扫描电镜样品制备技术教学课件.ppt

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1、扫描电子显微镜样品制备1 常规样品制备技术2 冷冻割断技术3 离子蚀刻技术4 铸型技术5 聚焦离子束技术 扫描电镜是研究样品的表面结构,要求样品的表面不变形、无污染、导电好、干燥好,结构清晰、无损坏。对于金属样品或较硬的组织来说样品处理比较简单。对于生物的软组织来说,就需要进行较为复杂的样品处理过程。下面主要介绍生物组织的样品制备技术。生物样品的常规处理方法1 取材2 表面结构的清洗、暴露3 组织固定4 组织脱水5 组织干燥6 组织表面导电处理7 组织干燥保存1 取材 取材速度要快,刀片要锋利,避免组织挤压,将要观察的区域用刀片切开暴露,组织块可大至404 010mm3,一般553mm3为宜。

2、2 清洗 对要观察的组织表面用缓冲液或生理盐水进行快速冲洗,除掉表面的粘液、组织液、血液等附着物,尽量将组织表面清洗干净,以利于电镜观察。对于载玻片上的培养细胞要注意冲洗力量,防止细胞脱落。对于难以冲掉的附着物,也可在固定后仔细冲洗。3 固定 将清洗好的组织迅速放入2%戊二醛固定液中2小时,0.1M磷酸缓冲液清洗5分钟,然后放入 1%的锇酸中后固定液1小时,0.1M磷酸缓冲液清洗5分钟。4 组织脱水 固定好的组织清洗后用酒精或丙酮进行梯度脱水,30%,50%,70%,90%,100%各15分钟。5 组织干燥临界点干燥法:中间液,液态二氧化碳,加压,升温,真空干燥。冰冻干燥法:乙醚,液氮冷冻,真空干燥。乙腈真空干燥法:脱水后的组织进行50%,70%,90%,100%乙腈置换,各15分钟,然后放入真空镀膜台的钟罩中真 空干燥6 导电处理真空蒸镀金属膜:离子镀膜(溅射镀膜):其他样品制备方法1 冷冻割断法:2 离子蚀刻法:3 铸型技术:4 离子聚焦束IFB冠状动脉内皮冠状动脉内皮耳蜗毛细胞

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