1、专题九专题九现代生物科技专题现代生物科技专题核心核心1基因工程和基因工程和PCR技术技术 高考回眸高考回眸 栏 目 导 航核心突破核心突破 举题固法举题固法 高考回眸高考回眸 平平 胸腺嘧啶胸腺嘧啶(T)DNA连接连接 B A类菌落含有类菌落含有P0 C类菌落未转入质粒类菌落未转入质粒 乙、丙乙、丙 目的基因反向连接目的基因反向连接 Bcl和和Hind DNA连接连接 感受感受 四环素四环素 引物甲和引物丙引物甲和引物丙 都不能都不能 7 D 基因组基因组DNA 5 使使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连片段能定向插入表达载体，减少自连 8 13 pH为为8.5，缓冲液为，缓冲液为 50
2、mmolL1 TrisHCl 逆转录逆转录 cDNA 限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶 碱基互补配对碱基互补配对 变性变性 引物与模板引物与模板 GC含量高含量高 核心突破核心突破 能专一性识别能专一性识别 特定的核苷酸序列特定的核苷酸序列 磷酸二酯键断开磷酸二酯键断开 恢复恢复 磷酸二酯键磷酸二酯键 单个脱氧核苷酸单个脱氧核苷酸 形成新的磷酸二酯键形成新的磷酸二酯键 氢键氢键 黏性末端或平末端黏性末端或平末端 选择切割位点位于目的基因两端的限制酶选择切割位点位于目的基因两端的限制酶 限制酶一定不能破坏启动子、终止子和复制原点限制酶一定不能破坏启动子、终止子和复制原点 重组的质粒至少有一个标记
3、基因重组的质粒至少有一个标记基因 举题固法举题固法 农杆菌转化法农杆菌转化法 植物组织培养植物组织培养 感受态细胞感受态细胞 含有中间载体含有中间载体PrbcS*T的微生物能在含有卡那霉素的培养基中生长，而不能在的微生物能在含有卡那霉素的培养基中生长，而不能在含有氨苄青霉素的培养基中生长含有氨苄青霉素的培养基中生长(或含有中间载体或含有中间载体PrbcS*T的微生物能在含有氨苄青的微生物能在含有氨苄青霉素的培养基中生长，而不能在含有卡那霉素的培养基中生长霉素的培养基中生长，而不能在含有卡那霉素的培养基中生长)1.7 kb Sph、BamH、EcoR、Not、Xho、EcoR 设计包含设计包含N
4、co识别序列的引物，然后用识别序列的引物，然后用PCR技术扩增技术扩增 启动子启动子 茎尖茎尖(或根尖或根尖)农杆农杆 tms、tmr 染色体染色体DNA Sma、Hind 放射性同位素标记的放射性同位素标记的tms基因基因(DNARNA)杂交带杂交带 1 逆转录逆转录 便于设计引物便于设计引物 TTT(T)n 含核糖和尿嘧啶含核糖和尿嘧啶(U)(其他合理答案也行其他合理答案也行)UA 限制酶识别限制酶识别(冰冻的冰冻的)Ca2 启动子启动子 RNA聚合聚合 PCR 热稳定性热稳定性DNA聚合酶聚合酶(TaqDNA聚合酶或耐高温的聚合酶或耐高温的DNA聚合酶聚合酶)两两 15/16 三三 加热至加热至9095 Taq DNA聚合酶热稳定性高，而陆地棉聚合酶热稳定性高，而陆地棉DNA聚合酶在高温下会失活聚合酶在高温下会失活 Cla DNA连接连接 A D 目的基因或质粒自身连接，并确保目的基因和质粒的正向连接目的基因或质粒自身连接，并确保目的基因和质粒的正向连接 TDNA 目的基因目的基因(融合基因融合基因)、终止子、标记基因、终止子、标记基因(四环素抗性基因四环素抗性基因)四环素四环素 利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞 染色体的染色体的DNA 植物组织培养植物组织培养 抗原抗原抗体杂交抗体杂交 Thank you for watching
