1、体外诊断试剂分析性体外诊断试剂分析性能评估线性范围能评估线性范围本指南的目的旨在提供一种定量测量程序线性评价的统计学方法。确定一种方法的非线性浓度范围，及在每个浓度水平上非线性的程度。23体外诊断试剂分析性能评估线性范围体外诊断试剂产品性能评估过程0102030405060701020304050607确定线性范围数据修正基本原则样本要求数据收集数据检查数据分析24体外诊断试剂分析性能评估线性范围（1）实验操作人员应熟悉方法原理与操作，能对样本进行正确处理，确保仪器工作状态正常，采用适当的校准品对仪器进行校准。（2）仪器的各项性能指标（如精密度）合格，不存在明显的携带污染等。（3）应使用同批号
2、试剂及校准品。线性范围评估的基本原则线性范围评估的基本原则25体外诊断试剂分析性能评估线性范围确定样本类型：为避免基质效应对结果的影响，进行线性评价时所选用的样本应与临床实验样本相似，但不可采用含有对测定方法具有明确干扰作用的样本，如溶血、脂血、黄疸或含有某些特定药物的样本。理想样本为分析物浓度接近预期测定上限的病人混合血清，可用其他病人样本将其稀释为预定浓度。EP6-A中建议应尽可能按以下顺序进行样本种类的选择：病人混合血清；用适当稀释液稀释的病人血清；添加分析物的病人样本；用处理过的低浓度物质或处理过的血清物质稀释的病人血清；商业质控品/校准品/线性物质；使用生理盐水稀释的样本；稀释不足或
3、过度稀释的商业质控品；水溶液；其他溶剂的溶液。实验样本的基本要求和制备方法实验样本的基本要求和制备方法：26体外诊断试剂分析性能评估线性范围建立线性范围：建议9至11个浓度，每个浓度下重复2至4次；验证内部方法或修正方法：建议7至9个点，每个浓度重复2至3次；验证线性范围在实验室有效：建议5至7个浓度，每个浓度重复2次；u注意：当建立方法的线性范围时，应有20%到30%的样本的浓度范围超出预期的测量范围，但在可接受的线性响应范围内。样本数量的要求：样本数量的要求：27体外诊断试剂分析性能评估线性范围不同浓度水平样本制备表：不同浓度水平样本制备表：28体外诊断试剂分析性能评估线性范围实验过程：实
4、验过程：所有样本应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定，最好在一天之内完成。29体外诊断试剂分析性能评估线性范围数据分析方法：数据分析方法：确定自己所要求的测量误差、偏倚、随机误差（不精密度）、非特异性（干扰）的大小。初步数据检查：检查数据是否有极端明显的差异（或错误）？无？有？目视每组数据点内有无离群点？无？有？一个？一个以上？如果需要，将每一组的检测数据按检测时间次序排列，检查是否有漂移或趋势性变化。观察每个浓度水平的响应值之间的差异。目视检查XY散点图对于后续的线性评估是非常重要的，它可以很容易的发现非线性，或测量范围是否太窄或太宽，也可以为后续的统计分析选择更合适的统计分析方法。
5、设定偏差标准：30体外诊断试剂分析性能评估线性范围确定线性范围：确定线性范围：多项式线性评价：对实验数据进行一次、二次、三次多项式回归分析。具体的评价方法包括两部分：第一部分：第一部分：检验非线性多项式是否较线性多项式与数据更 为相符。第二部分：第二部分：当非线性多项式拟合数据点比线性好时，判断 最适非线性模型与线性拟合之间的差值是否小 于预先设定的该方法的允许偏差。31体外诊断试剂分析性能评估线性范围样品重复检测的随机误差评估：样品重复检测的随机误差评估：R：为重复测定的次数（j=1,2,3R）L：样本数ri：样本i处的平均值。L：样本数ri：样本i处的平均值。32体外诊断试剂分析性能评估线
6、性范围非线性系数b2，b3的t检验：t=bi/SEit=bi/SEi自由度计算公式：df=LR-Rdf，L：不同浓度样本数，R：重复检测次数，Rdf：回归自由度例：三次多项式回归时，L=5，R=2，Rdf=4，df=5*2-4=6。查t值表（附录B)（双侧=0.05）。如非线性系数b2、b3与0比较，经t检验（p0.05），存在线性关系，不精密度满足条件时，则分析完成。如二次多项式模型的非线性系数b2，或三次多项式模型的b2或b3中任一个与0比较，有显著差异（p2.365，DF=7），三次多项式模型的b2和b3无显著意义。标准差的大小也显示二次多项式模型较一次多项式和三次多项式模型更适合该组数
7、据。一次多项式和二次多项式模型的差值都没有超过实验室设定的0.2mg/dl，所以该方法在该范（4.6515.4mg/mL）内呈线性。线性偏倚分析：线性偏倚分析：40体外诊断试剂分析性能评估线性范围图C1：Ca线性实验1-6稀释图C2：Ca线性评价差值点图1-6稀释图C3：Ca线性实验1-5稀释图C4：Ca线性评价差值点图1-5稀释41体外诊断试剂分析性能评估线性范围举例举例标本号测量结果#1测量结果#2均 值126.526.226.352139138138.53269273271.04337343340.05409404406.5在实验室内准备五个等距浓度的标本测定IgM，每标本重复测定两次。
8、假定实验室设定的重复性和线性的允许误差范围分别为2%和5%。随机顺序测试结果如下：标本号均值差值DiffDiff 2/2%Diff%Diff 2/2126.350.3.0451.140.6482138.51.00.50.720.2613271.04.08.01.481.0894341.06.018.01.761.5485406.55.012.51.230.756 从表中数据可以看出，没有明显的离群值，但在低水平浓度处重复性较好，而在高浓度水平处两次测量结果差异较大。重复性差异检测如下：42体外诊断试剂分析性能评估线性范围阶别回归系数结果系数（SEi）t检验自由度回归标准误(Sy,x)一次b0-
9、52.0716.923.1一次b196.185.1018.8822.8二次b0-129.4715.628.3二次b1162.5211.9113.6二次b2-11.061.955.7(*)710.3三次b0-97.4835.88-2.7三次b1117.5846.912.5三次b26.0817.410.3三次b3-1.901.92-1.0610.3表：回归分析的结果表：回归分析的结果从表中可知，二次多项式模型比一次多项式线性要好，有统计意义的显著性系数（t=5.7，超过查表的2.365），该组数据存在非线性。43体外诊断试剂分析性能评估线性范围线性偏倚分析：线性偏倚分析：实测均值预测值（1st）预
10、测值（2nd）差值（2nd-1st）%差值26.444.122.0-22.1-50.2138.5140.3151.311.07.8271.0236.5258.622.19.3340.0332.7343.711.03.3406.5428.8406.7-22.1-5.2从一次多项式和二次多项式模型的对比分析结果来看，在低和中浓度处有较大的差别，而在高浓度水平处有较好的一致性。高中低浓度水平处差值的百分数大小超过了实验室设定的误差范围，因而认为本方法不具有线性。44体外诊断试剂分析性能评估线性范围样本测量时要按什么顺序？分析顺序应是随机的，但如果存在明显携带污染或漂移，则可妥协。重复测量的次数有具体要求吗？为了得到可靠的检测结果，对于某些分析物，或在某个浓度水平，需重复测量3-5次。用户要能准确地判断重复测量的次数，本指南不反对在不同的浓度水平重复不同的次数。评价线性范围时，最好要包含几个重要的浓度：a.最低分析浓度或线性范围的下限；b.不同的医学决定水平值；c.最高分析浓度或线性范围的上限。高值和低值浓度的样本是否必须按比例精确配成等间距的不同浓度？等间距不是本方法所必需的。只要各标本间的相互关系已知，配成特殊浓度的样本也是可以 接受的。45体外诊断试剂分析性能评估线性范围46体外诊断试剂分析性能评估线性范围
