1、会计学1核酸检测技术及质量控制核酸检测技术及质量控制第1页/共71页第2页/共71页第3页/共71页第4页/共71页第5页/共71页第6页/共71页第7页/共71页第8页/共71页第9页/共71页第10页/共71页第11页/共71页第12页/共71页第13页/共71页第14页/共71页第15页/共71页第16页/共71页第17页/共71页第18页/共71页第19页/共71页第20页/共71页第21页/共71页病毒颗粒DNARNAFQ-PCRRT-FQ PCR裂解荧光信号检测核酸提取荧光荧光PCR检测系统检测系统荧光定量PCR检测加样第22页/共71页内容1份样品的量DEPC H2O2.875u
2、lMaster MIX6.25ulRT-MIX0.125ul引物0.25ul探针0.25ul程序循环数温度反应时间115030min219515min3459515sec601min反应体系配置反应体系配置反应条件设置反应条件设置对照设置：对照设置：阴性对照：灭菌双蒸水代替标本阴性对照：灭菌双蒸水代替标本阳性对照：提取好的阳性核酸标本阳性对照：提取好的阳性核酸标本第23页/共71页 阳性标本扩增曲线 阴性标本扩增曲线第24页/共71页第25页/共71页第26页/共71页第27页/共71页第28页/共71页理想的理想的PCRPCR实验室分区设计模式实验室分区设计模式产物分析区产物分析区空气流向空
3、气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区n各区独立各区独立n注意风向注意风向n因地制宜因地制宜n方便工作方便工作“十六字口诀十六字口诀”PCR实验室设计的一般原则第29页/共71页第30页/共71页第31页/共71页第32页/共71页第33页/共71页第34页/共71页第35页/共71页第36页/共71页第37页/共71页第38页/共71页第39页/共71页第40页/共71页第41页/共71页第42页/共71页第43页/共71页44“盒中盒盒中盒”的结构的结构第
4、44页/共71页第45页/共71页与一般生物洁净室的区别与一般生物洁净室的区别1.1.工作目的工作目的BSLBSL实验室：实验室：保护工作人员和环境为主，也保护产品。保护工作人员和环境为主，也保护产品。安全是首要考虑因素。安全是首要考虑因素。生物洁净室：以保护产品（工作对象）为主。洁净是首生物洁净室：以保护产品（工作对象）为主。洁净是首要考虑因素要考虑因素2.2.污染物的种类和来源污染物的种类和来源BSL实验室：为目标微生物。内部产生。实验室：为目标微生物。内部产生。生物洁净室：粉尘（可能的热源）和微生物。外部进入生物洁净室：粉尘（可能的热源）和微生物。外部进入以及人的活动产生。以及人的活动产
5、生。第46页/共71页与一般生物洁净室的区别与一般生物洁净室的区别3.3.空气污染物处理方式空气污染物处理方式BSL实验室：平面布局和气流流向的作用实验室：平面布局和气流流向的作用,产生环节在一产生环节在一级屏障内进行个体防护。级屏障内进行个体防护。生物洁净室：主要通过进气净化生物洁净室：主要通过进气净化 减少活动。减少活动。4.4.洁洁、污概念BSL实验室：凡有目标微生物即视为污；实验室：凡有目标微生物即视为污；凡无目标微生物即视为洁；凡无目标微生物即视为洁；对各环节洁、污应仔细分析。对各环节洁、污应仔细分析。生物洁净室：粉尘、微生物（特别是超标者）和废弃物均生物洁净室：粉尘、微生物（特别是
6、超标者）和废弃物均视为污。视为污。第47页/共71页与一般生物洁净室的区别与一般生物洁净室的区别5.5.排气处理方式排气处理方式BSL实验室：不允许室内实验室：不允许室内 室外；室外；排气须净化，不许回风。排气须净化，不许回风。生物洁净室：一般室内生物洁净室：一般室内 室外；室外；排气可回风。排气可回风。6.6.实验室软、硬件的作用实验室软、硬件的作用BSL实验室：对工作人员保护，实验室软件应是决定性的实验室：对工作人员保护，实验室软件应是决定性的；对环境保护，实验室硬件应是决定性的；对环境保护，实验室硬件应是决定性的；生物洁净室：均很重要，但硬件设施作用比较大。生物洁净室：均很重要，但硬件设
7、施作用比较大。第48页/共71页与一般生物洁净室的区别与一般生物洁净室的区别7.7.压力递增方向压力递增方向BSL实验室：缓冲室准备室主实验室实验室：缓冲室准备室主实验室生物洁净室：缓冲室准备室主洁净室生物洁净室：缓冲室准备室主洁净室第49页/共71页 保护对象保护对象 操作区操作区 压力压力 气体排气体排 放方式放方式 设备设备 结构结构 设备设备 造价造价 生物安全柜生物安全柜 操作者、操作者、样品、环境样品、环境 负压负压 净化后排放净化后排放 复杂复杂 较贵较贵 洁净工作台洁净工作台 样品样品 正压正压 直接排放直接排放 简单简单 便宜便宜 生物安全柜与洁净工作台的区别生物安全柜与洁净
8、工作台的区别第50页/共71页第51页/共71页第52页/共71页第53页/共71页第54页/共71页第55页/共71页第56页/共71页第57页/共71页第58页/共71页Class II Class II 生物安全柜生物安全柜第59页/共71页 与其它操作区域相分离；与其它操作区域相分离；远离主要通道；远离主要通道；与气道有与气道有 一定距离；一定距离；与实验室入口保持一定距离。与实验室入口保持一定距离。生物安全柜摆放位置生物安全柜摆放位置第60页/共71页61第61页/共71页第62页/共71页第63页/共71页第64页/共71页第65页/共71页第66页/共71页第67页/共71页第6
9、8页/共71页与一般生物洁净室的区别与一般生物洁净室的区别1.1.工作目的工作目的BSLBSL实验室：实验室：保护工作人员和环境为主，也保护产品。保护工作人员和环境为主，也保护产品。安全是首要考虑因素。安全是首要考虑因素。生物洁净室：以保护产品（工作对象）为主。洁净是首生物洁净室：以保护产品（工作对象）为主。洁净是首要考虑因素要考虑因素2.2.污染物的种类和来源污染物的种类和来源BSL实验室：为目标微生物。内部产生。实验室：为目标微生物。内部产生。生物洁净室：粉尘（可能的热源）和微生物。外部进入生物洁净室：粉尘（可能的热源）和微生物。外部进入以及人的活动产生。以及人的活动产生。第69页/共71页第70页/共71页第71页/共71页
