1、血栓和止血一般检验血栓和止血一般检验第三章第三章 血栓与止血一般检验血栓与止血一般检验本章主要讲授的内容：见本章主要讲授的内容：见P73-98P73-981 1 止血、凝血和纤溶机制。止血、凝血和纤溶机制。2 2常用筛检试验：常用筛检试验：BTBT、CTCT、PLTPLT、PTPT、APTTAPTT、FIBFIB、TTTT、FDPFDP、DDDD。3 3 临床应用。临床应用。4 4血栓与止血分析仪简介。血栓与止血分析仪简介。血栓和止血一般检验2一一 正常止血机制正常止血机制正常止血主要依赖三个方面正常止血主要依赖三个方面1.血管壁作用血管壁作用2.血小板作用血小板作用3.血液凝固作用血液凝固作
2、用血栓和止血一般检验3二二 正常凝血机制正常凝血机制1凝血因子及其特性凝血因子及其特性凝血因子：凝血因子：I-，原编号为原编号为是是V的激活状态，故只有的激活状态，故只有12个。个。前前4个凝血因子分别称为：个凝血因子分别称为：纤维蛋白原纤维蛋白原(FI)、凝血酶原凝血酶原(F)、组织因子组织因子(TF)、钙离子钙离子(Ca2+)。激活后的凝血因子激活后的凝血因子用用a来表示，如来表示，如Fa。未编号而参与凝血的蛋白：未编号而参与凝血的蛋白：激肽释放酶原激肽释放酶原(PK)、高分子量激肽原高分子量激肽原(HMWK)。血栓和止血一般检验4传统瀑布式凝血过程修正传统瀑布式凝血过程修正 传统的瀑布式
3、凝血过程并不能反映真正的体内止血过程，传统的瀑布式凝血过程并不能反映真正的体内止血过程，过去的内源凝血仅是过去的内源凝血仅是在某些特定的试管内进行的在某些特定的试管内进行的。例如例如在活体内，在活体内，缺乏因子缺乏因子一般不出血，但一般不出血，但APTT延长。延长。因子因子、V促进血液凝固的加速因子，并不起酶的作用。促进血液凝固的加速因子，并不起酶的作用。根据近年来研究，应将这种凝血过程予以修正根据近年来研究，应将这种凝血过程予以修正(见图见图)。血栓和止血一般检验5传统瀑布式凝血过程修正图传统瀑布式凝血过程修正图血栓和止血一般检验6传统瀑布式凝血过程修正传统瀑布式凝血过程修正 凝血的启动过程
4、是血管壁受损后，凝血的启动过程是血管壁受损后，TFTF释出或表达，释出或表达，立即与立即与形成复合物（形成复合物（Fa-TFFa-TF），将），将IXIX激活为激活为IXaIXa，启动启动FaFa内源性凝血途径继续维持凝血，内源凝血内源性凝血途径继续维持凝血，内源凝血 所需时间较长所需时间较长(以分计以分计)。而组织因子途径抑制物。而组织因子途径抑制物(TFPl)(TFPl)对对Fa-TFFa-TF及及FXaFXa起灭活作用，故凝血过程的起灭活作用，故凝血过程的 开始阶段，只生成少量凝血酶，后者通过激活开始阶段，只生成少量凝血酶，后者通过激活 血小板、因子血小板、因子、V V、，使凝血过程放大
5、和加快。使凝血过程放大和加快。另外另外Mg2+Mg2+参与了凝血过程。参与了凝血过程。血栓和止血一般检验7三三 正常纤溶机制正常纤溶机制1 1 纤溶系统组成及其特性纤溶系统组成及其特性2 2纤溶酶原激活途径纤溶酶原激活途径3 3纤维蛋白纤维蛋白(原原)降解产物降解产物血栓和止血一般检验8纤溶过程图纤溶过程图血管血管纤溶酶原纤溶酶原FDPFDP血栓和止血一般检验9纤溶酶原激活途径纤溶酶原激活途径内激活途径：内激活途径：内源性凝血途径内源性凝血途径FaFa使使PKPK转变为转变为K K，K K使使Scu-PAScu-PA 转变成转变成tcu-PAtcu-PA，tcu-PAtcu-PA使使PLGPL
6、G激活为激活为PLPL。外激活途径：外激活途径：血管内皮细胞中的血管内皮细胞中的t-PAt-PA裂解裂解PLGPLG形成形成PLPL。外源激活途径：外源激活途径：体外溶栓药物如体外溶栓药物如SKSK和和UKUK，使，使PLGPLG激活成激活成PLPL。血栓和止血一般检验10纤维蛋白纤维蛋白(原原)降解产物降解产物 纤维蛋白原降解：纤维蛋白原降解：其降解产物统称为纤维蛋白原降解产物其降解产物统称为纤维蛋白原降解产物(FgDPFgDP)。交联纤维蛋白降解：交联纤维蛋白降解：除降解出碎片除降解出碎片X X、Y Y、D D和和E E外，还生成外，还生成D-D-二聚体等。二聚体等。这些碎片及多聚体统称为
7、纤维蛋白降解产物这些碎片及多聚体统称为纤维蛋白降解产物(FbDPFbDP)。FgDPFgDP和和FbDPFbDP统称为纤维蛋白统称为纤维蛋白(原原)降解产物降解产物(FDP)(FDP)。FDPFDP具有阻止纤维蛋白单体交联和聚合、竞争凝血酶具有阻止纤维蛋白单体交联和聚合、竞争凝血酶 的抗凝作用及抑制血小板聚集的作用。的抗凝作用及抑制血小板聚集的作用。血栓和止血一般检验11第二节第二节 常用筛检试验常用筛检试验出血和血栓性疾病相关的常用筛检试验：出血和血栓性疾病相关的常用筛检试验：1.1.出血时间出血时间(BT)(BT)、2.2.凝血时间凝血时间(CT)(CT)、3.3.血小板计数血小板计数(P
8、LT(PLT或或BPC)BPC)、4.4.凝血酶原时间凝血酶原时间(PPT(PPT或或PT)PT)、5.5.活化部分凝血活酶时间活化部分凝血活酶时间(APTT)(APTT)、6.6.凝血酶时间凝血酶时间(TT)(TT)、7.7.纤维蛋白原（纤维蛋白原（FIBFIB）8.8.纤维蛋白纤维蛋白(原原)降解产物降解产物(FDP(FDP）9.9.D-D-二聚体二聚体(D-dime(D-dime，DD)DD)血栓和止血一般检验123 血小板计数血小板计数 检测原理：检测原理：1 1 目视显微镜计数法：目视显微镜计数法：普通光镜直接计数法普通光镜直接计数法相差显微镜直接计数相差显微镜直接计数2 2 血液分
9、析仪法：血液分析仪法：电阻抗法电阻抗法激光流式细胞术法激光流式细胞术法综合电学和激光流式细胞术法综合电学和激光流式细胞术法血栓和止血一般检验133 血小板计数血小板计数 方法学评价：方法学评价：1 1 普通光镜直接计数法：普通光镜直接计数法：人工操作干扰因素多、重复性差，介绍人工操作干扰因素多、重复性差，介绍2 2种方法：种方法：草酸铵稀释液法（常用）草酸铵稀释液法（常用）对红细胞破坏力强，血小板形态清楚。对红细胞破坏力强，血小板形态清楚。尿素稀释法：尿素稀释法：尿素易于分解，有时不能完全溶解红细胞，尿素易于分解，有时不能完全溶解红细胞，故识别血小板困难。故识别血小板困难。2 2 相差显微镜直
10、接计数法（参考方法）相差显微镜直接计数法（参考方法）3 3 血液分析仪法血液分析仪法 重复性好。重复性好。血栓和止血一般检验143 血小板计数血小板计数质量控制：避免血小板的激活和破坏，避免杂物污染。质量控制：避免血小板的激活和破坏，避免杂物污染。1 1 注意实验前中后各个环节：如采血、抗凝剂、温度等。注意实验前中后各个环节：如采血、抗凝剂、温度等。2 2 人工复查常用方法是：人工复查常用方法是：草酸铵法复查。草酸铵法复查。用同一份血标本制备血涂片。用同一份血标本制备血涂片。血栓和止血一般检验15人工复查常用方法人工复查常用方法1 1仪器法测定存在以下情况者需要复查：仪器法测定存在以下情况者需
11、要复查：仪器报警提示。仪器报警提示。PLTPLT直方图异常。直方图异常。MCVMCV80FL80FL（小红细胞等干扰）。小红细胞等干扰）。PLTPLT2020。2 2复查方法：复查方法：草酸铵液溶血直接计数法。草酸铵液溶血直接计数法。推片瑞氏染色：油镜下推片瑞氏染色：油镜下1 1个个PLTPLT，大概相当于大概相当于PLT 3PLT 310109 9L L。血栓和止血一般检验163 血小板计数血小板计数3 3 排除非技术因素的干扰排除非技术因素的干扰 血小板假性减低：血小板假性减低：血小板冷凝集、异常蛋白血症、巨血小板、血小板冷凝集、异常蛋白血症、巨血小板、血小板血小板 卫星现象、高脂血症、卫
12、星现象、高脂血症、EDTAEDTA诱导的血小板聚集。诱导的血小板聚集。假性血小板增高：假性血小板增高：白、红细胞碎片、小红细胞、冷球蛋白血症、白、红细胞碎片、小红细胞、冷球蛋白血症、疟疾等。疟疾等。正常血小板大小、形态之间变异较大。正常血小板大小、形态之间变异较大。血栓和止血一般检验173 血小板计数血小板计数 正常血小板具有异质性：正常血小板具有异质性：参考值参考值 ：（：（100100300300）10109 9L L临床意义：临床意义：1 1 生理性生理性 正常人血小板数随时间和生理状态变化：正常人血小板数随时间和生理状态变化：一天之内可增减一天之内可增减6 6-10-10，午后略高于早
13、晨；，午后略高于早晨；春季较冬季低；春季较冬季低；平原居民较高原居民低；平原居民较高原居民低；月经前减低，月经后增高；月经前减低，月经后增高；妊娠中晚期增高，分娩后即减低；妊娠中晚期增高，分娩后即减低；运动、饱餐后增高，休息后恢复；运动、饱餐后增高，休息后恢复；静脉血比毛细血管血高静脉血比毛细血管血高1010。血栓和止血一般检验183 血小板计数血小板计数 2 2 病理性病理性(1)(1)血小板减低：血小板减低：（20-5020-50）10109 9L L，可有轻度出血或手术后出血。，可有轻度出血或手术后出血。20 20 10109 9L L，可有较严重的出血；可有较严重的出血；5 5 101
14、09 9L L，常严重出血。常严重出血。血小板生成障碍：血小板生成障碍：如急性白血病、再生障碍性贫血。如急性白血病、再生障碍性贫血。血小板破坏过多：血小板破坏过多：如如ITPITP、脾功能亢进、系统性红斑狼疮。、脾功能亢进、系统性红斑狼疮。血小板消耗增多：如血小板消耗增多：如DICDIC、TTPTTP。血栓和止血一般检验193 血小板计数血小板计数(2)(2)血小板增多血小板增多(400400 10 109 9 L)L)：1 1）骨髓增生性疾病：）骨髓增生性疾病：慢性粒细胞白血病，真性红细胞增多症。慢性粒细胞白血病，真性红细胞增多症。2 2）原发性血小板增多症。）原发性血小板增多症。3 3）急
15、性大出血，急性溶血，急性化脓性感染。）急性大出血，急性溶血，急性化脓性感染。4 4）近期外科手术、尤其是脾切手术后患者。）近期外科手术、尤其是脾切手术后患者。5 5）其他疾病：）其他疾病：心脏病、肝硬化、慢性胰腺炎、烧伤、肾衰竭、低温。心脏病、肝硬化、慢性胰腺炎、烧伤、肾衰竭、低温。6 6）值得注意的是：在不明原因的血小板增高标本中，）值得注意的是：在不明原因的血小板增高标本中，约有约有5050来自恶性疾病患者。来自恶性疾病患者。血栓和止血一般检验20血小板与血小板与MPVMPV联合检测的意义联合检测的意义 血栓和止血一般检验214 PT(4 PT(凝血酶原时间凝血酶原时间)原理：在待测血浆中
16、加入试剂原理：在待测血浆中加入试剂(组织因子和钙离子组织因子和钙离子)，启动凝血，使凝血酶原转变成凝血酶，启动凝血，使凝血酶原转变成凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转变成纤维蛋白，凝血酶使纤维蛋白原转变成纤维蛋白，从而促使血浆凝固。记录从加入试剂到血浆从而促使血浆凝固。记录从加入试剂到血浆 开始凝固所需时间，即为血浆凝血酶原时间开始凝固所需时间，即为血浆凝血酶原时间(PT)(PT)。方法：倾斜试管法方法：倾斜试管法(手工法手工法)：血浆血浆100l+PT100l+PT试剂试剂200l200l倾斜试管倾斜试管凝固。凝固。血栓和止血一般检验22倾斜试管法倾斜试管法(手工法手工法)将待检血浆和试剂加入试管
17、中混匀，预温，将待检血浆和试剂加入试管中混匀，预温，然后加入氯化钙溶液，混匀并立即启动秒表，然后加入氯化钙溶液，混匀并立即启动秒表，不断轻轻小角度不断轻轻小角度(约约300)倾斜试管，直到试管内倾斜试管，直到试管内液体停止流动，按停秒表，记录时间。重复测定液体停止流动，按停秒表，记录时间。重复测定两次取平均值。每批实验同时测定正常对照血浆。两次取平均值。每批实验同时测定正常对照血浆。倾斜试管法是凝血因子活性检查的参考方法。倾斜试管法是凝血因子活性检查的参考方法。血栓和止血一般检验234 PT(4 PT(凝血酶原时间凝血酶原时间)质量控制：质量控制：1 标本采集和处理。标本采集和处理。2 组织凝
18、血活酶试剂质量。组织凝血活酶试剂质量。3 国际敏感指数（国际敏感指数（ISI）、国际标准化比值（）、国际标准化比值（INR）。）。4 PT测定的正常对照。测定的正常对照。5 PT的报告方式的报告方式。血栓和止血一般检验245 活化部分凝血活酶时间活化部分凝血活酶时间（APTTAPTT）测定）测定原理：原理：方法：方法：倾斜试管法倾斜试管法 待检血浆待检血浆100l+100l APTT试剂试剂 373373分钟，分钟，100l 0.025MCaCl2 凝固。凝固。血栓和止血一般检验255 活化部分凝血活酶时间活化部分凝血活酶时间（APTTAPTT）测定）测定 激活剂不同，对血浆中肝素、狼疮抗凝物
19、质激活剂不同，对血浆中肝素、狼疮抗凝物质及因子及因子、缺乏症的敏感性也不同。故需要缺乏症的敏感性也不同。故需要根据检测项目等选择不同的激活剂。见表根据检测项目等选择不同的激活剂。见表1。激活剂 对因子敏感性 对肝素敏感性 对狼疮抗凝血物敏感性 白陶土+硅藻土+鞣化酸+血栓和止血一般检验266 凝血酶时间（凝血酶时间（TT）测定）测定原理原理（凝血酶法）：（凝血酶法）：凝血酶加入离体血浆后，血浆的纤维蛋白原凝血酶加入离体血浆后，血浆的纤维蛋白原 转变成纤维蛋白，导致血浆凝固的时间。转变成纤维蛋白，导致血浆凝固的时间。方法方法：倾斜试管法：倾斜试管法 待检血浆待检血浆100l+100l试剂试剂(凝
20、血酶凝血酶)凝固。凝固。血栓和止血一般检验277 纤维蛋白原（纤维蛋白原（FIB）测定）测定 FIB(FIB(测定方法有十多种，现介绍测定方法有十多种，现介绍5 5种）种）1 1克劳斯克劳斯(ClaussClauss)法原理，即凝血酶法：法原理，即凝血酶法：在被检血浆中加入凝血酶，血浆即凝固，在被检血浆中加入凝血酶，血浆即凝固，其所需的时间长短其所需的时间长短与与FgFg含量的多少成负相关。含量的多少成负相关。被检血浆的被检血浆的FgFg实际含量可从国际标准实际含量可从国际标准品品FIBFIB 参比血浆测定的标准曲线中获得。参比血浆测定的标准曲线中获得。血栓和止血一般检验287 纤维蛋白原（纤
21、维蛋白原（FIB）测定）测定克劳斯克劳斯(Clauss)法法 优点：它是一种快速简便、特异性较好的功优点：它是一种快速简便、特异性较好的功能测定法，是最常用的可凝固法，也是美国推荐能测定法，是最常用的可凝固法，也是美国推荐常规实验室使用的方法。常规实验室使用的方法。缺点：试剂盒比较贵，且缺点：试剂盒比较贵，且Fib异质性、异质性、FDP、DD、肝素等抗凝物影响测定结果，使其结果偏、肝素等抗凝物影响测定结果，使其结果偏低。因此，有报道认为测定孕妇低。因此，有报道认为测定孕妇FIB时最好用时最好用PT换算法，尤其是妊高症者。换算法，尤其是妊高症者。血栓和止血一般检验297 纤维蛋白原（纤维蛋白原（
22、FIB）测定）测定2 2 免疫法免疫法 免疫火箭电泳法：免疫火箭电泳法：酶联免疫法：酶联免疫法：3 比浊法比浊法(热沉淀比浊法热沉淀比浊法)：4 化学法化学法(双缩脲法双缩脲法)：5 PT-der法法(PT演算法演算法)：当仪器法测定当仪器法测定PT完成时，完成时，Fib均变成纤维蛋均变成纤维蛋白，白，其形成的浊度与其形成的浊度与Fib含量成正比。因此无需加任含量成正比。因此无需加任何何试剂，即可由产生的浊度用终点法或速率法算出试剂，即可由产生的浊度用终点法或速率法算出Fib含量。该法简便、成本低。含量。该法简便、成本低。血栓和止血一般检验307 纤维蛋白原（纤维蛋白原（FIB）测定）测定方法
23、学评价：方法学评价：1Clauss法法 此法为功能检测，操作简单、结果可靠，此法为功能检测，操作简单、结果可靠，故被故被WHO推荐为测定推荐为测定Fg的参考方法。当的参考方法。当PT演算法演算法 结果可疑，则应用结果可疑，则应用Clauss法复核确定。法复核确定。2免疫法、比浊法、化学法操作较繁，均非免疫法、比浊法、化学法操作较繁，均非Fg功能检功能检 测法，故与生理性测法，故与生理性Fg活性不一定总是成平行关系。活性不一定总是成平行关系。血栓和止血一般检验317 纤维蛋白原（纤维蛋白原（FIB）测定）测定质量控制：质量控制：Clauss法参比血浆必须与检测标本同时操作测定，法参比血浆必须与检
24、测标本同时操作测定，以便核对结果；如标本中存在肝素、以便核对结果；如标本中存在肝素、FDP或罕见的异或罕见的异常常Fg，则，则Clauss法测定的法测定的Fg含量可假性减低，因此，含量可假性减低，因此，需用其他方法如需用其他方法如PT-der法核实。法核实。血栓和止血一般检验32筛检止凝血功能试验的小结筛检止凝血功能试验的小结 筛检止凝血功能最基本、常用的试验：筛检止凝血功能最基本、常用的试验：PT、APTT、FIB、TT、PLT、DD、FDP。止凝血功能试验质量控制十分重要：止凝血功能试验质量控制十分重要：实验结果会受到诸多因素干扰，常见的受检者状态，实验结果会受到诸多因素干扰，常见的受检者
25、状态，血小板聚集、标本采集、抗凝剂，检测试剂盒、血小板聚集、标本采集、抗凝剂，检测试剂盒、设备仪器、实验方法、操作者技术等，所以一定要设备仪器、实验方法、操作者技术等，所以一定要 严格按照操作规程操作，并熟悉结果的临床意义，严格按照操作规程操作，并熟悉结果的临床意义，注意与临床联系。注意与临床联系。血栓和止血一般检验33DDDD报告单报告单血栓和止血一般检验34PT4APT4A与与DDDD报告单报告单血栓和止血一般检验35PT4APT4A报告单报告单血栓和止血一般检验36问题问题1 1：关于：关于PT4APT4A 某一心绞痛病人，晚上急诊查某一心绞痛病人，晚上急诊查PT2APT2A结果：结果：
26、PT68.5S,INR6.7,FiB4.65g/LPT68.5S,INR6.7,FiB4.65g/L。第二天复查第二天复查PT4APT4A：PT19.5S,INR1.8,FiB4.70g/L,APTT 98.0S,TT21.5SPT19.5S,INR1.8,FiB4.70g/L,APTT 98.0S,TT21.5S。第三天复查第三天复查PT4APT4A：PT13.5S,INR 1.3,FiB5.80g/L,APTT 44.0S,TT13.7SPT13.5S,INR 1.3,FiB5.80g/L,APTT 44.0S,TT13.7S。问题：问题：1 1 为何第一次、第二次结果为何第一次、第二次结
27、果PTPT差别大？差别大？2 2 为何第三次结果与前二次结果差别大？为何第三次结果与前二次结果差别大？3 3 哪次哪次PTPT结果正确？结果正确？血栓和止血一般检验37问题问题2 2、3 3、4 42 2 为什么手术前为什么手术前APTTAPTT、PTPT、PLTPLT三项检查三项检查 可作为出血倾向的常用诊断指标？可作为出血倾向的常用诊断指标？3 3 产后出血的患者，你应该选择哪些常用产后出血的患者，你应该选择哪些常用 止凝血筛检试验以帮助诊断与治疗？止凝血筛检试验以帮助诊断与治疗？4 4 简述简述PTPT的检测原理及临床应用。的检测原理及临床应用。血栓和止血一般检验38第三节第三节 临床应
28、用临床应用出血性或血栓性疾病：出血性或血栓性疾病：诊断，诊断，鉴别诊断，鉴别诊断，病情观察，病情观察，治疗和治疗和(或药物或药物)监测。监测。血栓和止血一般检验39 患者手术前止凝血功能判断患者手术前止凝血功能判断主要依据：主要依据：主要根据患者的病史主要根据患者的病史(出血史和家族史出血史和家族史)。体格检查。体格检查。实验室检查实验室检查PLTPLT、APTT APTT、PTPT等。等。血栓和止血一般检验40卫生部（卫生部（20002000）412412号文件：号文件：出血时间、凝血时间检验方法操作规程的通知出血时间、凝血时间检验方法操作规程的通知 本通知的主要内容：本通知的主要内容：停止
29、使用停止使用BTBT测定项目的测定项目的DukeDuke法。法。停止使用停止使用CTCT测定玻片法和毛细管法。测定玻片法和毛细管法。停止使用一般外科手术前的常规出血时间检测。停止使用一般外科手术前的常规出血时间检测。手术前用手术前用APTTAPTT、PTPT、PLTPLT联合检测。联合检测。如临床有出血史时，测定器法进行如临床有出血史时，测定器法进行BTBT检测。检测。血栓和止血一般检验41PT4APT4A与与DDDD临床意义与临床应用临床意义与临床应用 PT PT临床意义临床意义1.1.延长：延长：(1)(1)外源凝血因子缺乏症和低纤维蛋外源凝血因子缺乏症和低纤维蛋 白原血症白原血症(、)。
30、；。；(2)DIC (2)DIC及原发性纤溶症。及原发性纤溶症。(3)(3)维生素维生素K K缺乏症。缺乏症。(4)(4)血中有抗凝物。血中有抗凝物。2.2.缩短：缩短：(1)(1)见于先天性见于先天性V V因子增多。因子增多。(2)(2)血栓前状态和血栓性疾病。血栓前状态和血栓性疾病。(3)(3)长期口服避孕药。长期口服避孕药。血栓和止血一般检验42PTPT临床应用临床应用PTPT临床应用：临床应用：(1)(1)术前凝血功能监测术前凝血功能监测(2)(2)口服抗疑剂监测首选口服抗疑剂监测首选PT(INR)PT(INR)(3)(3)用于外源凝血因子缺陷的检测用于外源凝血因子缺陷的检测(4)(4
31、)可作为肝脏合成蛋白质功能的检测可作为肝脏合成蛋白质功能的检测血栓和止血一般检验43APTTAPTT临床意义临床意义1.1.延长：延长：(1)(1)内源凝血因子缺乏如血友病等。内源凝血因子缺乏如血友病等。(2)(2)严重的共同途径因子缺乏。严重的共同途径因子缺乏。(3)(3)肝素抗凝治疗。肝素抗凝治疗。(4)(4)低纤维蛋白原血症，低纤维蛋白原血症，吸收不良综合症等，吸收不良综合症等，(5)DIC (5)DIC，原发性纤溶，血中存在，原发性纤溶，血中存在 大量的大量的FDPFDP，有抗凝物质等。，有抗凝物质等。2.2.缩短：缩短：(1)(1)高凝状态。高凝状态。(2)(2)血栓栓塞性疾病。血栓
32、栓塞性疾病。(3)(3)促凝物质进入血中。促凝物质进入血中。血栓和止血一般检验44APTTAPTT临床应用临床应用 APTT APTT临床应用：临床应用：(1)(1)术前凝血功能监查。术前凝血功能监查。(2)(2)监测肝素用量的良好指标。监测肝素用量的良好指标。(3)(3)是凝血时间替代指标。是凝血时间替代指标。(4)(4)用于内源凝血因子缺陷的检测。用于内源凝血因子缺陷的检测。血栓和止血一般检验45FIBFIB临床意义临床意义 1.1.增高：增高：(1)(1)动脉样粥硬化。动脉样粥硬化。(2)(2)糖尿病。糖尿病。(3)(3)急性传染病，急性感染。急性传染病，急性感染。(4)(4)结缔组织病
33、。结缔组织病。(5)(5)急性肾炎和尿毒症。急性肾炎和尿毒症。(6)(6)妊娠晚期和妊高症。妊娠晚期和妊高症。(7)(7)放疗后，灼伤，休克，外科大手术后。放疗后，灼伤，休克，外科大手术后。(8)(8)恶性肿瘤等。恶性肿瘤等。血栓和止血一般检验46FIB FIB 临床意义、临床应用临床意义、临床应用FIBFIB临床意义：临床意义：2.2.减少：减少：(1)(1)DICDIC(2)(2)原发性纤溶。原发性纤溶。(3)(3)重症肝炎，肝硬化等。重症肝炎，肝硬化等。FIBFIB临床应用：临床应用：(1)(1)术前监查凝血功能。术前监查凝血功能。(2)(2)溶栓、抗凝治疗监测。溶栓、抗凝治疗监测。(3
34、)(3)预防血栓形成的独立因。预防血栓形成的独立因。(4)(4)肿瘤病人化疗后监测：肿瘤病人化疗后监测：FIBFIB下降易出血。下降易出血。血栓和止血一般检验47TTTT临床意义、临床意义、临床应用临床应用TT 临床意义：临床意义：1.延长：延长：(1)FIB水平或功能减低。水平或功能减低。(2)应用肝素或类肝素物质存在应用肝素或类肝素物质存在 （如（如SLE、肝炎、肾病等）、肝炎、肾病等）。(3)其它抗凝血酶类物质存在。其它抗凝血酶类物质存在。(4)见于见于FDP增多。增多。2.减少：减少：见于血液微凝及见于血液微凝及Ca+存在。存在。TT 临床应用：临床应用：(1)反应反应FIB功能的指标
35、。功能的指标。(2)可用于肝素用量的监测。可用于肝素用量的监测。血栓和止血一般检验48DD 临床意义、临床应用临床意义、临床应用 临床意义：临床意义：(1)继发性纤溶、继发性纤溶、DIC。(2)肺栓塞肺栓塞(PE或或PTE)、深静脉血栓、深静脉血栓(DVT)。(3)冠心病、肝病、慢性肾炎等不同程度的升高。冠心病、肝病、慢性肾炎等不同程度的升高。临床应用：临床应用：(1)诊断诊断DIC的重要依据。的重要依据。(2)筛查筛查PE，DVT的有效手段。的有效手段。(3)肝病、肾炎等诊断、治疗及疗效观察有一定的作用。肝病、肾炎等诊断、治疗及疗效观察有一定的作用。血栓和止血一般检验49血栓止血检测项目系列
36、组合血栓止血检测项目系列组合1 1 术前过筛检查：术前过筛检查：PLTPLT、PTPT、APTTAPTT、FIBFIB、TTTT。2 2 深静脉血栓和肺栓塞的诊断：深静脉血栓和肺栓塞的诊断：D-DD-D。3 3 口服抗凝剂监测：口服抗凝剂监测：PTPT（INRINR）。）。4 DIC4 DIC的诊断：的诊断：PLT PLT、PTPT、APTTAPTT、FIBFIB、DDDD。5 5 肝功能监测肝功能监测(肝脏合成蛋白质功能肝脏合成蛋白质功能)：PTPT。6 6 体内抗凝物质监测：体内抗凝物质监测：血栓和止血一般检验50 PT PT、APTTAPTT、FIBFIB、ATAT、LMWLMW。7 7
37、 血栓形成监测：血栓形成监测：PTPT、APTTAPTT、FIBFIB、DDDD、AT AT、PLGPLG、PIPI、PCPC、PSPS、APCRAPCR、VWFVWF。血栓和止血一般检验518 8 出血性疾病的诊断出血性疾病的诊断 先天及后天凝血因子缺乏过筛试验：先天及后天凝血因子缺乏过筛试验：PT，APTT，因子，因子，FIB。先天及后天纤溶系统亢进先天及后天纤溶系统亢进(如如PI缺乏，各种血缺乏，各种血 栓性疾病栓性疾病，DIC及严重肝病所致纤溶亢进及严重肝病所致纤溶亢进)：PLG，PI，D-D。病理性循环抗凝物质所致出血性疾病病理性循环抗凝物质所致出血性疾病(如因子如因子 抑制物，高肝
38、素血症等抑制物，高肝素血症等):APTT，PT，因子因子，TT，Heparin等。等。血栓和止血一般检验529 9 溶栓治疗的监测溶栓治疗的监测(UK(UK，SKSK等等)1 一级监测指标：一级监测指标：FIB、PT、APTT。（溶栓效果理想时，它们的期望值）：（溶栓效果理想时，它们的期望值）：FIB：溶栓：溶栓2小时后减到小时后减到2 gL，保持在保持在1.21.5gL为宜，为宜，不应低于不应低于0.5 1.0gL。PT：2030（1.52.0倍）倍）INR 2.03.0。APTT：延长：延长1.52.5倍，倍，100S可导致出血。可导致出血。2 二级监测指标：二级监测指标：PLG、PI、D
39、-D。血栓和止血一般检验534 4 血栓与止血分析仪简介（补充内容）血栓与止血分析仪简介（补充内容）血栓与止血分析仪（血栓与止血分析仪（凝血仪）凝血仪）生物学方法，即凝固法（源于手工法）。生物学方法，即凝固法（源于手工法）。生物化学方法。生物化学方法。免疫学方法。免疫学方法。血栓和止血一般检验54凝血仪工作原理：生物学方法凝血仪工作原理：生物学方法血栓和止血一般检验55凝血仪工作原理：生物学方法凝血仪工作原理：生物学方法（1 1）光学法（最常用）。）光学法（最常用）。原理：样品杯中的血浆在凝固过程中，纤维蛋白原理：样品杯中的血浆在凝固过程中，纤维蛋白原逐渐转变成纤维蛋白，其理学性状也会发生改变
40、，原逐渐转变成纤维蛋白，其理学性状也会发生改变，透射光和散射光的强度也会发生改变。凝血仪根据这种透射光和散射光的强度也会发生改变。凝血仪根据这种由于血液凝固而导致光强度的变化判断凝固终点的方法由于血液凝固而导致光强度的变化判断凝固终点的方法称之为光学法。称之为光学法。光学法又可分成两种：光学法又可分成两种：透射比浊法。透射比浊法。散射比浊法。散射比浊法。血栓和止血一般检验57凝血仪工作原理：生物学方法凝血仪工作原理：生物学方法1 1 散射比浊法：根据待检样品在凝固过程中散射比浊法：根据待检样品在凝固过程中散射光的变化来确定凝固终点的检测方法。散射光的变化来确定凝固终点的检测方法。原理：仪器在血
41、浆与试剂混合的瞬间，也就原理：仪器在血浆与试剂混合的瞬间，也就是散射光最弱的时刻，将散射光强度设为是散射光最弱的时刻，将散射光强度设为0 0，在，在血浆样品凝固完全以后，散射光最强的时刻，将血浆样品凝固完全以后，散射光最强的时刻，将散射光强度设为散射光强度设为100100。0 0100100之间的光强度之间的光强度变化被描成一条曲线，仪器可设定一个点变化被描成一条曲线，仪器可设定一个点(比如比如5050)所对应的时间为凝血时间。所对应的时间为凝血时间。血栓和止血一般检验58光学法测定时标准曲线的制定光学法测定时标准曲线的制定 在凝血实验测定中，为了推算某些物质在凝血实验测定中，为了推算某些物质
42、的浓度及百分比活性，首先要对已知浓度或的浓度及百分比活性，首先要对已知浓度或活性物质的凝血时间进行测定，并以浓度或活性物质的凝血时间进行测定，并以浓度或活性对应凝血时间来制定标准曲线。活性对应凝血时间来制定标准曲线。标准曲线的制定至少需要三个点，标准标准曲线的制定至少需要三个点，标准曲线的点越多，其准确性越高。曲线的点越多，其准确性越高。标准曲线制备好以后，仪器先检测待标准曲线制备好以后，仪器先检测待检样品的凝固时间，然后根据凝固时间从标检样品的凝固时间，然后根据凝固时间从标准曲线上求出活动度或浓度。准曲线上求出活动度或浓度。血栓和止血一般检验59凝血仪工作原理：生物学方法凝血仪工作原理：生物
43、学方法（2 2）电流法（钩方法）：）电流法（钩方法）：电流法是将待检样品作为电路的一部分。电流法是将待检样品作为电路的一部分。由于纤维蛋白具有导电性，利用电流的断与否由于纤维蛋白具有导电性，利用电流的断与否 来判断纤维蛋白的形成与否。即判断凝固终点。来判断纤维蛋白的形成与否。即判断凝固终点。血栓和止血一般检验60凝血仪工作原理：生物学方法凝血仪工作原理：生物学方法（3 3）粘度法（磁珠法）：）粘度法（磁珠法）：在待检样品中加入小铁珠，利用变化的磁在待检样品中加入小铁珠，利用变化的磁 场使小铁珠产生运动，随着血浆的凝固，血浆场使小铁珠产生运动，随着血浆的凝固，血浆 粘稠度增加，小铁珠的运动强度逐
44、渐减弱。仪粘稠度增加，小铁珠的运动强度逐渐减弱。仪 器根据小铁珠运动强度的变化确定凝固终点。器根据小铁珠运动强度的变化确定凝固终点。血栓和止血一般检验61凝血仪工作原理：生物化学方法凝血仪工作原理：生物化学方法血栓和止血一般检验62凝血仪工作原理：生物化学方法凝血仪工作原理：生物化学方法 生物化学方法原理：生物化学方法原理：人工合成含某种活性酶裂解位点的化合物，且人工合成含某种活性酶裂解位点的化合物，且化合物连接上产色物质，待检样品中含有活性化合物连接上产色物质，待检样品中含有活性酶或往样品中加入活性酶酶或往样品中加入活性酶(被检测物质含量同被检测物质含量同酶活性呈一定的数量关系酶活性呈一定的
45、数量关系)，故在检测过程中，故在检测过程中产色物质可被解离下来，使被检样品中出现颜产色物质可被解离下来，使被检样品中出现颜色变化，根据此颜色变化可推算出被检物质的色变化，根据此颜色变化可推算出被检物质的含量。产色物质一般选用连接对硝基苯胺含量。产色物质一般选用连接对硝基苯胺(PNA)(PNA)。游离游离PNAPNA呈黄色，其测定波长选用呈黄色，其测定波长选用405nm405nm。在这。在这一波长下，其他物质对光的吸收小于一波长下，其他物质对光的吸收小于PNAPNA对光吸对光吸收的收的1 1。血栓和止血一般检验63凝血仪工作原理：生物化学方法凝血仪工作原理：生物化学方法 生物化学方法优点是：生物
46、化学方法优点是：用酶学方法直接定量、测定结果准确、重用酶学方法直接定量、测定结果准确、重 复性好、便于自动化、便于标准化、所需复性好、便于自动化、便于标准化、所需 样品量小。样品量小。已人工合成的产色物质对止血与血栓过程已人工合成的产色物质对止血与血栓过程 中多种酶的活性进行检测：中多种酶的活性进行检测：如凝血酶、活化的如凝血酶、活化的X X因子、激肽释放酶、纤因子、激肽释放酶、纤 溶酶、尿激酶等溶酶、尿激酶等。血栓和止血一般检验64 凝血仪工作原理：生物化学方法凝血仪工作原理：生物化学方法生物化学方法检测的二种方法：生物化学方法检测的二种方法：动态法（准确性高）。动态法（准确性高）。终点法。
47、终点法。生物化学方法检测的三种类型的物质：生物化学方法检测的三种类型的物质：酶，如凝血酶、纤溶酶等。酶，如凝血酶、纤溶酶等。酶原，如蛋白酶原，如蛋白C C、纤溶酶原等。、纤溶酶原等。酶抑制物，如抗凝血酶、酶抑制物，如抗凝血酶、2-2-抗纤溶酶等。抗纤溶酶等。血栓和止血一般检验65凝血仪工作原理：免疫学方法凝血仪工作原理：免疫学方法血栓和止血一般检验66凝血仪工作原理：免疫学方法凝血仪工作原理：免疫学方法 免疫学方法：免疫学方法：免疫扩散法。免疫扩散法。免疫电泳。免疫电泳。酶联免疫吸附实验。酶联免疫吸附实验。免疫比浊法（凝血仪多采用该法）。分二种：免疫比浊法（凝血仪多采用该法）。分二种：直接浊度
48、分析；直接浊度分析；胶乳比浊分析（敏感性高），如胶乳比浊分析（敏感性高），如DDDD测定。测定。血栓和止血一般检验67凝血仪工作原理：免疫学方法凝血仪工作原理：免疫学方法 凝血仪测定抗原含量基于以下两原理：凝血仪测定抗原含量基于以下两原理：抗原量同抗原抗体凝集反应达到某一程抗原量同抗原抗体凝集反应达到某一程 度所需的时间之间存在一定的数量关系。度所需的时间之间存在一定的数量关系。抗原量同抗原抗体凝集反应速度之间存抗原量同抗原抗体凝集反应速度之间存 在一定的数量关系。在一定的数量关系。检测过程中，随着待检物质与其相应抗体检测过程中，随着待检物质与其相应抗体 结合，其复合物颗粒增多，光通过它时，结
49、合，其复合物颗粒增多，光通过它时，透过的光强度也就越来越弱，凝血仪自透过的光强度也就越来越弱，凝血仪自 动算出单位时间内吸光度的变化量，再动算出单位时间内吸光度的变化量，再 根据标准曲线推算出待测物质的含量。根据标准曲线推算出待测物质的含量。血栓和止血一般检验68参考文献参考文献 南京医科大学南京医科大学.血液一般检验血液一般检验.人民卫生人民卫生出版社出版社,2002 熊立凡熊立凡.临床检验基础临床检验基础.第第3版版.人民卫生出人民卫生出版社，版社，2002 朱立华朱立华.实验诊断学实验诊断学.北京医科大学出版北京医科大学出版社，社，2002血栓和止血一般检验69第三章第三章 血栓与止血一
50、般检验血栓与止血一般检验 重点重点1 1 凝血因子及其特性、凝血机制。凝血因子及其特性、凝血机制。2 2筛检试验：筛检试验：PLTPLT、PTPT、APTTAPTT、FIBFIB、TTTT、FDPFDP、DDDD。（原理、方法学评价、质量控制、临床意义与应用）原理、方法学评价、质量控制、临床意义与应用）血栓和止血一般检验70思考题思考题1 1 简述血小板的作用。简述血小板的作用。2 2 简述凝血过程的基本特征简述凝血过程的基本特征(8(8点基本特征点基本特征)。3 3 试述凝血过程及其机制试述凝血过程及其机制(分三个途径分三个途径)。4 4 试述主要凝血因子的检测原理及其临床试述主要凝血因子的
