1、微生物基础知识和无菌操作微生物基础知识和无菌操作v 第三条第三条 无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应当无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应当最大限度降最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染低微生物、各种微粒和热原的污染。v 生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素，生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素，无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法及规程进行，产品的无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法及规程进行，产品的无菌或其它质量特性绝不能只依赖于任何形式的最终处理或成品检验（包括无菌或其它质量特性绝不
2、能只依赖于任何形式的最终处理或成品检验（包括无菌检查）。无菌检查）。v v 第四条第四条 无菌药品按生产工艺可分为两类：无菌药品按生产工艺可分为两类：采用最终灭菌工艺的为最终灭菌采用最终灭菌工艺的为最终灭菌产品产品；部分或全部工序采用无菌生产工艺的为；部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌产品非最终灭菌产品。v v 第七条第七条 应当根据产品特性、工艺和设备等因素，确定无菌药品生产用洁净应当根据产品特性、工艺和设备等因素，确定无菌药品生产用洁净区的级别。每一步生产操作的环境都应当达到适当的动态洁净度标准，尽可区的级别。每一步生产操作的环境都应当达到适当的动态洁净度标准，尽可能降低产品或所
3、处理的物料能降低产品或所处理的物料被微粒或微生物污染被微粒或微生物污染的风险。的风险。v二、二、GMP法规对法规对无菌药品微生物的控制无菌药品微生物的控制v第二十条第二十条 凡在洁净区工作的人员（包括清洁工和设备维修工）应当定期培训，使无菌凡在洁净区工作的人员（包括清洁工和设备维修工）应当定期培训，使无菌药品的操作符合要求。药品的操作符合要求。培训的内容应当包括卫生和微生物方面的基础知识培训的内容应当包括卫生和微生物方面的基础知识。未受培训的外。未受培训的外部人员（如外部施工人员或维修人员）在生产期间需进入洁净区时，应当对他们进行特别部人员（如外部施工人员或维修人员）在生产期间需进入洁净区时，
4、应当对他们进行特别详细的指导和监督。详细的指导和监督。v 第五十条第五十条 必要时，应当定期监测制药用水的细菌内毒素，保存监测结果及所采取纠必要时，应当定期监测制药用水的细菌内毒素，保存监测结果及所采取纠偏措施的相关记录。偏措施的相关记录。v第五十二条第五十二条 应当尽可能应当尽可能减少物料的微生物污染程度减少物料的微生物污染程度。必要时，物料的质量标准中应当。必要时，物料的质量标准中应当包括包括微生物限度、细菌内毒素微生物限度、细菌内毒素或热原检查项目。或热原检查项目。v第五十三条第五十三条 洁净区内应当避免使用易脱落纤维的容器和物料；在无菌生产的过程中洁净区内应当避免使用易脱落纤维的容器和
5、物料；在无菌生产的过程中，不得使用此类容器和物料。，不得使用此类容器和物料。v第五十四条第五十四条 应当采取各种措施减少最终产品的微粒污染。应当采取各种措施减少最终产品的微粒污染。v第五十五条第五十五条 最终清洗后包装材料、容器和设备的处理应当避免被再次污染。最终清洗后包装材料、容器和设备的处理应当避免被再次污染。二、二、GMP法规对法规对无菌药品微生物的控制无菌药品微生物的控制v第五十八条第五十八条 应当根据所用灭菌方法的效果确定灭菌前产品微生物污染水平的监控标应当根据所用灭菌方法的效果确定灭菌前产品微生物污染水平的监控标准，并定期监控。必要时，还应当监控热原或细菌内毒素。准，并定期监控。必
6、要时，还应当监控热原或细菌内毒素。v第五十九条第五十九条 无菌生产所用的包装材料、容器、设备和任何其它物品都应当灭菌，并无菌生产所用的包装材料、容器、设备和任何其它物品都应当灭菌，并通过双扉灭菌柜进入无菌生产区，或以其它方式进入无菌生产区，但应当避免引入污染。通过双扉灭菌柜进入无菌生产区，或以其它方式进入无菌生产区，但应当避免引入污染。v第八十条第八十条 无菌检查的取样计划应当根据风险评估结果制定，样品应当包括微生物污染无菌检查的取样计划应当根据风险评估结果制定，样品应当包括微生物污染风险最大的产品。风险最大的产品。无菌检查样品的取样至少应当符合以下要求：无菌检查样品的取样至少应当符合以下要求
7、：v（一）无菌灌装产品的样品必须包括最初、最终灌装的产品以及灌装过程中发生较大（一）无菌灌装产品的样品必须包括最初、最终灌装的产品以及灌装过程中发生较大偏差后的产品；偏差后的产品；v（二）最终灭菌产品应当从可能的灭菌冷点处取样；（二）最终灭菌产品应当从可能的灭菌冷点处取样；v（三）同一批产品经多个灭菌设备或同一灭菌设备分次灭菌的，样品应当从各个（三）同一批产品经多个灭菌设备或同一灭菌设备分次灭菌的，样品应当从各个/次灭次灭菌设备中抽取。菌设备中抽取。二、二、GMP法规对法规对无菌药品微生物的控制无菌药品微生物的控制三、三、药典中使用的菌种介绍药典中使用的菌种介绍l大肠杆菌大肠杆菌 CMCC(B
8、)44102-革兰氏阴性短杆菌。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌。大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶。主要为致泻性。l乙型副伤寒沙门杆菌乙型副伤寒沙门杆菌 CMCC(B)50094-寄居在人类动物肠道内生化反应和抗原构造相似的革兰阴性杆菌。它是人类食物中毒的主要病原之一。肠道致病菌，常常因为误食不洁食物引起，感染者出现严重腹泻。由沙门氏菌引起的疾病主要分两大类：一类是伤寒和副伤寒，另一类是急性肠胃炎。v 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 CMCC(B)10104-原称绿脓杆菌。在自然界分布广泛，为土壤中存在的最常见的细菌之一。铜绿假单胞菌有多种产物有致病性，其内毒素是引起脓毒综
9、合征或系统炎症反应综合征(SIRS)的关键因子。本菌为条件致病菌，是医院内感染的主要病原菌之一。常引起术后伤口感染。本菌引起的感染病灶可导致血行散播，而发生菌血症和败血症。烧伤后感染了铜绿色假单胞菌可造成死亡。l金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003-是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。l白色念珠菌白色念珠菌CMCC(F)98001-白色念珠菌可侵犯人体许多部位，可引起：1.皮肤念珠菌病，发于皮肤皱褶处。2.粘膜念珠菌病，以鹅口疮、口角炎、阴
10、道炎最多见。3.内脏及中枢神经念珠菌病，可由粘膜皮肤等处病菌播散引起，有肺炎、肠胃炎、心内膜炎、脑膜炎等，偶尔也可发生败血症。人体人体是微生物和颗粒污染的主要来源是微生物和颗粒污染的主要来源 personnel is the main source of particular and microbial contaminations.颗粒污染 PARTICULAR CONTAMINATION 人眼可见最小颗粒为人眼可见最小颗粒为3030微米微米 The human eye can only see the particles which size is bigger than 30 micro
11、metres.1 1微米微米=1/1000=1/1000 毫米毫米 One micrometer is equivalent to one thousand of a millimeter.坐 着 不 动 能 产 生坐 着 不 动 能 产 生100,000100,000个颗粒个颗粒 A person sitting and without activities produces naturally more than 100.000 particles.微生物污染微生物污染 THE MICROBIAL CONTAMINATION 包括细菌、病毒、霉菌和酵母包括细菌、病毒、霉菌和酵母 The m
12、icro-organisms are living organisms which can be bacterium,virus,mushrooms,yeasts.人体内外表面广泛存人体内外表面广泛存在微生物在微生物 Every healthy person carries micro-organisms on his body surface and inside his body.人体携带的微生物污染人体携带的微生物污染 Bacterial contamination carried by a person人体是主要的微生物和颗粒污染源人体是主要的微生物和颗粒污染源 The persone
13、l is the main source of particular and microbial contaminations.XinproductionareasXX进入无菌区前 Before accessing in the aseptic zone:1)检查环境参数是否合格(Check the Monitors)Check the zone parameters are conform(T,HR,P);2)检查房间设备清洁(Check the Status Label)Check the rooms and equipments are clean;3)检查物料灭菌参数(Check th
14、e Autoclave Printout)Check the sterilisation cycles of the material.4)检查层流罩工作正常(Check the DDC system and the flash light)Check the laminar air flows are working correctly.检查灭菌指示条 Check the sterilisations tapes:灭菌后变褐色 Tapes should be brown after sterilisationAUTOCLAVEDNOT AUTOCLAVEDAUTOCLAVEDNOT AUTO
15、CLAVED检查灭菌指示条 Check the sterilisations tapes:灭菌后变褐色 Tapes should be brown after sterilisation在无菌区良好的无菌操作 Good aseptical practices in aseptic zones:在灌装区关键的部件 the critical items in the Filling department注射器，胶塞，罐以及其它疫苗容器 are the syringes,the joints,the vessels or containers with vaccine,.在QC部门的关键部件：瓶，注
16、射器，离心管，培养基和玻璃器皿 In the QC department,the critical items are the vials,the syringes,the media,the glassware.在无菌区良好的无菌操作 Good aseptical practices in aseptic zones:取样 Sampling胶塞和空注塑器加载 Loading Joint and Hypack连接组件和安装泵及灌装头 Connect Montage,Install Pump and Needle在无菌区工作的人员应遵循下列原则：When the personel is work
17、ing in the aseptic zones,following rules also apply:为维护良好的环境：不能在人流缓冲中聊天；不能同时打开两侧的门 To maintain a good environment in the aseptic zone:do not discuss in the PAL;do not open both doors of the airlock simultaneously.若无菌手套破或滑下，更换手套 If a sterile glove is damaged or if the glove handle is down,change both
18、 hands gloves.手套下滑 Wrong gloves.不时相互检查穿戴，若有不对通知他 Check constantly if the sterile clothing is conform;if not,inform your colleague不工作时，将手置于前方两侧，身体不能斜靠 When not working,keep the forehands and hands in front of yourself;do not lean.经常消毒双手，在进行任何关键操作前消毒双手 Disinfect regularly the gloves and in any case do it before any critical handling.结论 Conclusion:谢谢大家！
