1、无菌工艺验证培养基模拟灌装试验国家大容量注射剂工程技术研究中心葛均友无菌工艺验证培养基模拟灌装试验国家大容量注射剂工程技术研究中123|42|Cont tents培养基灌装相关法规要求如何设计培养基灌装方案培养基灌装的评价与调查常见问题及FDA 483缺陷国家大容量注射剂工程技术研究中心1|4 2|C o n t t e n t s 培养基灌装相关法规要求常见问3|无菌药品基本理念无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法及规程进行|处理
2、或成品检验。国家大容量注射剂工程技术研究中心3|无菌药品基本理念国家大容量注射剂工程技术研究中心空调系统资质职责公用设施人员操作生产设备环境监控容器密封质量保证|质量控制质量受权人过程控制4|无菌特性组成清洁消毒质量保证更衣确认人员卫生文件体系物料质量无菌药品风险分析为基础国家大容量注射剂工程技术研究中心空调系统资质职责公用设施人员操作生产设备环境监控容器密封|5|培养基模拟灌装试验培养基模拟灌装试验-使用培养基作为药品的替代品（Placebo）进行无菌模拟生产，对无菌工艺进行验证。培养基灌装在某种意义上是一种挑战性试验，因为几乎在所有情况下，微生物在培养基中的繁殖和生长要比在实际产品中更容易
3、全面反映整个生产过程采用无菌工艺生产无菌产品的能力。|各国药品法规要求的基本内容。国家大容量注射剂工程技术研究中心5|培养基模拟灌装试验国家大容量注射剂工程技术研究中6|培养基模拟灌装试验相关法规要求|国家大容量注射剂工程技术研究中心6|培养基模拟灌装试验国家大容量注射剂工程技术研究中心7|ngUS FDA和EU GMP的要求FDA CGMP 无菌工艺药品指南An aseptic processing operatio on should be validated using amicrobiological growth mediu um in place of theproduct.Thi
4、s process simulati ion,also known as a mediafill.EU GMP Annex1 无菌药品的生产Validation of aseptic processin should include a processsimulation test using a nutrient t medium(media fill).国家大容量注射剂工程技术研究中心7|8|2019版GMP附录一：无菌制剂第四十七条 无菌生产工艺的验证应包括培养基模拟灌装试验。应根据产品的剂型以及培养基的选择性、澄清度、浓度和灭菌的适用性选择培养基。应尽可能模拟常规的无菌生产工艺，包括所
5、有对产品的无菌特性有影响的关键操作，及生产中可能出现的各种干预和最差条件。培养基模拟灌|装试验的首次验证，每班次应连续进行3次合格的试验。空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应重复进行培养基模拟灌装试验。培养基模拟灌装试验通常应按生产工艺每班次半年进行1次，每次至少一批。国家大容量注射剂工程技术研究中心8|2 0 1 9 版G MP 附录一：无菌制剂国家大容量注射剂9|2019版GMP附录一：无菌制剂培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。批量较小的产品，培养基灌装的数量应至少等于产品的批量。培养基模拟灌装试验的目标是零污染，应遵循以下要求：（1）灌装数量少于5000支时，不得检
6、出污染品；（2）灌装数量在5000至10000支时：有1支污染，需调查，可考虑重复试验；有2支污染，需调查后，进行再验证。（3)灌装数量超过10000支时：|有1支污染，需调查；有2支污染，需调查后，进行再验证。（4）发生任何微生物污染时，均应进行调查。国家大容量注射剂工程技术研究中心9|2 0 1 9 版G MP 附录一：无菌制剂国家大容量批量（瓶）3000允许染菌的数量（瓶）010|注册申报要求SFDA 化学药品注射剂基本技术要求（2019）培养基灌装验证是对设备、环境以及人员操作的一种系统验证,是判断无菌保证水平的关键手段工艺验证工作主要为培养基灌装验证试验。灌装的批数、批量与合格标准见
7、表1。|4750 63007760123国家大容量注射剂工程技术研究中心批量（瓶）3 0 0 0 允许染菌的数量（瓶）0 1 0|注册申fofo|11|相关指南文件PDA 关于培养基模拟灌装的技术报告 PDA Technical Repo ort No.28,ProcessSimulation Testing or Sterile BulkPharmaceutical Chem micals,RevisedSupplement 2019 PDA Technical Repo ort No.22 2019,ProcessSimulation Testing or Aseptically Fill
8、edProducts）国家大容量注射剂工程技术研究中心f o f o|1 1|相关指南文件国家大容量注射剂工程技12|培养基模拟灌装试验试验设计|国家大容量注射剂工程技术研究中心1 2|培养基模拟灌装试验国家大容量注射剂工程技术研究中心13|1、试验涵盖范围模拟必须包括产品成为无菌状态后的所有的无菌生产工艺步骤(如转运,灌装,装载/卸载,冻干,加塞,轧盖)模拟必须包括所有的无菌处理(如灌装线的设置,无菌连接,人员的干扰操作)培养基灌装研究不包括非无菌混合操作或产品的除菌工艺(如无菌过滤)培养基的制备和灭菌可以与产品的|国家大容量注射剂工程技术研究中心1 3|1、试验涵盖范围国家大容量注射剂工程
9、技术研究中14|2、多产品简化试验思路一条灌装线生产多个产品时，根据下列因素可被划分为不同的类型组灌装工艺不同的容器、密封方式由此选出两个或更多个在下列方面能涵盖所有其它相关产品的产品：容器的大小、开放或密封的设计灌装线的速度和干预|冻干,贮存容器的形式、转移的方式推荐使用类似于矩阵式试验设计，选择产品和工艺国家大容量注射剂工程技术研究中心1 4|2、多产品简化试验思路国家大容量注射剂工程技术15|模拟灌装实验的设计包装容器代表性选择：对于多规格、容器形状不同的灌装生产线，应对不同大小、形状的容器进行评估。多数可能选用最大敞口直径的容器和最低生产线速度；有时也会选择容易倒落的小型容器用来代表最
10、差情况，因可能需要更多的人工干预；当不能兼顾|时，应考虑选取有代表性的几种容器进行培养基模拟灌装试验。国家大容量注射剂工程技术研究中心1 5|模拟灌装实验的设计国家大容量注射剂工程技术研究材质与安装质量16|3、验证与确认稳定的产品质量性能确认及工艺验证（PQ/PV）可靠的设备性能运行确认（OQ）安装确认（IQ）|用户需求与设计设计确认（DQ）国家大容量注射剂工程技术研究中心材质与安装质量1 6|3、验证与确认性能确认及工艺验证（P17|验证开始前的准备工作设备设施确认HVAC及压空系统（或氮气）的确认设备的在线清洗和灭菌CIP P,SIP灭菌工艺验证湿热、干热灭菌工艺除菌过滤验证及空气过滤器
11、的完整性检测容器/胶塞密封完好性测试人员培训|无菌更衣确认环境监控符合要求国家大容量注射剂工程技术研究中心1 7|验证开始前的准备工作国家大容量注射剂工程技术研究18|4、模拟灌装实验的设计最差状况：高于或低于正常范围的条件限度，与正常生产条件相比最有可能造成工艺或生产失败的条件。宜尽可能模拟实际无菌生产过程，并包括产品加工中的“最差状况”。其设计应具有以下几方面的代表性：时间代表性|运行代表性 包装容器代表性国家大容量注射剂工程技术研究中心1 8|4、模拟灌装实验的设计国家大容量注射剂工程技术研19|模拟灌装实验的设计时间代表性：应选择正常工作阶段的不同的时间间隔，并考虑可能的中断、换班。培
12、养基灌装应持续足够长的时间，覆盖允许的工艺时间限度，并包括实际加工中最常发生的操作。操作代表性：根据实际生产中可能发生的动作或操作来设计培养基|中发生的、允许和禁止的干预事件的一览表，并在试验中进行模拟。国家大容量注射剂工程技术研究中心1 9|模拟灌装实验的设计国家大容量注射剂工程技术研究20|模拟灌装实验的设计运行代表性：应模拟包括“最差状况”的生产条件下进行培养基灌装。（如：最大干预次数、模拟的加卸料、可能的生产线停机的纠正、灌装针/管的调整和更换、人工轧盖、在线过滤器的更换以及所用人员的数量等）|国家大容量注射剂工程技术研究中心2 0|模拟灌装实验的设计国家大容量注射剂工程技术研究中心|
13、21|最差条件的设计（1）储存时间的验证灌装设备、部件、储罐、无菌物料、药液在实际灌封前能够放置的最长时间 1.灌封设备、灌封部件、储罐、无菌物料需要再灭菌（除菌）的时间间隔 用超出单项验证后确定的最长保存时间的设备部件、储罐、无菌物料参与培养基灌装试验 2.产品从无菌过滤到灌封加塞完成所需要的时间 无菌过滤后存放在中间储罐内的培养基模拟实际生产时产品的最大储存时间后再灌封产品在灌装后密封前的储存时间国家大容量注射剂工程技术研究中心|2 1|最差条件的设计（1）国家大容量注射剂工程22|最差条件的设计（2）最长灌装的持续时间最保守的设计：在培养基灌封试验中，模拟生产用时最长的批量所需要的时间，
14、其中包括正常的干扰时间（换班、设备维修）。（一般不采用）其他的设计：1 1.在生产完成后接着进行培养基灌封实验2.为了减少灌封瓶数，在每批试验开始、中间及结束前均灌装培养基，|任何干扰操作都应在培养基灌装时进行 在正常生产过程中所需的最长时间，包括可能发生的事件，人员的换班等国家大容量注射剂工程技术研究中心2 2|最差条件的设计（2）国家大容量注射剂工程技术|拟一次23|最差条件的设计（3）干预的设计所有干预都应是预先设定和进行记录正常的每班次都会发生（灌封线装配，称量调节，加胶塞/铝盖，处理倒瓶，中控取样，环境监测，手工补充轧盖等）非正常的非正常情况才会发生（设备故障，灌封线堵塞，轨道调节，
15、拆卸/替换破损的部件）SOP中应列出哪些干预是容许的，非正常的干预至少每年模干预的次数应该等于正常生产时发生的次数国家大容量注射剂工程技术研究中心|拟一次2 3|最差条件的设计（3）干预的次数应该等于正常|设备组装加入胶塞取出卡住的胶塞取走倒下的玻瓶手工装载到冻干机放置热电偶环境监测-放置和取走培养皿操作人员进出及更衣24|干预举例冷冻干燥工艺不同区域玻瓶破碎设备故障更换灌装针头灌装针头位置调整自动称量故障自动加塞故障国家大容量注射剂工程技术研究中心|设备组装放置热电偶环境监测-放置和取走培养皿2 4|干预举25|5、培养基灌装试验的频率新建的或生产工艺、设备、人员等重大变更后的无菌工艺生产线
16、，必须经至少连续三批合格的培养基灌装试验常规生产条件下的再验证频率，培养基模拟试验通常按生产工艺每班次半年进行1次，每次至少一批。生产线生产不同规格的无菌产品，则应考虑不同规格的产品的因素，培养基灌装试验的最差状况进行评估。|员，保证每年至少参加一次成功的培养基灌装试验。国家大容量注射剂工程技术研究中心2 5|5、培养基灌装试验的频率国家大容量注射剂工程技术研26|变更后培养基模拟灌装试验变更及其评估对产品或生产线的每一种变更，均应根据书面的变更控制系统进行评估。如果通过评估认为此项变更会影响到无菌生产工艺产品的无菌保证水平，则需要进行增补性培养基模拟灌装实验。比如，设施或设备的变化、生产线配
17、置的变动、人员重|环境监控异常和无菌检查结果阳性等。国家大容量注射剂工程技术研究中心2 6|变更后培养基模拟灌装试验国家大容量注射剂工程技术|培养温度27|6、实验用培养基和培养温度的选择培养基选择适应广谱微生物生长，包括细菌和真菌较好的澄明度，较小的粘度液体培养基易于除菌过滤常用培养基：3大豆胰蛋白肉汤（TSB）厌氧培养基仅在特殊情况下使用（FTM）干粉工艺：具备与干粉产品流动性能相似的无菌TSB干粉或无菌安慰剂粉末（PEG,乳糖,甘露醇)20-35，目标值2.5，不少于14天；如选择两个温度，则每一温度下至少培养7天，从低温开始。国家大容量注射剂工程技术研究中心|培养温度2 7|6、实验用
18、培养基和培养温度的选择2 0-28|惰性替代粉末的选择惰性替代品选择要求：无活性、易灭菌 易溶解 对培养基促进生长作用无副作用 易灌装，流动性要好（培养基流动性较差）常用替代品 聚乙二醇Polyethylene glycol 系列(PEG 6000,PEG8000）,甘露醇Mannitol，乳糖Lactose等|事先需要伽马辐照灭菌（钴60，用量约1525kGy）应进行无菌性、抑菌性和溶解度的测试国家大容量注射剂工程技术研究中心2 8|惰性替代粉末的选择国家大容量注射剂工程技术研29|培养基的适应性检查培养基适应性检查应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查培养基灌装试验前或同时进行
19、。必须用药典要求的标准微生物或工厂特定微生物（分离自环境人员监测及无菌试验）来进行通常为枯草芽孢杆菌、白色念珠菌，菌液浓度控制约在100个菌/ml加入的菌液应小于100 CF FU/单位|生长良好，判该培养基的适应性检查符合规定国家大容量注射剂工程技术研究中心2 9|培养基的适应性检查国家大容量注射剂工程技术研究30|7、灌装体积与数量单位灌装体积选择的体积要使培养基能适当地接触容器内表面，并且适当翻转或旋转，接触到密封件的内表面。每只容器的灌装体积一般不少于总容积的1/3，但也要考虑保留25%至40%的顶空能确保肯能存在的微生物获得足够的氧气生长。对于厌氧灌装:用惰性气体代替氧气，并使之完全
20、充满容器灌封试验数量综合考虑统计学要求和实际生产批量。|5000瓶，则培养基灌封至少应为实际生产线的最大批次量。PIC(3000瓶)：如果正常生产的批次量低于3000瓶，则培养基灌封至少应为实际生产线的最大批次量。国家大容量注射剂工程技术研究中心3 0|7、灌装体积与数量国家大容量注射剂工程技术研究|31|8、培养基模拟灌装实验的阳性对照培养基阳性对照实验：随机选取已经完成14天培养的灌装培养基样品，按照药典要求 常用枯草芽孢杆菌、白色念珠球菌或工厂特定菌作为阳性菌 将每个菌种准备含100cfu u/0.1ml的菌液，每个菌种接种2支培养基样品，同时并平板计数（双份）对真菌在20-25C下培养
21、，对细菌在30-35 C下培养，每天检查，5天内需有生长迹象国家大容量注射剂工程技术研究中心|3 1|8、培养基模拟灌装实验的阳性对照国家大容量I.32|MP9、培养基灌封实验的合格标准FDA、EU GMP 和中国新版GM 无菌附录：灌封量10000瓶时，若有1瓶污染，需彻底调查；若有两瓶|国家大容量注射剂工程技术研究中心I.3 2|MP9、培养基灌封实验的合格标准灌封量 5 0 0污染瓶数01234595%置信限值333|培养基灌封实验的合格标准PIC及SFDA研发注册标准：在95 5%置信限时污染率低于0.1%。计算公式：污染率=(95%置信限值)/(灌封容器数)100%污染瓶数与95%置
22、信限值间的关系678910|4.74 6.3 7.75 9.15 10.51 11.84 13.15 14.43 15.7116.96国家大容量注射剂工程技术研究中心污染0 1 2 3 4 5 9 5%3 3 3|培养基灌封实验的合格标准菌空气破真空（不使用惰性气体），全压塞、轧盖1.2.3.4.1.2.3.34|10 0、举例-冻干工艺方式A：模拟灌装、装载/卸载过程，缩短放置时间容器内灌封好培养基，以半压塞状态装入冻干机冻干机内部分抽真空，在室温放置一定的时间，不进行冷冻。用无菌空气破真空（不使用惰性气体），全压塞、轧盖缺点:真空度不能过高，不能照成培养基沸腾。方式B：以经稀释的培养基模拟
23、冻干过程容器内灌封好经稀释的培养基，以半压塞状态装入冻干机模拟冻干过程，直到容器内的培养基大致达到正常浓度。用无|缺点：耗时长，需开发特殊的冻干程序，营养支持性不均一，影响微生物的存活力。国家大容量注射剂工程技术研究中心菌空气破真空（不使用惰性气体），全压塞、轧盖1.1.1 01.2.35|冻干工艺方式C：模拟灌装、装载/卸载过程，缩短放置时间，不抽真空或补充空气容器内灌封好培养基，以半压塞状态装入冻干机冻干机不抽真空或者边抽真空边补充无菌空气。在室温放置一定的时间，不进行冷冻。注意：用培养基完全模拟冻干工艺非常困难(如时间长、真空、低温等)应该首先识别有污染风险的活动，并加以模拟(如未完全密
24、封小瓶|小瓶必须不被冷冻注意确保培养基的需氧状态国家大容量注射剂工程技术研究中心1.3 5|冻干工艺容器内灌封好培养基，以半压塞状态装入冻|注意事项36|举例-无菌粉末分装工艺方法A在灌装线上手工或增加灌装设备，先灌装液体培养基，再分装无菌替代品粉末后压塞、轧盖。方法B在灌装线上手工或增加灌装设备，先分装无菌替代品粉末，再灌装液体培养基后压塞、轧盖。方法C先灌装干粉培养基，再手工或增加设备加入注射用水所用惰性剂或干粉培养基需事先经过辐射灭菌。常用替代品粉末有聚乙二醇、甘露醇、乳糖等。应对添加替代品的量和对培养基适应性的影响进行研究和评估。国家大容量注射剂工程技术研究中心|注意事项3 6|举例-
25、无菌粉末分装工艺所用惰性剂或干粉|37|举例-无菌原料药原料药生产工艺中常有结晶步骤，因结晶过程有相变产生，也使模拟过程存在困难。可用一种液体介质模拟结晶过程，让其流经除菌过滤器和所有管路加到结晶罐中。若结晶过程有加晶种的操作，模拟过程中也应有这样的操作，晶种也可用模拟介质代替。为使晶体粒度均匀，有些结晶过程需要降温，在模拟过程中一般不应降温，因在低温下抑制微生物生长。离心、洗涤和干燥环节一般采用常温，以免温度对微生物的影响。国家大容量注射剂工程技术研究中心|3 7|举例-无菌原料药国家大容量注射剂工程技术研究中心38|11、环境及人员监测环境和人员监测按照相应的规程和方案进行，应涵盖无菌工艺
26、各工序，频次数与正常生产一致。包括：空气粒子数沉降菌浮游菌表面微生物人员监测|国家大容量注射剂工程技术研究中心3 8|1 1、环境及人员监测国家大容量注射剂工程技术研39|12、其他建议要点模拟灌装全过程建议应进行录像，便于事后调查分析和原因查找，也有利于员工培训。如有可能，应有专人观察和记录操作人员的有意或无意的干预行为及时间。在试验设计时，有时还要考虑人员状态，如夜班人员的注意力往往不够集中。培养基灌封后可以进行生产，但要等培养基灌封合格后产品才能放行|样品或按照托盘应进行编号，以便于调查和追溯国家大容量注射剂工程技术研究中心3 9|1 2、其他国家大容量注射剂工程技术研究中心40|培养基
27、模拟灌装试验结果分析与调查|国家大容量注射剂工程技术研究中心4 0|培养基模拟灌装试验国家大容量注射剂工程技术研究中心41|培养后检查目检培养基是否浑浊，是否有微生物生长要由经过培训、并且有资质能够发觉微生物生长迹象的人员进行检查如果在两个温度下培养时，必须在温度切换时进行中间判读可疑单位立即交给质量控制的微生物人员，进行进|一步分离培养和鉴定。根据染菌单位数，判断是否达到验证接受标准国家大容量注射剂工程技术研究中心4 1|培养后检查国家大容量注射剂工程技术研究中心污染 率|42|灌装污染曲线图 1污染可能来源于液体培养基(如与培养基贮罐非无菌连接，在循环管路中受到污染，微生物持续繁殖)。在灌
28、装结束时，应注意保持培养基贮罐处于无菌密闭状态，在储罐内取样测试，可以核实这样的假设。灌装过程(时间或灌装数量)国家大容量注射剂工程技术研究中心污染 率|4 2|灌装污染曲线图 1 菌密闭状态，在储罐内取样污染率|43|灌装污染曲线图 2表明污染仅发生在试验初期，可能污染来自起始的生产设备中（胶塞容器/轨道,计量泵/针头)，在灌装过程中污染被部分或全部“清洗掉”。灌装过程(时间或灌装数量)国家大容量注射剂工程技术研究中心污染率|4 3|灌装污染曲线图 2 灌装过程中污染被部分或全染率 污|灌装过程(时间或灌装数量)44|灌装污染曲线图 3出现一个尖峰（在短时段的一些产品被污染）可能与在灌装过程
29、中不正确操作或干预导致的污染有关。很关键的是必须知道被污染产品灌装的准确时间，以及当时实施的干预措施（灌装操作过程的录像是非常有用的），这样会比较容易调查到原因。国家大容量注射剂工程技术研究中心染率 污|4 4|灌装污染曲线图 3实施的干预措施（灌装率 污染灌装过程(时间或灌装数量)45|灌装污染曲线图 4同样可能是某个如果错误的干预措施所造成的，不同的是该污染影响到液体的管路/回路时（如培养基贮罐的变化，泵或针的|替换），导致微生物持续繁殖。国家大容量注射剂工程技术研究中心率 污染灌装过程(时间或灌装数量)4 5|灌装污染曲线图 污染率|灌装过程(时间或灌装数量)46|灌装污染曲线图 5非常
30、不幸的是，这种现象是最常出现的，也是最难调查的。如果这种现象在多次试验中反复出现，可能说明这个工艺存在不确定因素，需要采取根本的措施（如 更衣/着装、消毒剂和气流模式的改变)国家大容量注射剂工程技术研究中心污染率|4 6|灌装污染曲线图 5定因素，需要采取根本的47|失败调查流程|国家大容量注射剂工程技术研究中心4 7|失败调查流程国家大容量注射剂工程技术研究中心 人员样 表面样 环境空气样2.对培养基污染的评估 培养条件 对污染培养基的菌种必须进行鉴定 确定培养基污|染可能发生的时间3 3.惰性粉末无菌测试的评估48|培养基灌装失败调查 11.生产环境的监控数据评估 4.对气体取样结果的评估
31、 压缩空气 氮气等5.对水的微生物的评估 纯水 WFI6 6.对培养基评估 培养基的配制和消毒记录 培养基预培养的条件 培养基预培养的结果中国家大容量注射剂工程技术研究 48 心 人员样4 8|培养基灌装失败调查 1 压缩空1.粒子监控评估粒子测试监控情况层流风速报警记录烟雾测试历史的监控情况和趋势2.清洁和消毒评估 设备的清洁|消毒3.消毒剂的配制检查 来源或配制比例记录 效期及效力49|培养基灌装失败调查 24 4.人员的评估灌装间最多的人数操作人员连续工作时间其它人员更衣情况手消毒及污染可能中5 5.干预操作的评估 频次，是否有非预期干预 危险的程度 污染的样品与干预的关联国家大容量注射
32、剂工程技术研究 49 心1.粒子监控评估 粒子测试监控情况2.清洁和消毒评估50|培养基灌装失败调查 3设备的评估 灭菌柜 灭菌装载情况，灭菌程序和记录等 最近的穿透试验，泄漏试验和干燥试验的结果 隧道烘箱，洗瓶机等 运行状态，参数是否正确 隧道烘箱各段层流压差是否正确 灌装设备的|状态 设备是否存在偏差和非计划干预 过滤器完整性测试评估 产品和空气过滤器完整性测试的结果中国家大容量注射剂工程技术研究 50 心5 0|培养基灌装失败调查 3 中国家大容量注射剂工程技51|培养基灌装失败后续措施调查结论与风险评估培养基灌装实验结果有效暂停生产，直至确定污染来源并采取有效的纠偏措施。对培养基灌封实
33、验后和此前所生产的产品，进行风险评估培养基灌装实验结果无效，重新进行培养基模拟灌装实验无菌灌装区的物理条件不满足要求|后续措施根据调查情况，采取纠偏措施后，进行一批或多批的培养基模拟灌装试验。国家大容量注射剂工程技术研究中心5 1|培养基灌装失败后续措施国家大容量注射剂工程52|要点提示：任何失败的样品都应单独进行分离培养和鉴定，因为可能不只有一个污染源。人员与环境等监控的微生物也应进行分离鉴定，并与污染菌相比较。避免试验室引入新的污染，导致误判|国家大容量注射剂工程技术研究中心5 2|要点提示：国家大容量注射剂工程技术研究中心53|培养基模拟灌装试验常见问题及缺陷|国家大容量注射剂工程技术研
34、究中心5 3|培养基模拟灌装试验国家大容量注射剂工程技术研究中心|54|常见问题如何判断哪些灌装样品不需要进行培养？破损，影响到密封性的样品完整性测试（泄漏测试）失败的样品文件中明确规定予以丢弃的中控测试样品设备自动剔除的样品文件中明确规定，每次干扰后应予手工剔除的样品（规定应详细、明确，并需证明其可操作性和稳定可信性）。剔除的样品应进行记录注明丢弃原因国家大容量注射剂工程技术研究中心|5 4|常见问题国家大容量注射剂工程技术研究中心55|常见问题是否需要厌氧工艺的模拟灌装实验？如果工艺中存在冲氮气等惰性气体操作时如果在环境监测样品或无菌试验中检出厌氧菌有公司认为，即使常规无菌工艺，也应定期使
35、用硫乙醇酸盐培养基进行厌氧工艺模拟实验，或在模拟过程中进行培养基的切换。培养基灌装试验中的样品是否需要在培养过程中进行|不需要。培养基灌装的样品应在开始培养前进行操作，使培养基充分接触到内部各个表面，开始培养后不应再进行反转等干扰。国家大容量注射剂工程技术研究中心5 5|常见问题国家大容量注射剂工程技术研究中心56|常见问题如何对培养基灌装试验中的干预进行设计？考虑到最差状况涵盖整个生产周期，包括换班、连续生产等所有干预应经预先批准和文件化，干预描述、发生时间、频率、持续时间、受影响的瓶数等常规干预每次培养基灌装都要模拟，非常规干预可每年一次。培养基灌装试验是否要模拟所有生产过程？是否可以分段
36、进行模拟试验？|菌过滤以后。可以，比如冻干工艺，可以把无菌灌装和冻干模拟分开；粉针工艺中可把加注培养基与粉剂分装分开。但都需要有明确方案和判断标准。国家大容量注射剂工程技术研究中心5 6|常见问题国家大容量注射剂工程技术研究中心|57|常见问题什么情况下，可以认为培养基灌装试验无效？阳性对照失败工艺过程中在无菌操作区发生重大偏差，如停电，高效过滤器损坏等在培养基灌装试验中，是否必须进行录像？录像的保存期需要多长？不是必需的，录像仅是一种可选的辅助调查和培训手段。如果采用了录像措施，也仅作为公司内部的资料（如同内部审计报告），不必向检查员出示。公司应有文件规定，什么情况下要进行录像，录像的储存时
37、间等国家大容量注射剂工程技术研究中心|5 7|常见问题国家大容量注射剂工程技术研究中心58|Warning LetterYour firm failed to design and perform an adequateaseptic process simulation(i.e.,media fill)basedupon the same controls used for routineproduction.We note that t the(b)(4)wasobserved(b)(4)during ac ctual production.However,this interventio
38、n was per rformed only once duringthe media fill in 2009.公司的培养|基灌装验证未根据日常生产的控制进行设计和完成，如在实际生产中观察到的一些干预操作国家大容量注射剂工程技术研究中心5 8|Wa r n i n g L e t t e r 国家大容量注射剂工th59|Warning LetterThe written procedur res related to theproduction simulations “media fills”-conducted to validate e your capability toasepti
39、cally produce s small volume parenteral(SVP)were found to be inadequate.The mediafills for this line did not represent actualoperations used in he aseptic production ofampoules and vials.培养基灌|装没有模拟实际的生产过程。国家大容量注射剂工程技术研究中心t h 5 9|Wa r n i n g L e t t e r 国家大容量注射剂工60|Warning Letter-A routine productio
40、n of a(b)(4)Injection vialslot would take approximately(b)(4)hours to befilled.Your written pro ocedures for routineproduction require tha at an intervention takeplace every(b)(4)minu utes for fill-weightverification measurements.SOP规定每几分钟就要对装量进行测试，但是模拟|国家大容量注射剂工程技术研究中心6 0|Wa r n i n g L e t t e r 国
41、家大容量注射剂工61|Warning Letter The process simulatio ons(media fill)do notrepresent actual production operations for yoursterile API.The proces ss simulation performedby your firm in July 20 009 failed to includesimulation of the routine interventionsperformed in a typical l campaign of 13 batches.培养基灌装验
42、证没有反应实际无菌API的生产过程。|常干预的模拟。国家大容量注射剂工程技术研究中心6 1|Wa r n i n g L e t t e r 国家大容量注射剂工|溶液。62|Warning Letter Placebo mediums should be evaluated for theirability to support growth.Their placebo used in theprocess simulation is sod dium phosphate in differentforms(solution and anhy ydrous)and sodium chlorid
43、esolution.培养基灌装所用的介质，没有评估其对微生物的抑菌影响。培养基灌装所用的材料是磷酸钠和次氯酸钠的国家大容量注射剂工程技术研究中心|溶液。6 2|Wa r n i n g L e t t e r 国家大容量注63|Warning Letter Placebo mediums should b be evaluated for theirinhibitory effect on microor rganisms.Your responsedoes not indicate that your firm uses beta-lactamaseto inhibit the effect
44、 of antib biotic residue in theproduction line during proc cess simulation.没有考虑可能存在的头孢残留对培养基中微生物的影响|国家大容量注射剂工程技术研究中心6 3|Wa r n i n g L e t t e r 国家大容量注射剂工|影响。64|Warning Letter Gases used during proc cess simulation should beevaluated for their inhib bitory effect onmicroorganisms.Your response states that thenitrogen used in the pro ocess simulation is removedby the test membrane d during filtration.没有评估模拟过程中使用的气体（氮气）对微生物国家大容量注射剂工程技术研究中心|影响。6 4|Wa r n i n g L e t t e r 国家大容量注65|Any Ques stions？谢谢！|Email Address：gejunyou126国家大容量注射剂工程技术研究中心6 5|A n y Q u e s s t i o n s？国家大容量注射剂工谢谢谢谢
