1、如何分离鉴定氨基酸混合液？如何分离鉴定氨基酸混合液？生物化学与分子生物学实验教学中心生物化学与分子生物学实验教学中心氨基酸的薄层层析氨基酸的薄层层析(Thin layer chromatography of amino acids)生物化学与分子生物学实验教学中心生物化学与分子生物学实验教学中心09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心实验目的实验目的l掌握薄层层析法的一般原理。掌握薄层层析法的一般原理。l掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。l掌握如何根据移动速率（掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）。的物质
2、（即氨基酸混合液）。09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心层析技术层析技术l概念：是利用化合物中各组分的物理性质的差概念：是利用化合物中各组分的物理性质的差别（如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、别（如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、分子极性等）使各组分在两相中的分布不同，分子极性等）使各组分在两相中的分布不同，从而使各组分以不同速度随流动相向前移动而从而使各组分以不同速度随流动相向前移动而达到分离的目的。达到分离的目的。l特点：分离效率高，能分离各种性质相类似的特点：分离效率高，能分离各种性质相类似的物质。不仅可用于少量物质的分离纯分，也可物质。不仅可用于少量物质的分离纯分，也可用
3、于大量物质的分离纯化和制备。用于大量物质的分离纯化和制备。09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心层析的基本过程层析的基本过程 组分组分A A组分组分B B+流动相流动相固定相固定相吸附吸附溶解溶解结合等结合等解除上解除上述作用述作用反反复复进进行行组分组分A A组分组分B B移动速度不同移动速度不同09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心层析法的分类层析法的分类l气相层析（以气体为流动相的层析法）气相层析（以气体为流动相的层析法）l液相层析（以液体为流动相的层析法，此为生液相层析（以液体为流动相的层析法，此为生物化学领域里常用的方法）物化学领域里常用的方法）1.吸附层析：吸附层析
4、：薄层吸附层析、薄层吸附层析、吸附柱层析吸附柱层析 2.分配层析：纸层析、柱层析、分配层析：纸层析、柱层析、薄层层析薄层层析 3.离子交换层析离子交换层析 4.凝胶层析：柱层析、薄膜层析凝胶层析：柱层析、薄膜层析 5.亲和层析亲和层析 09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心实验原理实验原理 一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为为固定相固定相。当。当液相液相（展开溶剂）在固定相上流动时，（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样吸附力不一样，不同氨基，不同氨基酸在展开溶剂中的酸在展开溶剂中的溶解
5、度不一样溶解度不一样，点在薄板上的混合，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同移动速率也不同，因而可以，因而可以彼此分开。（即通过吸附彼此分开。（即通过吸附-解吸解吸-再吸附再吸附-再解吸的反再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）复进行，而将样品各组分分离开来）09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心茚三酮水化后生成茚三酮水化后生成水化茚三酮水化茚三酮，它与氨，它与氨基酸的羧基反应生成基酸的羧基反应生成还原茚三酮还原茚三酮、氨及醛，、氨及醛，与此同时，还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合与此同时，还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成生成蓝色化合物蓝色化合物而使
6、氨基酸斑点显色。而使氨基酸斑点显色。实验原理实验原理09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心茚三酮反应茚三酮反应(ninhydrin reaction)09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心实验原理实验原理09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心实验材料实验材料l吸附剂：吸附剂：l粘合剂：粘合剂：l氨基酸的异丙醇溶液氨基酸的异丙醇溶液 丙氨酸、精氨酸、甘氨酸丙氨酸、精氨酸、甘氨酸l展开展开-显色剂显色剂（正丁醇、乙酸、茚三酮溶液）（正丁醇、乙酸、茚三酮溶液）l分析样品：分析样品：氨基酸混合液氨基酸混合液09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心器材器材l层析板、尺子、铅
7、笔层析板、尺子、铅笔l烧杯、量筒烧杯、量筒l喷雾器、吹风机喷雾器、吹风机l毛细管、层析缸毛细管、层析缸l药匙药匙l烘烤箱烘烤箱09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心 09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心点样点样2cm1cm Ala Arg Gly Mix09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心 展层、显色展层、显色Ala Arg Gly Mix09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心注意事项注意事项09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心Rf=斑点至原点距离斑点至原点距离溶剂前缘至原点距离溶剂前缘至原点距离结果计算结果计算 小心量出斑点中心至原点中心距离，小心量出斑点中心至原点中心距离，再量出原点中心至溶剂前沿的距离，计算再量出原点中心至溶剂前沿的距离，计算出它们的出它们的 值。值。根据根据值，鉴定出混合样品中氨基值，鉴定出混合样品中氨基酸的种类，并绘出层析图谱。酸的种类，并绘出层析图谱。09年秋季学期生物化学与分子生物学实验教学中心复习思考题复习思考题l氨基酸薄层层析的基本原理是什么？氨基酸薄层层析的基本原理是什么？l按原理分类，层析分为哪些？主要原理各按原理分类，层析分为哪些？主要原理各是什么？是什么？生物化学与分子生物学实验教学中心生物化学与分子生物学实验教学中心
