1、二二.医疗器械的化学性能要求及检测医疗器械的化学性能要求及检测 )(00CCVVVSS 0)0(CSCSVVVMVVmNaOHc)21(1000)(MVVmc)(1000211000)()(01021112WWWWm1000102WWWWA1 材料的致热性。材料的致热性。2 因微生物污染造成的热原反应因微生物污染造成的热原反应。热原检查法（家兔法）可用于检测热原检查法（家兔法）可用于检测上述两种原因产生的热原反应。上述两种原因产生的热原反应。细菌内毒素检查法只检测产品的细细菌内毒素检查法只检测产品的细菌内毒素含量。菌内毒素含量。试验验证未发现输液器材料的致热试验验证未发现输液器材料的致热性，临
2、床发生的热原反应均为细菌内毒性，临床发生的热原反应均为细菌内毒素污染造成的。因此对输液器成品可采素污染造成的。因此对输液器成品可采用细菌内毒素检查法进行热原初试。用细菌内毒素检查法进行热原初试。热原通常是指能够致热的微生物的尸热原通常是指能够致热的微生物的尸体及代谢产物，主要是细菌的内毒素。体及代谢产物，主要是细菌的内毒素。细菌内毒素：主要存在于革兰氏阴性细菌内毒素：主要存在于革兰氏阴性细菌的细胞壁内，菌体裂解时释放出来。细菌的细胞壁内，菌体裂解时释放出来。是磷脂，脂多糖和蛋白质组成的复合物，是磷脂，脂多糖和蛋白质组成的复合物，复合物中的脂多糖是内毒素的主要成分，复合物中的脂多糖是内毒素的主要
3、成分，具有特别强的热原活性。具有特别强的热原活性。热原的致热机理：细菌内毒素，热原的致热机理：细菌内毒素，病毒，细菌及其他微生物，类固醇或病毒，细菌及其他微生物，类固醇或某些材料释放热原质，作用于动物体某些材料释放热原质，作用于动物体单核细胞，巨噬细胞等靶细胞后，促单核细胞，巨噬细胞等靶细胞后，促使其产生内生性热原，作用于下丘脑使其产生内生性热原，作用于下丘脑体温调节中枢，结果使动物体温升高。体温调节中枢，结果使动物体温升高。热原反应给临床治疗带来极大的危害，热原反应给临床治疗带来极大的危害，一般热原进入人体后数分钟至一般热原进入人体后数分钟至1小时内，即小时内，即会出现高热症状，反应严重者会
4、造成死亡，会出现高热症状，反应严重者会造成死亡，故必须严格控制。故必须严格控制。细菌内毒素的理化性质细菌内毒素的理化性质1 耐热性：耐热性：180200摄氏度摄氏度2小时干热可小时干热可完全破坏。（药典为完全破坏。（药典为250摄氏度至少摄氏度至少1小时。）小时。）2 滤过性：体积极小，可通过普通滤器。滤过性：体积极小，可通过普通滤器。3 水溶性：可溶于水，生产中可用无热原水水溶性：可溶于水，生产中可用无热原水冲洗以除去热原。冲洗以除去热原。4 不挥发性不挥发性5 被吸附性：可被树脂等吸附除去。被吸附性：可被树脂等吸附除去。6 被酸碱破坏被酸碱破坏7 被氧化剂破坏：被氧化剂破坏：30%双氧水浸
5、泡双氧水浸泡4小时，小时，可完全破坏。可完全破坏。细菌内毒素检查法细菌内毒素检查法概述：概述：1968年发现并创造了鲎试验，至今年发现并创造了鲎试验，至今仍是国际上通用检测细菌内毒素的最简便有效仍是国际上通用检测细菌内毒素的最简便有效的方法，其优点在于：的方法，其优点在于：1 科学性：有生物化学的理论基础。科学性：有生物化学的理论基础。2 准确性：是酶的分子生化反应，专属性准确性：是酶的分子生化反应，专属性高，重现性强。高，重现性强。3 灵敏性：鲎试剂和细菌内毒素的反应灵灵敏性：鲎试剂和细菌内毒素的反应灵敏度极高，敏度极高，当内毒素量低到当内毒素量低到10-10g/ml浓度，它们浓度，它们都能
6、起凝胶反应，至今未发现一种物质对都能起凝胶反应，至今未发现一种物质对鲎试剂的反应比细菌内毒素更灵敏。鲎试剂的反应比细菌内毒素更灵敏。4 实用性：方法快速，操作简单，无实用性：方法快速，操作简单，无需特殊仪器设备，经济实用。需特殊仪器设备，经济实用。由于细菌内毒素检查法的优越性，已由于细菌内毒素检查法的优越性，已被广泛应用于临床检验。被广泛应用于临床检验。实验目的：实验目的：据鲎试剂与细菌内毒素产生凝集据鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断医疗器械或其浸反应的机理，以判断医疗器械或其浸提液中细菌内毒素的限量是否符合规提液中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法，医疗器械定的一种方法，医疗
7、器械/材料须经热材料须经热原实验评价证实无材料致热性，同时原实验评价证实无材料致热性，同时经测定证实样品对细菌内毒素试验无经测定证实样品对细菌内毒素试验无干扰作用后，才能采用该方法。干扰作用后，才能采用该方法。细菌内毒素在钙离子，镁离子参细菌内毒素在钙离子，镁离子参与下，激活鲎试剂中与下，激活鲎试剂中c因子，活化的因子，活化的c因因子激活子激活b因子，活化的因子，活化的b因子激活凝固因子激活凝固酶原生成凝固酶，促使凝固蛋白原生成酶原生成凝固酶，促使凝固蛋白原生成凝固蛋白，在支联酶作用下形成凝胶。凝固蛋白，在支联酶作用下形成凝胶。内毒素内毒素C因子因子活化活化c因子因子B因子因子活化活化b因子因
8、子凝固酶元凝固酶元凝固酶凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白原凝固蛋白凝固蛋白凝胶凝胶某些非热原物某些非热原物质质G因子因子活化活化g因子因子实验试剂实验试剂：鲎试剂鲎试剂：是从栖生于海洋的无脊椎动物是从栖生于海洋的无脊椎动物“鲎鲎”的蓝色血液中提取的变形细胞溶解物，经低的蓝色血液中提取的变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥精制而成的生物制剂。鲎试剂的温冷冻干燥精制而成的生物制剂。鲎试剂的生物活性以其能检出细菌内毒素的最低有效生物活性以其能检出细菌内毒素的最低有效浓度表示。浓度表示。鲎试剂的灵敏度是用细菌内毒素来标定的，鲎试剂的灵敏度是用细菌内毒素来标定的，因此标定鲎试剂灵敏度所用的细菌内毒素必因此标定鲎试剂灵
9、敏度所用的细菌内毒素必须是统一且标准的。须是统一且标准的。细菌内毒素检查用水：细菌内毒素检查用水：指与灵敏度为指与灵敏度为0.03EU/ML或更高灵敏度或更高灵敏度的鲎试剂在的鲎试剂在371条件下条件下24小时不产生小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。凝集反应的灭菌注射用水。移液管（或刻度吸管，定量移液移液管（或刻度吸管，定量移液器）、凝集管（器）、凝集管（101075mm75mm）、三角瓶、）、三角瓶、小试管（小试管（1616100mm100mm）、试管架、洗耳）、试管架、洗耳球、封口膜或金属试管帽、时钟、脱球、封口膜或金属试管帽、时钟、脱脂棉、吸水纸、剪刀砂轮。所有玻璃脂棉、吸水纸、剪刀砂轮
10、。所有玻璃器皿须经器皿须经180180干烤至少干烤至少2 2小时。塑料小时。塑料用具应使用其它适宜的除细菌内毒素用具应使用其它适宜的除细菌内毒素方法。方法。取取0.3mL 1100.3mL 110稀释液，加上稀释液，加上2.7mL 2.7mL BETBET水即为水即为11001100稀释液，得到稀释液，得到90EU/ml90EU/ml内毒素标准溶液。往后依次类推。也可内毒素标准溶液。往后依次类推。也可写成下列格式写成下列格式：0.3ml2.7ml2.4ml0.3ml1ml1ml将已充分溶解的待复核鲎试剂将已充分溶解的待复核鲎试剂1818支支(管管)放放在试管架上，排成在试管架上，排成5 5列，
11、其中列，其中4 4支支(管管)4)4列列分别加入分别加入2.02.0、1.01.0、0.50.5、0.250.25的内毒素标准溶液；的内毒素标准溶液；2 2支支(管管)1)1列分别加入列分别加入 BETBET水，作为阴性对照。内毒素标准溶液水，作为阴性对照。内毒素标准溶液和和BETBET水加样量均为水加样量均为0.1ml/0.1ml/支。支。结果判定：结果判定：将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转将试管从水浴中轻轻取出，缓缓倒转180180时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（）；凝胶不能保持者为阳性，记录为（）；凝胶不能保持完整 并 从 管 壁 滑 脱
12、 者 为 阴 性，记 录 为完整 并 从 管 壁 滑 脱 者 为 阴 性，记 录 为（）。（）。按下式计算反应终点浓度的几何平均值即为按下式计算反应终点浓度的几何平均值即为鲎试剂灵敏度的复核结果（鲎试剂灵敏度的复核结果（c c）。）。cclglg-1-1(X/4)(X/4)式中式中X X为反应终点浓度的对数值（为反应终点浓度的对数值（lglg）。反）。反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后四个呈阳性的结果浓度。四个呈阳性的结果浓度。注：注：A为供试品溶液；为供试品溶液；B为供试品阳性为供试品阳性对照；对照；C为阳性对照；为阳性对照；D为阴性对照为
13、阴性对照4、全身毒性、全身毒性(急性毒性急性毒性)试验：试验：此试验将器械、材料和或浸提液在此试验将器械、材料和或浸提液在24小时内一次或多次作用于一种动物模型，小时内一次或多次作用于一种动物模型，测定其潜在的危害作用。测定其潜在的危害作用。为减少试验动物数量，国际标准建为减少试验动物数量，国际标准建议议,全身毒性试验可被包括在亚急性和亚全身毒性试验可被包括在亚急性和亚慢性毒性试验方案中和植入试验方案中。慢性毒性试验方案中和植入试验方案中。5、血液相容性试验：、血液相容性试验：5.1 血栓形成血栓形成 5.2 凝血凝血 5.3 血小板血小板 5.4 血液学血液学 5.5 补体系统补体系统 溶血试验属于血液学方面的试验，系采用体外法测溶血试验属于血液学方面的试验，系采用体外法测定由器械、材料和定由器械、材料和/或其浸提液导致的红细胞溶解和血或其浸提液导致的红细胞溶解和血红蛋白释放的程度。溶血试验是最为常用的试验红蛋白释放的程度。溶血试验是最为常用的试验
