1、医学微生物学实验室规则医学微生物学实验室规则 一.进入实验室必须穿白大衣,不必需的物品不要 携带入室。二.保持实验室的安静和秩序,实验要严肃认真。三.如有传染性材料的污染污染,及时报告老师。四.实验过程中有仪器和器材的损坏要报告老师 并登记。五.实验后的材料要放到指定的位置。六.离开实验室前,要用肥皂洗手,接触过传染性强 的实验材料要用0.1%的新洁尔灭泡手1-2分钟 七.值日生要作好值日工作,关好水,电,门窗,作好 实验记录本的登记方可离开实验室。医学微生物学实验室规则 一.进入实验室必须穿白大衣,不必需的实验一实验一 药品的微生物限度检查（一）药品的微生物限度检查（一）实验室常用消毒灭菌设
2、备实验室常用消毒灭菌设备 空气和皮肤细菌检查方法（综合实验空气和皮肤细菌检查方法（综合实验+基础实验）基础实验）一、目的要求一、目的要求 1、了解微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备、了解微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备 2、了解空气、皮肤细菌检查方法、了解空气、皮肤细菌检查方法 3、掌握药品的微生物学检验程序和方法、掌握药品的微生物学检验程序和方法 二、实验内容二、实验内容 1.药品的微生物限度检查（一）药品的微生物限度检查（一）1）口服药物的检查）口服药物的检查:药品的预处理：药品的预处理：大肠杆菌的检查：大肠杆菌的检查：细菌总数的检查：细菌总数的检查：2）外用药物的检查）外用药物的检查:
3、药品的预处理：药品的预处理：绿脓杆菌的检查：绿脓杆菌的检查：金黄色葡萄球菌的检查：金黄色葡萄球菌的检查：2.空气、皮肤细菌检查方法空气、皮肤细菌检查方法(验证验证)3.微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备：微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备：高压蒸汽灭菌锅、消毒煮沸器、高压蒸汽灭菌锅、消毒煮沸器、G6玻璃滤菌器装置、洁净工作台、玻璃滤菌器装置、洁净工作台、移动式移动式 紫外光灯、鼓风式干烤箱、紫外线杀菌标本。紫外光灯、鼓风式干烤箱、紫外线杀菌标本。实验一 药品的微生物限度检查（一）药品的微生物限度检查实验目的药品的微生物限度检查实验目的 通过实验了解药品微生物限定检查法的通过实验了解药品微生物限
4、定检查法的意义、设计方法、细菌检查常用的基本技术意义、设计方法、细菌检查常用的基本技术和程序，结果分析方法。和程序，结果分析方法。药品的微生物限度检查实验程序药品的微生物限度检查实验程序 一、药品的预处理一、药品的预处理 二、药品的增菌培养、结果分析二、药品的增菌培养、结果分析 三、细菌分离鉴定、结果分析三、细菌分离鉴定、结果分析 药品的微生物限度检查实验目的 通过实验了解药品的微生物限度检查药品的微生物限度检查实验方法实验方法（一）（一）1.药品的预处理药品的预处理 口服药口服药 外用药外用药 2克药品加克药品加20毫升生理盐水，毫升生理盐水，研磨制成悬液研磨制成悬液 2.细菌培养细菌培养
5、药品混悬液药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中毫升加入胆盐乳糖增菌液中 药品混悬液药品混悬液10毫升加入亚碲酸钠增菌液中毫升加入亚碲酸钠增菌液中 37,24小时小时 外外用药用药 口口服药服药 药品混悬液药品混悬液10毫升加入胆盐乳糖增菌液中毫升加入胆盐乳糖增菌液中 37,24小时小时 药品的微生物限度检查实验方法（一）1.药品的预处理 口服 3.细菌总数测定细菌总数测定(以生理盐水稀释以生理盐水稀释)-1 -2 -3 -4 将剩余将剩余口服药口服药以以10 10 10 10 进行稀释进行稀释 9ml生理盐水生理盐水 取四个中试管取四个中试管 各加各加9ml生理盐水生理盐水 1ml 1ml
6、从剩余从剩余10ml悬液中取悬液中取1ml 加入上述四个稀释管中加入上述四个稀释管中 10-1 10-2 10-3 10-4 从上述四个稀释管中各取从上述四个稀释管中各取1ml混入溶化的琼脂培养基中，混入溶化的琼脂培养基中，混匀，冷却后置混匀，冷却后置37恒温培养箱培养恒温培养箱培养24小时小时。3.细菌总数测定(以生理盐水稀释)-1 -2 实验二实验二 药品的微生物限度检查（二）药品的微生物限度检查（二）细菌的形态学检查及培养接种技术细菌的形态学检查及培养接种技术 一、目的要求一、目的要求:1、了解细菌培养接种技术、了解细菌培养接种技术 2、掌握细菌基本形态、掌握细菌基本形态 3、掌握药品的
7、微生物学检验程序和方法、掌握药品的微生物学检验程序和方法 二、实验内容二、实验内容 1.药物的微生物限度检查（二）药物的微生物限度检查（二）2.空气、皮肤细菌检查结果测定。空气、皮肤细菌检查结果测定。3.讲授基础培养基的制备方法（营养琼脂、营养肉汤）。讲授基础培养基的制备方法（营养琼脂、营养肉汤）。4.细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法(基本技能基本技能)液体培养基液体培养基 平板培养基平板培养基 斜面培养基斜面培养基 双糖含铁半固体斜面培养基双糖含铁半固体斜面培养基 5.显微镜下观察显微镜下观察 细菌的基本形态细菌的基本形态:球菌、枯草杆菌、霍乱
8、弧菌。球菌、枯草杆菌、霍乱弧菌。特殊结构：特殊结构：肺炎荚膜、变形鞭毛、破伤风芽胞。肺炎荚膜、变形鞭毛、破伤风芽胞。6.培养基的种类和用途培养基的种类和用途 普通培养基、营养培养基、厌氧培养基、选择培养基普通培养基、营养培养基、厌氧培养基、选择培养基 实验二 药品的微生物限度检查（二）一、空气、皮肤细菌培养现象观察一、空气、皮肤细菌培养现象观察 （一）记录空气微生物培养结果（一）记录空气微生物培养结果?菌落数目、大小、边缘、颜色、粗糙（光滑）菌落数目、大小、边缘、颜色、粗糙（光滑）（二）记录皮肤微生物培养结果（二）记录皮肤微生物培养结果 比较消毒前后细菌菌落数，菌落特点。比较消毒前后细菌菌落数
9、，菌落特点。一、空气、皮肤细菌培养现象观察 （一）记录空气微生物培养培养基的制备培养基的制备 培养基分类培养基分类 根据物理性状分类：根据物理性状分类：液体培养基液体培养基 主要用于增菌主要用于增菌 半固体培养基半固体培养基 用于检测动力及保存菌种用于检测动力及保存菌种 固体培养基固体培养基 用于分离鉴定细菌用于分离鉴定细菌 根据用途分类：根据用途分类：基础培养基基础培养基 普通琼脂培养基普通琼脂培养基 营养培养基营养培养基 血液琼脂培养基血液琼脂培养基 选择培养基选择培养基 SSSS培养基培养基 鉴别培养基鉴别培养基 双糖铁培养基双糖铁培养基 厌氧培养基厌氧培养基 庖肉培养基庖肉培养基 培养
10、基的制备 培养基分类 根据物理性状分类：液体培培养基的制备程序培养基的制备程序 调配调配矫正矫正pH（7.0-7.6）分装分装 灭菌（灭菌（121.3，20-30分钟）分钟）放入冰箱冷藏备用。放入冰箱冷藏备用。?因高压之后因高压之后pH值会下降值会下降0.1左右，所以矫正左右，所以矫正pH时应比时应比所需的所需的pH高。高。?鉴定是否有菌可将培养基置于鉴定是否有菌可将培养基置于37 培养培养24小时，然小时，然后观察。后观察。培养基的制备程序 调配矫正p H（7.0-7.6）分装二、细菌的接种技术二、细菌的接种技术 材材 料料?普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体斜面培养基普通琼脂平板、肉汤培养基
11、、半固体斜面培养基大肠埃希菌培养物（套台）大肠埃希菌培养物（套台）二、细菌的接种技术 材 料?普通琼脂平板、肉汤培养基、半方方 法法 1.平板划线接种法平板划线接种法 （1）平行划线法）平行划线法（2）分区划线法）分区划线法 2.3.琼脂斜面的接种方法琼脂斜面的接种方法 4.液体培养基接种法液体培养基接种法半固体接种法半固体接种法 方 法 1.平板划线接种法（1）平行划线法（2）分 分区划线法 分区划线法 菌落 菌落 斜面移种技术 斜面移种技术 菌苔 菌苔 液体移种技术 液体移种技术 穿刺技术穿刺技术 穿刺技术 药物的微生物限度检查方法（二）取出前次实验培养物观察：取出前次实验培养物观察：1.
12、1.口服药物口服药物 1)1)细菌鉴定：细菌鉴定：在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长：在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长：增菌液变混浊增菌液变混浊有有 -接种在伊红美兰琼脂平板培养基接种在伊红美兰琼脂平板培养基 上面。上面。方法：分区划线接种。方法：分区划线接种。2)2)细菌总数测定：细菌总数测定：选择选择30-30030-300个菌落平板，个菌落平板，细菌总数菌落数稀释倍数细菌总数菌落数稀释倍数 药物的微生物限度检查方法（二）取出前次实验培养物观察2.2.外用药外用药 1)1)判定胆盐乳糖增菌液培养物及亚碲酸钠增菌液培判定胆盐乳糖增菌液培养物及亚碲酸钠增菌液培养物有无细菌生长：养物有无细菌生长：增菌
13、液变混浊增菌液变混浊有有 2)2)细菌鉴定：细菌鉴定：（1 1）将胆盐乳糖增菌液培养物无菌接种在）将胆盐乳糖增菌液培养物无菌接种在 1616烷三甲烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上面。基溴化胺琼脂斜面培养基上面。方法：斜面化线接种；方法：斜面化线接种；（2 2）将亚碲酸钠增菌液培养物，无菌接种在卵黄高）将亚碲酸钠增菌液培养物，无菌接种在卵黄高盐琼脂平板培养基上面。盐琼脂平板培养基上面。方法：分区划线接种。方法：分区划线接种。3737恒温孵育箱恒温孵育箱2424小时培养后，观察结果。小时培养后，观察结果。2.外用药 1)判定胆盐乳糖增菌液培养物及亚碲酸钠增菌液培养细菌基本形态细菌基本形态 球菌球菌
14、杆菌杆菌 螺形菌螺形菌 细菌基本形态 球菌 杆菌 螺形菌 葡萄球菌葡萄球菌 葡萄球菌 链球菌链球菌 链球菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 枯草杆菌 枯草杆菌 霍乱弧菌 霍乱弧菌 细菌特殊结构细菌特殊结构 鞭毛 荚膜 芽孢 细菌特殊结构 鞭毛 荚膜 芽孢 spore 破伤风梭菌 s p o r e 破伤风梭菌 实验三实验三 药品的微生物限度检查（三）微生物的形态学检查及药物的敏感性试验 一、目的要求一、目的要求:1、了解细菌的生长现象及代谢产物的观察、了解细菌的生长现象及代谢产物的观察 2、掌握药品的微生物学检验程序和方法、掌握药品的微生物学检验程序和方法 二、实验内容二、实验内容 1.药物的微生物限
15、度检查（三）药物的微生物限度检查（三）2.细菌的生长现象及代谢产物的观察细菌的生长现象及代谢产物的观察 1）液体培养基）液体培养基-沉淀、浑浊、表面生长现象。沉淀、浑浊、表面生长现象。2）三葡、三链、大肠与副伤乙培养基的菌落特征、溶血环观察。）三葡、三链、大肠与副伤乙培养基的菌落特征、溶血环观察。3）双糖含铁培养基）双糖含铁培养基-动力、气体、硫化氢、分解乳糖观察。动力、气体、硫化氢、分解乳糖观察。4）结核杆菌菌落的观察。）结核杆菌菌落的观察。3.中草药、抗生素抑菌试验中草药、抗生素抑菌试验 1）中草药）中草药-大蒜汁、黄连、黄芩、黄柏。大蒜汁、黄连、黄芩、黄柏。2）抗生素）抗生素-青霉素、庆
16、大、氨苄、新诺明、生理盐水。青霉素、庆大、氨苄、新诺明、生理盐水。实验三 药品的微生物限度检查（三）药物的微生物限度检查（三）药物的微生物限度检查（三）1）从伊红美兰琼脂平板培养基上）从伊红美兰琼脂平板培养基上-挑取黑色带有金属光泽的湿润菌落，接种在普通琼脂斜挑取黑色带有金属光泽的湿润菌落，接种在普通琼脂斜面培养基上面，进行细菌的纯培养。面培养基上面，进行细菌的纯培养。2）观察外用药物在）观察外用药物在16烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上生烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基上生长状况。长状况。记录被检菌色素的溶解性质、液化明胶的状况及菌苔粘稠记录被检菌色素的溶解性质、液化明胶的状况及菌苔粘稠度等。度等
17、。革兰氏染色镜下观察其菌落形态。革兰氏染色镜下观察其菌落形态。根据上述被检菌落的生物性质和状况及细菌形态，确定该根据上述被检菌落的生物性质和状况及细菌形态，确定该被检菌的名称。被检菌的名称。3）从卵黄高盐琼脂平板培养基上生长，挑取黄色的湿润菌）从卵黄高盐琼脂平板培养基上生长，挑取黄色的湿润菌落，接种在普通琼脂斜面培养基上面，进行细菌的纯培养。落，接种在普通琼脂斜面培养基上面，进行细菌的纯培养。药物的微生物限度检查（三）1）从伊红美兰琼脂平板培养基上-2.细菌的生长现象及代谢产物的观察细菌的生长现象及代谢产物的观察 菌膜 对照 混浊生长混浊生长 菌沉淀 均匀浑浊 2.细菌的生长现象及代谢产物的观
18、察 菌膜 对照 混浊生长 菌菌膜生长菌膜生长 菌膜生长 药品的微生物学检查P P T药品的微生物学检查P P T药品的微生物学检查P P T3.中草药、抗生素抑菌试验中草药、抗生素抑菌试验 3.中草药、抗生素抑菌试验 纸片法 纸片法?原理：革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁差异原理：革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁差异六、革兰染色法六、革兰染色法?应用应用?方法方法 标本片制备标本片制备 革兰染色革兰染色?结果结果?原理：革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁差异六、革兰染色法?2.革兰染色革兰染色（1）初染：滴加结晶紫染液）初染：滴加结晶紫染液l2滴，滴，1分钟分钟.水洗水洗（2）媒染：滴加碘液，）媒染：滴加碘
19、液，l2滴，作用滴，作用1分钟后水洗。分钟后水洗。（3）脱色：滴加）脱色：滴加95酒精数滴，（约酒精数滴，（约1530秒），立即水秒），立即水洗。洗。（4）复染：滴加稀释复红染液）复染：滴加稀释复红染液12滴，作用滴，作用1分钟后水洗。分钟后水洗。（5）结果：牙垢标本中革兰阳性菌染成紫色，革兰阴性菌）结果：牙垢标本中革兰阳性菌染成紫色，革兰阴性菌染成红色。其中真菌染成红色。其中真菌(白色念珠菌白色念珠菌)染成紫色，而螺旋体等染成紫色，而螺旋体等被染成红色。口腔中脱落的组织细胞及个别白细胞被染成被染成红色。口腔中脱落的组织细胞及个别白细胞被染成红色。其细胞质呈红色，细胞核呈深红色。红色。其细胞质
20、呈红色，细胞核呈深红色。2.革兰染色（1）初染：滴加结晶紫染液l 2 滴，1 分钟实验四实验四 药物的微生物限度检查（四）药物的微生物限度检查（四）病毒和细菌及其他病原微生物病毒和细菌及其他病原微生物 一、目的要求一、目的要求 1、了解抗酸染色方法及各种病毒和细菌的菌落形态、了解抗酸染色方法及各种病毒和细菌的菌落形态 2、掌握药品的微生物学检验程序和方法、掌握药品的微生物学检验程序和方法 二、实验内容二、实验内容 1、药物的药物的微生物限度检查（四）、药物的药物的微生物限度检查（四）1）将口服药物中的细菌分别接种：蛋白胨水培养基；）将口服药物中的细菌分别接种：蛋白胨水培养基；葡萄糖蛋白胨水培养
21、基；葡萄糖蛋白胨水培养基；枸橼酸盐（西蒙氏）培养基。枸橼酸盐（西蒙氏）培养基。同时接种产气杆菌于上述培养管做对照，以备进行同时接种产气杆菌于上述培养管做对照，以备进行IMViC试验。试验。2）取接种在普通琼脂斜面培养基上面的外用药物中细菌进行血浆凝固酶检测）取接种在普通琼脂斜面培养基上面的外用药物中细菌进行血浆凝固酶检测,依依 据据 其反应结果其反应结果,确定该菌的性质及名称。确定该菌的性质及名称。2、抗酸染色、抗酸染色 3、真菌培养物的观察、真菌培养物的观察-黑曲霉、木霉黑曲霉、木霉、青霉菌菌落，白色念珠菌假菌丝，、青霉菌菌落，白色念珠菌假菌丝，酵母菌菌落的观察。酵母菌菌落的观察。4、记录中
22、草药、抗生素抑菌试验结果、记录中草药、抗生素抑菌试验结果 5、观察鸡胚的结构、观察鸡胚的结构 实验四 药物的微生物限度检查（四）-试验结果试验结果 -试验试验 加试剂加试剂 培养基培养基 大肠埃希菌大肠埃希菌 产气杆菌产气杆菌 1 1 蛋白胨水蛋白胨水2管管 葡萄糖蛋白胨葡萄糖蛋白胨水水2管管 1 1 葡萄糖蛋白胨葡萄糖蛋白胨水水2管管 枸橼酸盐枸橼酸盐2管管 1 1 1 1-实验四实验四 药物的微生物限度检查（四）药物的微生物限度检查（四）病毒和细菌及其他病原微生物病毒和细菌及其他病原微生物 取接种在普通琼脂斜面培养基上面的外用药物中细菌进行血浆凝固酶检测取接种在普通琼脂斜面培养基上面的外用
23、药物中细菌进行血浆凝固酶检测,依依 据据 其反应结果其反应结果,确定该菌的性质及名称。确定该菌的性质及名称。实验四 药物的微生物限度检查（四）二.血浆凝固酶试验?原理：原理：非致病性葡萄球菌不产生血浆凝固酶而致非致病性葡萄球菌不产生血浆凝固酶而致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使含有枸橼病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使含有枸橼酸钠或肝素抗凝剂的兔或人等血浆发生凝固。酸钠或肝素抗凝剂的兔或人等血浆发生凝固。?方法：方法：取洁净玻片，用记号笔画两个圈并标号，其中一个滴加取洁净玻片，用记号笔画两个圈并标号，其中一个滴加1.生理盐水另一个滴加兔血浆。生理盐水另一个滴加兔血浆。2.接种环烧灼灭菌后挑取
24、金葡菌苔，接种环烧灼灭菌后挑取金葡菌苔，1/2在生理盐水中研匀在生理盐水中研匀混悬，另混悬，另1/2在兔血浆中研匀混悬，静止片刻，观察结在兔血浆中研匀混悬，静止片刻，观察结果。果。?结果：结果：凝集呈颗粒状判定为血浆凝固酶试验（凝集呈颗粒状判定为血浆凝固酶试验（+），），呈均匀混浊状不凝集判定为（呈均匀混浊状不凝集判定为（-）二.血浆凝固酶试验?原理：非致病性葡萄球菌不产生血浆凝固酶?方法：方法：1.取洁净玻片，用记号笔画两个圈并标号，其中取洁净玻片，用记号笔画两个圈并标号，其中一个滴加生理盐水另一个滴加兔血浆。一个滴加生理盐水另一个滴加兔血浆。2.接种环烧灼灭菌后挑取金葡菌苔，接种环烧灼灭菌
25、后挑取金葡菌苔，1/2在生理盐在生理盐水中研匀混悬，另水中研匀混悬，另1/2在兔血浆中研匀混悬，静在兔血浆中研匀混悬，静止片刻，观察结果。止片刻，观察结果。?结果结果：凝集呈颗粒状判定为血浆凝固酶试验（凝集呈颗粒状判定为血浆凝固酶试验（+），），呈均匀混浊状不凝集判定为（呈均匀混浊状不凝集判定为（-）?方法：1.取洁净玻片，用记号笔画两个圈并标号，其中一个滴抗酸染色步骤抗酸染色步骤 i.ii.iii.iv.制片（涂片、干燥、固定）；制片（涂片、干燥、固定）；石炭酸复红初染石炭酸复红初染（加温、加温、盖滤纸片）5min-水洗；水洗；3盐酸酒精脱色盐酸酒精脱色（15S,15S,水洗）；水洗）；美兰
26、复染（美兰复染（1min，水洗）-滤纸吸干滤纸吸干 v.镜检。镜检。抗酸染色步骤 i.i i.i i i.i v.制片（涂片、干燥、固定结核杆菌 结核杆菌 抗生素体外抑菌试验（二）记录纸片法结果记录纸片法结果 测量抑菌环直径测量抑菌环直径 抗生素体外抑菌试验（二）记录纸片法结果 测量抑病毒的分离培养鸡胚接种 病毒的培养方法：病毒的培养方法：?动物接种?鸡胚培养?组织细胞培养 病毒的分离培养鸡胚接种 病毒的培养方法：?动物接种?病毒的分离培养鸡胚接种 病毒的分离培养鸡胚接种 病毒的分离培养鸡胚培养 病毒名称病毒名称 痘类病毒痘类病毒 流感、副流感、腮腺流感、副流感、腮腺炎病毒炎病毒 接种部位接种
27、部位 绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜 尿囊尿囊 鸡胚胚龄（天）鸡胚胚龄（天）10101313 9 9 1111 嗜神经病毒嗜神经病毒 初次分离标本初次分离标本 卵黄囊卵黄囊 羊膜腔羊膜腔 5 58 8 10101212 病毒的分离培养鸡胚培养 病毒名称 痘类病毒 流感、副流感、实验五实验五 药物的微生物限度检查（五）药物的微生物限度检查（五）一、目的要求一、目的要求 掌握药品的微生物学检验程序和方法掌握药品的微生物学检验程序和方法 二、实验内容二、实验内容 以生化反应（以生化反应（IMViC）检测口服药中细菌的性质。）检测口服药中细菌的性质。实验五 药物的微生物限度检查（五）一、目的要求 掌握药品-试验
28、结果试验结果 -试验试验 加试剂加试剂 培养基培养基 大肠埃希菌大肠埃希菌 吲哚吲哚(I)甲基红甲基红(M)产气杆菌产气杆菌 无色变无色变 阴性（阴性（-）黄色黄色 阴性（阴性（-）蛋白胨水蛋白胨水2管管 葡萄糖蛋白胨葡萄糖蛋白胨水水2管管 苯甲醛试剂苯甲醛试剂0.5ml(5滴滴)甲基红甲基红5滴滴 培氏乙培氏乙6滴滴萘酚试剂萘酚试剂6滴滴 红红 阳性（阳性（+）红色红色 阳性（阳性（+）VP 枸椽酸盐枸椽酸盐(C)葡萄糖蛋白胨葡萄糖蛋白胨水水2管管 枸橼酸盐枸橼酸盐2管管 无色变无色变 阴性（阴性（-）绿无色变绿无色变 阴性（阴性（-）红色红色 阳性（阳性（+）绿绿蓝色蓝色 阳性（阳性（+）
29、-IMViC结果?吸哚试验：取出后每管滴加柯氏试剂吸哚试验：取出后每管滴加柯氏试剂0.5ml，静止片刻，观察有无颜色，静止片刻，观察有无颜色改变。大肠埃希菌能够分解色氨酸产生吲哚，加入对二甲基氨基苯甲醛改变。大肠埃希菌能够分解色氨酸产生吲哚，加入对二甲基氨基苯甲醛后形成红色的玫瑰吲哚，则为阳性反应；产气杆菌不产生吲哚，添加试后形成红色的玫瑰吲哚，则为阳性反应；产气杆菌不产生吲哚，添加试剂后无颜色变化，为阴性反应。剂后无颜色变化，为阴性反应。?甲基红试验：取出后各管内滴加甲基红试剂数滴。大肠埃希菌分解葡萄甲基红试验：取出后各管内滴加甲基红试剂数滴。大肠埃希菌分解葡萄糖产酸较多，培养基的糖产酸较多
30、，培养基的pH值在值在4.5以下，加入甲基红试剂后呈红色反应，以下，加入甲基红试剂后呈红色反应，为阳性结果。产气杆菌分解葡萄糖产生的是乙酰甲基甲醇，酸类较少，为阳性结果。产气杆菌分解葡萄糖产生的是乙酰甲基甲醇，酸类较少，培养基内培养基内pH值较高，加入甲基红试剂后呈黄色反应是为阴性。值较高，加入甲基红试剂后呈黄色反应是为阴性。?V-P试验：葡萄糖蛋白胨水中滴加数滴培氏试剂。大肠埃希菌不产生试验：葡萄糖蛋白胨水中滴加数滴培氏试剂。大肠埃希菌不产生乙酰甲基甲醇，加入培氏试剂后无颜色反应，为乙酰甲基甲醇，加入培氏试剂后无颜色反应，为V-P试验阴性试验阴性；产气杆；产气杆菌产生的乙酰甲基甲醇能氧化成二
31、乙酰，并和培养基中的精氨酸的胍类菌产生的乙酰甲基甲醇能氧化成二乙酰，并和培养基中的精氨酸的胍类衍生物生成红色化合物。加入培氏试剂后促进反应呈红色为阳性。衍生物生成红色化合物。加入培氏试剂后促进反应呈红色为阳性。?枸橼酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验：枸橼酸盐琼脂斜面，：枸橼酸盐琼脂斜面，大肠埃希菌不能利用枸橼大肠埃希菌不能利用枸橼酸盐作碳源，故不生长，培养基仍为绿色。产气杆菌能够利用枸橼酸盐，酸盐作碳源，故不生长，培养基仍为绿色。产气杆菌能够利用枸橼酸盐，故生长良好，而使培养基变碱性。培养基中的指示剂溴麝香草酚蓝在故生长良好，而使培养基变碱性。培养基中的指示剂溴麝香草酚蓝在pH6.07.6时颜色由
32、黄时颜色由黄绿绿蓝蓝)由黄变蓝，故为阳性。由黄变蓝，故为阳性。I MV i C 结果?吸哚试验：取出后每管滴加柯氏试剂0.5 m吲哚试验吲哚试验 左：产气肠杆菌（左：产气肠杆菌（），右：大肠埃希菌（），右：大肠埃希菌（+）吲哚试验 左：产气肠杆菌（），右：大肠埃希菌（+）甲基红试验：甲基红试验：左：产气肠杆菌（左：产气肠杆菌（）；右：大肠埃希菌（）；右：大肠埃希菌（+）甲基红试验：左：产气肠杆菌（）；右：大肠埃希菌（+）VP试验试验 左：大肠埃希菌（左：大肠埃希菌（）；右：产气肠杆菌（）；右：产气肠杆菌（+）V P 试验 左：大肠埃希菌（）；右：产气肠杆菌（+）药品的微生物学检查P P T菌 丝 菌 丝 大分生孢子 小分生孢子 大分生孢子 小分生孢子 白念珠菌 白念珠菌 新型隐球菌 新型隐球菌 青霉 青霉 曲霉 烟曲霉 黄曲霉 曲霉 烟曲霉 黄曲霉
