下灭菌下灭菌15153030分钟分钟 通过灼烧杀灭接种环带有的其通过灼烧杀灭接种环带有的其他微生物，以免污染培养基；冷却后接种的目的是避免杀灭他微生物，以免污染培养基；冷却后接种的目的是避免杀灭待接种的微生物待接种的微生物 诱导基因突变诱导基因突变 防止冷凝水污染培养物防止冷凝水污染培养物 颜色变浅的区域颜色变浅的区域 分离分离 纯化纯化【知识链接知识链接】消毒与灭菌的比较消毒与灭菌的比较消毒消毒灭菌灭菌条件条件较为温和的物理或化
13、学方较为温和的物理或化学方法法强烈的理化因素强烈的理化因素常用方法常用方法巴氏消毒法、煮沸消毒法、巴氏消毒法、煮沸消毒法、紫外线消毒法、化学药物紫外线消毒法、化学药物消毒法消毒法灼烧灭菌法、干热灭菌法、灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法结果结果杀死物体表面或内部一些杀死物体表面或内部一些对人体有害的微生物（不对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）包括芽孢和孢子）杀死物体内外所有的微生杀死物体内外所有的微生物（包括芽孢和孢子）物（包括芽孢和孢子）对应训练对应训练1.1.下列关于微生物培养与应用的叙述，错误的是下列关于微生物培养与应用的叙述，错误的是 （）A.A.通过消毒不能杀死
14、物体内所有的微生物通过消毒不能杀死物体内所有的微生物 B.B.利用平板划线法可以统计样品中活菌的数目利用平板划线法可以统计样品中活菌的数目 C.C.微生物培养用的培养基的成分和植物组织培养用的培养基微生物培养用的培养基的成分和植物组织培养用的培养基 的成分不同的成分不同 D.D.平板划线法和稀释涂布平板法常用于微生物的接种平板划线法和稀释涂布平板法常用于微生物的接种解析：消毒是指杀死病原微生物，但不一定能杀死细菌芽解析：消毒是指杀死病原微生物，但不一定能杀死细菌芽孢，故孢，故A A正确；统计样品中活菌的数目要用稀释涂布平板法，正确；统计样品中活菌的数目要用稀释涂布平板法，故故B B错误；不同的
15、培养对象所需的成分不同，培养基中所加错误；不同的培养对象所需的成分不同，培养基中所加入的物质也就不同，故入的物质也就不同，故C C正确；微生物接种最常用的方法是正确；微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，故平板划线法和稀释涂布平板法，故D D正确。正确。B B考点考点2 2 微生物的培养技术微生物的培养技术考点精讲考点精讲1.1.原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。2.2.微生物的接种方法微生物的接种方法（1 1）平板划线法：平板划线
16、法中细胞的分离和稀释过程发）平板划线法：平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在固体平板表面上的划线和移动过程中。在线的开始部分，生在固体平板表面上的划线和移动过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。常见的几种划线方法如图所示。后可能形成纯种的单个菌落。常见的几种划线方法如图所示。（2 2）稀释涂布平板法）稀释涂布平板法1010倍系列稀释操作：（如图所示）倍系列稀释操作：（如图所示）将分别装有将分别装有9 mL9 mL水的水的6 6支试管灭菌，并按支试管灭菌，并按10101 11
17、0106 6的顺序的顺序编号。编号。用移液管吸取用移液管吸取1 mL1 mL培养的菌液，注入培养的菌液，注入10101 1倍稀释液的试管倍稀释液的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸3 3次，使菌液与水充次，使菌液与水充分混匀。分混匀。从从10101 1倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1 mL1 mL稀释液，注入稀释液，注入10102 2倍稀释的倍稀释的试管中，重复步混匀操作。依次类推，直到完成最后试管中，重复步混匀操作。依次类推，直到完成最后1 1支试支试管的稀释。管的稀释。典例剖析典例剖析【例例2 2】如图是微生物平板划线示意图，划线如图是微生物
18、平板划线示意图，划线 的顺序为的顺序为1234512345。下列操作方法正确的是。下列操作方法正确的是 （）A.A.操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌 B.B.划线操作不用在火焰旁进行划线操作不用在火焰旁进行 C.C.在在5 5区域中才可以得到所需菌落区域中才可以得到所需菌落 D.D.在在1 1、2 2、3 3、4 4、5 5区域中，划线前后都要对接种环灭菌区域中，划线前后都要对接种环灭菌解析：本题考查平板划线的操作方法。每次划线前后都解析：本题考查平板划线的操作方法。每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼要对接种环进行灭菌，接种环的
19、灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作要在火焰边进行的。在烧，接种时划线操作要在火焰边进行的。在5 5个区域中，个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。D D【知识链接知识链接】平板划线操作第一次划线及每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操平板划线操作第一次划线及每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的如下表：作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的如下表：第一次灼烧第一次灼烧每次划线之前灼烧每次划线之前灼烧划线结束划线结束目的目的避免接种环上可避免接种环上可能存在的微生物能存在的微生物污染培养物污染培养物灼烧杀死上
20、次划线结灼烧杀死上次划线结束后接种环上残留的束后接种环上残留的菌种，使每次划线的菌种，使每次划线的菌种来自上次划线末菌种来自上次划线末端端划线结束后杀死接划线结束后杀死接种环上残留的菌种，种环上残留的菌种，避免细菌污染环境避免细菌污染环境和感染操作者和感染操作者对应训练对应训练2.2.下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是 （）A.A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B.B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 C.C.等培养基冷却至等培养基冷却至
21、50 50 左右时进行倒平板左右时进行倒平板 D.D.待平板冷却凝固待平板冷却凝固5 510 min10 min后将平板倒过来放置后将平板倒过来放置解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒；牛肉膏容易吸潮，量、溶化、灭菌、倒平板，不能颠倒；牛肉膏容易吸潮，所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸；待培养基冷却至纸；待培养基冷却至50 50 时，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，时，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态时倒平板；平板冷却几分钟后
22、还并且培养基处于溶化状态时倒平板；平板冷却几分钟后还需倒置。需倒置。A A考点考点3 3 微生物的筛选与计数微生物的筛选与计数考点精讲考点精讲1.1.筛选菌株筛选菌株（1 1）原则：人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的）原则：人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长。生长。（2 2）菌株筛选原理的比较）菌株筛选原理的比较土壤中分解尿素的细菌土壤中分解尿素的细菌分解纤维素的微生物分解纤维素的微生物选择培养基的成分：尿素作为唯选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源一的氮源鉴定方法：在培养基中加入酚红鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，指示剂，
23、若指示剂变红，pH升高，升高，说明细菌能分解尿素说明细菌能分解尿素选择培养基的成分：纤维素作为选择培养基的成分：纤维素作为唯一的碳源唯一的碳源鉴定方法：刚果红染色法，即刚鉴定方法：刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合物，当果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，培养基出现以纤纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈维素分解菌为中心的透明圈2.2.统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法（1 1）显微镜直接计数法）显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。下计算一定容积
24、的样品中微生物的数量。方法：用计数板计数。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌。缺点：不能区分死菌与活菌。（2 2）间接计数法）间接计数法原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少个活菌。菌落数，就能推测出样品中大约含有多少个活菌。计算公式：每克样品中的菌株数计算公式：每克样品中的菌株数=（C CV V）M M，其中，其中，C C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，代表某一稀释度下平板上
25、生长的平均菌落数，V V代表涂布平板代表涂布平板时所用的稀释液的体积（时所用的稀释液的体积（mLmL），），M M代表稀释倍数。代表稀释倍数。操作：设置重复组，增强实验的说服力和准确性。同时操作：设置重复组，增强实验的说服力和准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在3030300300的平板进行计的平板进行计数。数。典例剖析典例剖析【例例3 3】下列关于下列关于“检测土壤中细菌总数检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，错实验操作的叙述，错 误的是误的是 （）A.A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压
26、灭菌 后倒平板后倒平板 B.B.取取10104 4、10105 5、10106 6倍的土壤稀释液和无菌水各倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL0.1 mL，分，分 别涂布于各组平板上别涂布于各组平板上 C.C.将实验组和对照组平板倒置，将实验组和对照组平板倒置，37 37 恒温培养恒温培养24244848小时小时 D.D.确定对照组无菌后，选择菌落数在确定对照组无菌后，选择菌落数在300300以上的实验组平板以上的实验组平板 进行计数进行计数解析：本题以解析：本题以“土壤中细菌的计数土壤中细菌的计数”为命题点，考查为命题点，考查学生对基础知识的识记。在计数细菌时，为保证结果准确，学生对基础知识
27、的识记。在计数细菌时，为保证结果准确，一般选择菌落数目在一般选择菌落数目在3030300300的平板进行计数。的平板进行计数。D D【知识链接知识链接】微生物分离的常用方法微生物分离的常用方法（1 1）改变培养基中的营养成分可达到分离微生物的目的。）改变培养基中的营养成分可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源时，可以分离出固氮微生物；石油作为如培养基中缺乏氮源时，可以分离出固氮微生物；石油作为唯一碳源时，抑制不能利用石油的微生物的生长，能够利用唯一碳源时，抑制不能利用石油的微生物的生长，能够利用石油的微生物可以生存，由此可达到分离能消除石油污染的石油的微生物可以生存，由此可达到分离能消除石
28、油污染的微生物的目的。微生物的目的。（2 2）当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有）当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和真菌；加分离效果。例如，加入青霉素可以分离出酵母菌和真菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在主要营养成分完整的基础上加入。主要营养成分完整的基础上加入。（3 3）改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目）改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的。如将培养基放在高温环境中培养，只能得到耐高温的微的。如将培养基放在高温环境中培养，只
29、能得到耐高温的微生物。生物。对应训练对应训练3.3.有三位同学，利用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细有三位同学，利用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细 菌数。在对应稀释菌数。在对应稀释10106 6倍的培养基中，得到下表所示的结果。倍的培养基中，得到下表所示的结果。你认为下列数据中最接近真实值的是你认为下列数据中最接近真实值的是 （）同学同学统计菌落数统计菌落数平均值平均值甲甲230230乙乙21 212 256163丙丙222 260241A.230A.230B.163B.163C.241C.241D.236D.236解析：用稀释涂布平板法统计活菌落，每个稀释浓度下至少涂布三个平板，解
30、析：用稀释涂布平板法统计活菌落，每个稀释浓度下至少涂布三个平板，所以甲和丙的结果不可靠；乙虽然涂布了三个平板，有一个平板的菌落数（所以甲和丙的结果不可靠；乙虽然涂布了三个平板，有一个平板的菌落数（2121）和另外两个相差甚远，且不在和另外两个相差甚远，且不在3030300300之间，之间，2121这个数据不能用。要得到较准确这个数据不能用。要得到较准确的结果，应把甲、乙、丙三位同学所做的符合要求的数据一起统计，即的结果，应把甲、乙、丙三位同学所做的符合要求的数据一起统计，即（230+212+256+222+260230+212+256+222+260）5=2365=236。D D1.1.下列有
31、关平板划线操作的叙述，不正确的是下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是 （）A.A.第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物 污染培养物污染培养物 B.B.每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环 上残留的菌种上残留的菌种 C.C.在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 D.D.划线结束后灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免划线结束后灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免 细菌污染环境和感染操作者细菌污染环境和感
32、染操作者解析：纯化大肠杆菌的平板划线中，接种环取菌种前灼解析：纯化大肠杆菌的平板划线中，接种环取菌种前灼烧的目的是避免接种环可能存在的微生物污染培养物；以烧的目的是避免接种环可能存在的微生物污染培养物；以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种；划线结束仍需灼烧接种环，是为了避免细菌污染环境种；划线结束仍需灼烧接种环，是为了避免细菌污染环境和感染操作者；从第二次划线开始，每次划线时接种环上和感染操作者；从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。的菌种直接来源于上次划线的末端。C C2.2.鉴定纤维素分解菌时
33、，可以使用刚果红对其形成的菌落进行鉴定纤维素分解菌时，可以使用刚果红对其形成的菌落进行 染色，用刚果红染色有两种常用方法，两种刚果红染色法的染色，用刚果红染色有两种常用方法，两种刚果红染色法的 最终结果是最终结果是 （）A.A.均会出现透明圈均会出现透明圈 B.B.均不会出现透明圈均不会出现透明圈 C.C.方法一出现，方法二不出现方法一出现，方法二不出现 D.D.方法一不出现，方法二出现方法一不出现，方法二出现解析：两种刚果红染色法虽然程序不同，但最终都能形解析：两种刚果红染色法虽然程序不同，但最终都能形成以纤维素分解菌为中心的透明圈。其原理都是刚果红与成以纤维素分解菌为中心的透明圈。其原理都
34、是刚果红与纤维素形成红色复合物，一旦纤维素被分解，刚果红纤维素形成红色复合物，一旦纤维素被分解，刚果红纤纤维素复合物就不能形成，便会形成透明圈，因此项正确。维素复合物就不能形成，便会形成透明圈，因此项正确。A A3.3.下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数的实验，下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数的实验，完成下列问题：完成下列问题：（1 1）实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比）实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比 较多。将用表层土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基进行较多。将用表层土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基进行 培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁
35、殖。用培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用 这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。（2 2）材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋）材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋 白胨培养基、盛白胨培养基、盛10 mL10 mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂 布器、无菌培养皿、盛布器、无菌培养皿、盛100 mL100 mL无菌水的锥形瓶、恒温箱。无菌水的锥形瓶、恒温箱。（3 3）方法步骤：）方法步骤：倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基
36、倒 平板，操作过程应在火焰旁进行。平板，操作过程应在火焰旁进行。制备土壤稀释液：取土样制备土壤稀释液：取土样10 g10 g加入盛有加入盛有90 mL90 mL无菌水的锥形无菌水的锥形 瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液1 mL1 mL，转至盛有，转至盛有9 9 mL mL的无菌水的大试管中，依次稀释到的无菌水的大试管中，依次稀释到10107 7稀释度。稀释度。涂布：按照由涂布：按照由10107 710103 3稀释度的顺序分别吸取稀释度的顺序分别吸取0.1 mL0.1 mL进行进行 平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布平板涂布，每个稀释度下，无氮
37、培养基应至少涂布 个个 平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布1 1个平板。个平板。培养：放入恒温箱内，在培养：放入恒温箱内，在282830 30 下培养下培养3 34 4天。天。细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的的 平板进行计数。如果测试的平均值为平板进行计数。如果测试的平均值为5050，则每克样品中的，则每克样品中的 菌落数是菌落数是 （稀释度是（稀释度是10105 5）。）。（4 4）预测结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基平板上）预测结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基平板上 的菌落数应多于无氮培养基上菌落的数
38、目。请说明原因。的菌落数应多于无氮培养基上菌落的数目。请说明原因。答案：（答案：（3 3）3 3 3030300 5300 510107 7 （4 4）无氮培养基上能生存繁殖的仅是土壤中的固氮菌，而）无氮培养基上能生存繁殖的仅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中的所有菌类生存牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中的所有菌类生存解析：统计菌落数目的原则是选出菌落数在解析：统计菌落数目的原则是选出菌落数在3030300300的平板的平板进行计数。根据计算方法进行计数。根据计算方法“每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数=（C CV V）M M”，则（，则（50500.10.1）10105 5=5=510107 7。无氮培养基里没有氮源，。无氮培养基里没有氮源，只允许固氮菌生存，属于选择培养基，可分离出土壤中的固氮只允许固氮菌生存，属于选择培养基，可分离出土壤中的固氮菌。牛肉膏蛋白胨培养基营养全面，几乎允许土壤中的所有菌菌。牛肉膏蛋白胨培养基营养全面，几乎允许土壤中的所有菌类生存。类生存。
