1、1、总则2、菌落总数3、霉菌、酵母菌4、大肠菌群5、沙门氏菌6、金黄色葡萄球菌7、培养基性能测试8、食品微生物检测试验室质量控制 总则GB4789.1-20161.范围范围：规定了食品微生物学检验的基本原则和要求，本标准适用于食品 微生物学检验2.实验室实验室基本基本要求要求2.1检验人员：相应的微生物专业或培训经历，具有相应的资质，能够理解并 正确实施检验。（通过内部质量控制和能力验证、或使用标准菌株等方法客观评估人员的能力。）2.2环境与设施：实验室环境不影响检验结果的准确性，实验室内的温度、湿度、洁净度、照度、噪声应符合工作要求（参考GB/T 27405 2008 附录附录）2.2.1无
2、菌室内光照应分布均匀，工作台面的光照度应不低于540 lx。总则GB4789.1-2016 实验室的基本要求2.2.2无菌室应具备适当的通风和温度调节的条件。无菌室的推荐温度为20 ，相对湿 度为40 60%。2.2.3一般样品检验应在洁净区域（包括超净工作台或洁净实验室）进行，洁净区域应有明显的标示。2.2.4病原微生物分离鉴定工作应在二级生物安全实验室（柜）进行。依据GB 19489 2008实验室生物安全通用要求2.2.5制定合理的环境监测程序与频次 总则GB4789.1-2016 实验室的基本要求2.2.6无菌室的管理2.2.6.1无菌室在使用前后应进行有效消毒。2.2.6.2无菌室的
3、灭菌效果应至少每周验证两次2.2.6.3应制定清洁、消毒、灭菌、使用、和应急处理程序2.2.6.4应记录环境监测结果 总则GB4789.1-2016 实验室的基本要求2.3实验设备实验设备2.3.1实验室应制定并实施设备的维护、校准、和性能验证的程序。每台设备都要有唯一的标识。2.3.2应定期验证和维护设备，应根据使用频率在特定的时间间隔内进行维护和相关性能验证2.3.3试验设备应有日常的监控记录和使用记录 GB/T27405-2008 设备校准要求和频率设备类型设备类型 要求要求 推荐频率推荐频率设备类型设备类型 要求要求 推荐频率推荐频率设备类型设备类型 要求要求 推荐频率推荐频率温控设备
4、（培养箱、水浴、冰箱等）、干热/高压灭菌器温度稳定和均匀性。两年一次和维修后监测温度 每日或每次使用前天平清零并校准每日或每次使用前移液器（管）准确性和精密度按使用频率生物安全柜确定性能 一年一次和维修后微生物监测 每两周气流监测 每次使用前无菌室或洁净室监测空气和表面微生物每两周一次超净工作台确定性能初次使用前和维修后用无菌平板监测每两周一次 GB/T27405-2008设备清洁、维护的要求和频率设备类型设备类型要求要求建议频率建议频率培养箱、灭菌想、冰箱清洁和消毒内表面每月一次高压灭菌器检修按生产商推荐有规律进行清洁和消毒每年一次货按生产商推荐压力容器的安全检查每年实验室清洁和消毒工作区表
5、面每个工作日一次及使用期间清洁地板每周一次 清洁和消毒其他表面 每三个月一次 总则GB4789.1-2016 实验室的基本要求2.4检验用品检验用品2.4.1保证灭菌效果，灭菌与未灭菌的用品分开存放并有明确标识。灭菌检验用品应记录灭菌的温度与持续时间及有效使用期限。2.5培养基和试剂的制备和质量要求按照GB4789.28-2013 总则GB4789.1-2016 实验室的基本要求2.6质控菌株质控菌株2.6.1实验室应保存能满足试验需要的标准菌株2.6.2应使用微生物菌种保藏专门或专业权威机构保存。可溯源的标准菌株2.6.3标准菌株的保存、传代按照GB4789.28的规定执行2.6.4对实验室
6、分离菌株（野生菌株），经过鉴定后，可作为实验室内部质量控制菌株。总则GB4789.1-2016 实验室的基本要求3.样品的采集3.1采样原则：无菌操作，应遵循随机性、代表性。3.2采样方案3.2.1根据采检样目的、食品的特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。采样方案分为二级n、c、m和三级采样方案n、c、m、M 总则GB4789.1-2016 实验室的基本要求3.2.2采集样品的标记，应对采集的样品进行及时、准确的记录和标记，采样人应清晰填写采样单（包括采样人、采样地点、时间、样品名称、来源、批号、数量、保存条件等信息）。3.2.3采集样品的贮存和运输采样后，应将样品在接近原有
7、贮存温度条件下尽快送往实验室检验。运输时应保持样品完整。如不能及时运送，应在接近原有贮存温度条件下贮存。防止样品中的微生物发生变化。总则GB4789.1-2016 实验室的基本要求3.3各类食品的采样方案按食品的相关标准的规定执行：3.3.1预包装食品：应采集相同批次、独立包装、适量件数的食品样品，每件样品的采样量应满足微生物指示检验的要求3.3.2散装食品或现场制作食品4生物安全与质量控制4.1质量控制：实验室应根据需要设置阳性对照、阴性对照、和空白对照定期对检验过程进行质量控制。总则 GB4789.1-2016 实验室的基本要求4.2实验室应定期对人员进行考核。5记录与报告5.1记录：检验
8、过程中应即时、客观地记录观察到的现象、结果和数据等信息5.2报告：按照检验方法中规定的要求、准确、客观的报告检验结果 总则GB4789.1-2016 实验室的基本要求6检验后样品的处理：6.1检验结果报告后，被检样品才能被处理6.2检出的致病菌的样品要经过无害化处理6.3检验结果报告后，剩余样品和同批产品不进行微生物项目的复检。GB4789.2-2016 菌落总数测定1、菌落总数的定义:食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得 每g（ml)检样中形成的微生物菌落总数2、老师建议使用磷酸盐缓冲液。3、菌落计数 a,选取菌落数在30300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。b、低于30
9、CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU 的记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。菌落链琼脂表面水膜皿底水膜 GB4789.2-2016 菌落总数测定c、其中一个平板有较大片装菌落生长时，而应以无片装菌落生长的平板作为该稀释度的菌落总数，若片装菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。d、当平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。GB4789.2-2016 菌落总数测定 4、结果与报告a、若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值b、若有两个连续的稀释度平
10、板上菌落数在适宜的计数范围内按公式计算c、若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板计数，其他平板科记录多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。GB4789.2-2016 菌落总数测定 d、若所有稀释度的平板上菌落数均小于30CFU，则对稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。e、若所有稀释度（包括液体样品原液）平板上无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。f、若所有稀释度的平板上菌落数均不在30CFU300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平板菌落数乘以稀释倍数计算。GB4789.2-2016 菌
11、落总数测定菌数报告规则示列 各稀释级（供试液1ml/皿）平均菌落计数结果报告CFU/g原液0.1 0.010.001164 82 6.41022232.234 33,35 3.41033多不可计32542 4.2104432128 2.81045000 106000 1 GB4789.15-2016 霉菌和酵母菌计数1.范围：本标准规定了食品中霉菌、酵母菌的计数方法 本标准第一法适用于各类食品中霉菌和酵母菌的计数，第二发适用于番茄酱罐头、番茄汁中霉菌的计数2.设备和材料2.1将均质器的名称具体为拍击式均质器或均质袋2.2无菌试管的修订10*75mm改为18*180mm2.3 删除了冰箱和恒温震
12、荡仪增加了、恒温水浴、旋涡混合仪（反复的吸吹）GB4789.15-2016 霉菌和酵母菌计数3.培养基：生理盐水、磷酸盐缓冲液、孟加拉红和马铃薯-葡 萄糖-琼脂培养基、灭菌温度的改变，倾注平皿量的改变，4.培养：正置培养5.菌落计数 5.1选取菌落数在10150CFU之间，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母菌菌落数 6.报告6.1菌落数按四舍五入原则修约，菌落数在10以内时，采用一位数字报告，在10100之间，采用两位数字报告6.2菌落数大于或等于100时前三位数字采用四舍五入原则修约后取前两位数字后面用0代替位数来表示结果；也可以用10的指数形式来表示 GB4789.15-2016 霉菌和酵母菌
13、计数 GB4789.15-2016 霉菌和酵母菌计数6.3如空白对照平板长有菌落出现，此次结果无效6.4以CFU/g或CFU/ml为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母菌数霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为菌落蔓延！多不可计 GB4789.3-2016 大肠菌群计数1.范围1.1本标准第一法（MPN）法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数1.2第二法（平板计数法）适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数2.设备 3.培养基和试剂：月桂基硫酸盐胰蛋白胨，煌绿乳糖胆盐，结晶紫中性红胆盐琼脂，磷酸盐缓冲液，无菌生理盐水。4、第一法（MPN）法4.1样品稀释4.2样品匀液的pH值应在6.
14、57.5之间4.3从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超15min4.4初发酵试验：24h观察一次，未产气在培养至48h GB4789.3-2016 大肠菌群计数4.5复发酵试验（证实试验）用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于与煌绿乳糖胆盐肉汤培养基中36 +1 培养48h+2h，观察产气情况，产气者为计为大肠菌群阳性管。GB4789.3-2016 大肠菌群计数 GB4789.3-2016 大肠菌群计数 5.第二法平板计数：5.1平板菌落数的选择：选取菌落数在10150CFU之间的平板，分别计数上面可疑和典型的大肠菌群菌落，典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，最
15、低稀释度平板低于15CFU的记录具体菌落数。5.2证实试验：从VRBA上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的全部挑取。5.3大肠菌群平板计数报告：经最后证实为大肠菌群阳性管数的试管比例乘以平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g/ml样品中大肠菌群数。若所有稀释度上都无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。国标号国标号2003版版2016版版培养基乳糖胆盐发酵管伊红美蓝平板乳糖发酵管LST发酵管BGLB发酵管证实试验分离培养基证实试验革兰氏染色复发酵试验仅进行复发酵试验单位报告MPN/100ml(g)MPN/ml(g)GB4789.3-2016和GB4789.3-2003 大肠
16、菌群MPN法的区别 大肠菌群MPN 检索表（2010和2016）4789.4-2016 沙门氏菌 沙门氏菌属：肠杆菌科，沙门菌属，分类最复杂，1个属，2个种，7个亚种，2659多血清型。血清型别复杂抗原变异多样，菌型鉴定和结果判定困难。是重要 的肠道致病菌，能引起各种脊椎动物的肠道感染。生物学性状：需氧和兼性厌氧，生长温度10-42 最适温度35-37，适宜 pH值6.8-7.8沙门氏菌是引起人畜共患食源性病源菌，广泛分布于自然界中，对禽类、生猪及其鲜肉制品的感染率最高，蛋类、禽类肉制品和猪肉是人类感染沙门氏菌的主要渠道。沙门氏菌不耐热，55 1h、60 15-30min即被杀死。冷冻对沙门氏
17、菌无杀灭作用，在-25 低温环境中仍可存活10个月左右。1.范围1.1本标准适用于食品沙门氏菌的检验并规定了沙门氏菌的检验方法2设备和材料2.1增加了60mm直径的平皿3.培养基和试剂4操作步骤4.1预增菌：pH值应在6.8+0.2用无选择性的培养基使处于濒死状态的细菌恢复活力4.2选择性增菌：使沙门氏菌优势繁殖，其他细菌收到抑制4.2.1TTB样品中沙门氏菌量少，可选择性抑制大肠菌群，提高目的菌的分离 4789.4-2016 沙门氏菌4.2.2SC：可以抑制粪便中链球菌和大肠菌群使沙门顺利繁殖4.3分离:轻轻摇动培养过的样品混合物。用直径3mm的接种环4.3.1BS：培养基不含乳糖，是分离沙
18、门氏菌的首先培养基注意事项：BS不能高压灭菌，溶解不能过热，只能在使用前一天配制，保存与冷 暗处，48h失效XLD：不高压，溶解时不能过热TSI：应制成高柱斜面，保证底部形成厌氧环境；试管冒不可太严，氧气供应不好可使斜 面丧失碱性环境 4789.4-2016 沙门氏菌 4789.4-2016 沙门氏菌选择性琼脂平板选择性琼脂平板 BS琼脂菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变HE琼脂蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎黑色XLD琼脂菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的
19、黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。沙门氏菌属显色培养基：按照显色培养基的说明进行规定。4.4生化试验4.4.1从选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种TSI琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌，直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，置361培养18h24h，在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表 4789.4-2016 沙门氏菌三糖铁琼脂三糖铁琼脂赖氨酸赖氨酸脱羧酶试验培养基脱羧酶试验培养基初步判断初步判断KA（）（）+可疑沙门氏菌属KA（）（）-可疑沙门氏菌属AA（）（）+可疑沙门氏菌属AA/-非
20、沙门氏菌KK/非沙门氏菌KA（）（）/非沙门氏菌注：K：产碱，A：产酸；：阳性，：阴性；（）：多数阳性，少数阴性；/：阳性或阴性。4789.4-2016 沙门氏菌4.4.2硫化氢、靛基质、Ph7.2尿素、氰化钾、赖氨酸脱羧酶、会有三种情况。4.5血清学鉴定4.5.1检查培养基有无自凝性4.5.2多价菌体抗原鉴定4.5.3多价鞭毛抗原鉴定 4789.4-2016 沙门氏菌4.6血清学分型4.6.1 O抗原的鉴定4.6.2H抗原的鉴定4.6.3Vi抗原的鉴定4.6.4菌型的判定4.7综合以上生化试验和血清学鉴定的结果报告25g/ml样品中检出或未检出沙门氏菌 4789.4-2016 沙门氏菌1、范
21、围：本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌的检验方法。本标准第一法适（定性）用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验;第二法（平板计数法）适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数 第三法（MPN法）适用于金黄色葡萄球菌含量较低的食品中金黄色葡萄球菌的计数。4789.10-2016 金黄色葡萄球菌2、设备和材料2.1恒温水浴箱:3656 替代（3765）2.2涂布棒代替了注射器3、培养基3.1 只有7.5%氯化钠肉汤删掉了10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤4检验程序 4789.10-2016 金黄色葡萄球菌4.1第一法金黄色葡萄球菌定性试验4.1.1样品处理4.1.2增菌4.1.3分离：Baird-
22、Parker 平板 361 培养 24h48h。旧国标（18h24h 或45h48h）4789.10-2016 金黄色葡萄球菌2010版版2016版版鉴定：1、染色镜检2、血浆凝固酶试验挑取 Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落 1个分别接种到 5mLBHI 和营养琼脂小斜面,361 培养 18h24h。取新鲜配制兔血浆 0.5mL,放入小试管中,再加入 BHI 培养物 0.2mL0.3mL,振荡摇匀,置361 温箱或水浴箱内,每半小时观察一次,观察 6h,如呈现凝固(即将试管倾斜或倒置时,呈现凝块)或凝固体积大于原体积的一半,被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球
23、菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂,按说明书操作,进行血浆凝固酶试验。结果如可疑,挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5mLBHI,361 培养 18h48h,重复试验。初步鉴定：金黄色葡萄球菌在 Baird-Parker 平板上呈圆形,表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为 2mm3mm,颜色呈灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈(沉淀),其外常有一清晰带。当用接种针触及菌落时具有黄油样黏稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清晰带外,其他外观基本相同。从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色常较典型菌落浅些,且外观可能较粗糙,质地较干燥。在血平板
24、上,形成菌落较大,圆形、光滑凸起、湿润、金黄色(有时为白色),菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述可疑菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。确证鉴定：1、染色镜检2、血浆凝固酶试验挑取 Baird-Parker 平板或血平板上至少5个可疑菌落 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求 培养基的质控入库登记记录 配制 记录 灭菌 记录培养设备使用记录菌种使用记录名称、批号、接收数量、规格、接收日期、产品的有效期、产品的合格证明、包装的完整性、厂家、接收人等配制量、配制步骤、配制人、干饭的使用量等使用记录销毁记录灭菌温度、时间、压力灭菌人、pH值、色泽、均匀度和灭菌结果证明使用日期、使
25、用量、剩余量、使用人等菌种接收、传代、保存、使用、销毁等记录培养箱、冰箱、废弃物培养基验收 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求一、修订依据：ISO/TS 11133-1:2009；ISO/TS 11133-2:2003；二、范围：规定了食品微生物学检验用培养基的质量要求和控制三、评估培养基整体性能的指标：理化指标 微生物学指标：特定条件下培养基对测试菌株的反应 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求四、培养基分类及术语和定义 纯化学培养基：由已知分子结构和纯度的化学成分配制而成的培养基 固体培养基：在液体培养基中加入一些琼脂和凝胶，加热至100C 溶解，冷却凝固后成
26、固体状态培养基可以制成平板和斜面。运输培养基：保藏培养基：营养琼脂斜面 悬浮培养基：如磷酸盐缓冲液 复苏培养基：使微生物恢复正常生长能力 增菌培养基：给微生物繁殖提供特定的生长环境 选择性增菌培养基：允许特定的微生物在其中繁殖 非选择性增菌培养基：保证多种微生物能够生长的培养基 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求 分离培养基：单独的支持微生物生长 选择性分离培养基：孟加拉红培养基，XLD。非选择性分离培养基：对微生物没有选择性的抑制。鉴定培养基：如 乳糖发酵管有特定的鉴定反应通常不需要进一 步确证试验的培养基 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求 计数培养基：能够
27、对微生物定量的选择性或非选择性培养基 确证培养基：如 BGLB 商品化即用型培养基：贮存条件、有效期和使用方法进行保存和使用。商品化脱水合成培养基:实验室应有有效的培养基目录清单，清单应包括密闭性检查、首次开封日期、内容物的感官检查。开封后的脱水培养基应在配制前观察粉末的流动性、均匀性、结块、和色泽等变化。GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求 试剂：用于微生物检验染色的染色试剂盒培养基配套试剂 测试菌株：用于培养基性能测试的微生物 标准菌株：主要从标准菌种保藏中心购买 标准储备菌株：储备菌株：工作菌株：五、贮存：一般要求，严格按照供应商的贮存条件、有效期和使用方法进行培养基和试剂
28、的保存和使用 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求六、培养基在实验室制备中的注意事项：1、实验室自制的培养基，2至8度平板建议保存2周至4周。并标记上名称和配制日期、有效期。瓶装及试管培养基不超过3个月至6个月，培养基的贮存应在建立验证的有效期。主要观察培养基是否有颜色变化、蒸发（脱水）或微生物生长的情况，当培养基发生这类变化时，应禁止使用。2、配制记录应有：配制日期、配制量、灭菌条件和操作步骤、pH值（应有记录体现灭菌后培养基的pH值，用氢氧化钠或盐酸）。3、水，电导率25度时不超过25uS/cm,微生物不超过103 CFU/ml。GB4789.28-2013培养基和试剂的质量
29、要求4、分装容器的体积应比培养基的体积最少大20%5、灭菌：湿热高压灭菌（pH、色泽、灭菌效果、均匀度）、过滤除菌、煮沸灭菌。5.1 pH 测定和调整：室温25度标准值+0.2范围内5.2过渡灭菌：未及时冷却或装载体积超过1000ml6、培养基的使用：溶化后放置时间不超过4个小时，在倾注培养基时不超过15分钟七、微生物学要求：实验室使用商品化培养基和试剂时，应保留生产商提供的资料并制定验收程序，如需验证应达到附录E质量控制的标准要求。生长特性 一般要求：对每批成品培养基或试剂进行评价定量法、半定量法、定性法三种方法。测试菌株：对不含指示剂或选择剂的培养基，只采用一株阳性菌测试，对含有指示剂的培
30、养基或试剂，应用能证明其指示或选择作用的菌株进行试验 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求生长率：按规定用适当的方法将测试菌株接种至固体、半固体和 液体培养基中，每种培养基上菌株的生长率应到达规定的最低限值选择性：为定量评估培养基的选择性，应安照规定以适当的方法将适量的测试菌株接种至选择性培养基，培养基的选择性应达到规定的限值生理生化特性（特异性）：确定培养基的菌落形态学，鉴别特性和选择性，以获得培养基的基本特性性能评价和结果解释：若按照规定所有的测试菌株的性能测试达到标准，则该批培养基的性能测试结果符合规定。GB4789.28
31、-2013培养基和试剂的质量要求 非选择性分离和计数固体培养基 选择性分离和计数固体培养基 非选择性增菌液体培养基 悬浮培养基和运输培养基 选择性增菌液体培养基 非选择性液体计数培养基生产商及实验室自制培养基和试剂实验室使用商品化培养基和试剂 定量法 定量及半定量法半定量法定性法 半定量法 定量法1001000cfu GB4789.28-2013培养基和试剂的性能测试方法一：生产商及实验室自制培养基和试剂的质量控制的测试方法二：实验室使用商品化培养基和试剂的质量控制的测试方法 2.1 非非选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法选择性分离和计数固体培养基的半定量测试方法2.1.1平板的制备与
32、保存：平皿中形成3mm厚的琼脂层，使用前应对琼脂表面进行 干燥。2.1.2将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。2.1.3接种：用1uL接种环进行平板划线12345678910121113151416目标菌半定量划线的方式 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求2.1.4计算培养后，评价菌落的形状、大小和密度，计算生长指数G。结果解释：G大于或等于6时，培养基可以接受。非选择性的培养基的G值较高。2.2选择性选择性分离和计数固体培养基的半定量测试分离和计数固体培养基的半定量测试方法方法2.2.1目标菌半定量测试方法：按2.1操作2.2.2非目标菌（选择性）半定量测
33、试方法 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求2.2.1平板的制备与保存2.2.2工作菌悬液的制备2.2.3接种：同时接种2个平板 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求2.2.4计算：每条有生长稠密菌落生长的划线则G为1，如果仅有一半的线有稠密菌落生长的划线则为0.5，如果划线上没有菌落生长，生长量少于划线的一半或菌落生长微弱，则G为0。结果解释：非目标菌生长指数G一般小于1，至少应达到小于5.GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求 2.3非选择性增菌培养基、选择性增菌培养基、和选择性液体计数培养基的定非
34、选择性增菌培养基、选择性增菌培养基、和选择性液体计数培养基的定 性测试性测试方法方法2.3.1培养基的制备：将培养基分装试管，每管10ml2.3.2工作菌悬液的制备将标准菌株接种到非选择性肉汤中过夜，进行10倍系列稀释至10-3，或制备成、105CFU/ml107CFU/ml的菌悬液作为工作菌悬液。10ml9ml9ml9ml9ml9ml 9ml 1ml1ml1ml1ml1ml1ml2.3.3用1uL接种环取1环工作菌悬液直接接种到性能测试的液体培养基中，按适合的培养温度和时间进行培养 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求2.3.
35、4结果解释：用目测的浊度值（如02）评估培养基0表示无混浊1表示很轻微的混浊2表示严重混浊2.4悬浮培养基和运输培养基的定性测试方法悬浮培养基和运输培养基的定性测试方法2.4.1培养基的制备：将培养基分装试管，每管10ml2.4.2工作菌悬液的制备：将标准储备菌株接种到非选择性肉汤培养过夜作为工作菌悬液。2.4.3接种：用1uL接种环取1环工作菌悬液直接接种到装有待测培养基是试管中，混匀后，立即用10uL接种环取1环划平行线接种平板，按规定培养后，剩余已接种菌液的待测培养基置20 25 放置45min后，再用10uL接种环取1环划平行线接种平板。GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要
36、求2.4.4结果观察与解释接种前后平板上目标菌的生长情况应均为良好。GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求 培养基培养基状态状态 功能分类功能分类 质控质控 指标指标 培养条件培养条件 质控菌株质控菌株定性质控定性质控评定标准评定标准 平板计数固体非选择性计数生长率36+124h+2h大肠、金蒲、枯草G6 孟加拉红培养基固体选择性计数生长率28.0+15天酿酒酵母黑曲霉G6选择性大肠、金蒲G1亚硫酸铋琼脂固体选择性分离生长率36+140h48h伤寒沙门氏菌，鼠伤寒沙门氏菌G6选择性大肠埃希氏菌、粪肠球菌G1XLD固体选择性分离生长率36+118h24h鼠伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌选
37、择性大肠、金蒲MAC固体选择性分离生长率36+120h24h大肠埃希氏菌、福氏志贺氏菌G6选择性金蒲G1 GB4789.28-2013培养基和试剂的质量要求食品微生物检测实验室质量控制 基本概念质量保证：一般适用于有合同场合，主要目的使客户确信实验室提供是服务能满足规定的质量要求。（侧重于控制措施，操作技术和方法）质量控制：主要是指为达到和保持质量而进行控制的技术措施和管理措施反面的活动。（侧重于控制结果的证实，以提供充分的信任）微生物检测质量控制1、外部质量评估：机构间比对、能力验证2、内部控质2.1设置对照：空白对照、阴性对照、阳性对照。2.2不同人员间的比对：2.3不同设备比对2.4不同
38、方法比对注：微生物样品本身的不均匀性影响检测结果一致性。应排除此干扰的影响，才能正确实施评价。同一操作者对同一平板复核自己 的计数结果，差异应在5%之内，而其他人员对同一平板重复计数，其差异应在10%之内。食品微生物检测实验室质量控制列如GB4789.10-2010中在做血浆凝固酶试验时，应有三个对照肉汤培养物 阴性对照 阳性对照表皮葡萄球菌金黄色葡萄球菌食品微生物检测实验室质量控制2.5模拟阳性样品试验2.6、针对微生物定量检测项目，应定期使用有证标准物质/标准样品进行监控，或使用质控样品开展内部质量控制活动。2.7、针对微生物定性检测项目，应定期使用标准物质/标准样品、质控样品或用标准菌种
39、人工污染的样品开展内部质量控制。2.8、实验室应根据工作量、人员水平、能力验证结果、外部评审等情况对定期做出明确规定，如定量检测项目6次/年，定性检测项目4次/年。2.9实验室内部比对ISO4833：2003中对结果重复性规定：用相同的方法，同一实验材料，在相同的条件下获得的一系列结果之间的一致程度。相同的条件是指同一操作者、同一设备、同一实验室和短暂的时间间隔。在此条件下所得的独立测试结果之差的绝对值不能大于重复性极限，即R=0.25食品微生物检测实验室质量控制2.9.1即第一次测试人员的测试结果为105=100000，第二次测试人员的结果下限为Lg104.75=5600结果上限为Lg105
40、.25=178000。如测试结果在56000和178000之间，则可认为两个测试结果的差值可以接受。如表所示 测试结果测试结果 第一测试人员第一测试人员 第二测试人员第二测试人员 测试值1000000280086000190000 结果判定 不可接受，低于下限值可接受不可接受，高于下限值若使用同一质控样品进行测试，两次测试结果超出差值范围的上限或下限值时，则可能是检测人员操作失误引起的，应及时检查找原因并纠正。相关微生物检验的国标 国标国标 内容内容 国标国标内容内容GB19489-2008实验室生物安全通用要求GB 50346实验室建筑技术规范GB/T27405-2008实验室质量控制规范，
41、食品微生物检测SN/T1538培养基制备质量保证通则GB 4789.28-2013食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB/T16293医药工业洁净室（区）浮游菌菌的测试方法GB 14881-2013食品生产卫生通用卫生规范SN/T27405实验室质量控制规范，食品微生物检测GB 7781-2011食品安全国家标准预包装食品标签通则GB11674乳清粉和乳清蛋白粉GB 5749-2006生活饮用水卫生标准GB31617食品营养强化剂GB 29921-2013食品中致病菌限量GB/T16294医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法GB 7101-2015食品安全国家标准饮料GB 16740-20
42、14保健（功能）食品通用标准GB 4789.18-2010乳与乳制品检验GB/T18202室内空气臭氧卫生标准GB 17405-1998保健食品良好生产操作规范GB 15981消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB 19489实验室生物安全通用要求相关微生物检验的国标国标国标内容内容GB 4789.1-2016食品微生物检验总则GB 4789.2-2016菌落总数测定GB 4789.3-2016大肠菌群GB 4789.4-2016沙门氏菌检验GB 4789.5-2012志贺氏菌检验GB 4789.10-2016金黄色葡萄球菌GB 4789.11-2014溶血性链球菌检验GB 4789.15-201
43、6霉菌和酵母菌计数GB 4789.38-2012大肠埃希氏菌 保健食品生产许可现场核查内容1、批准质量标准、取样方法、检验方法、和其它质量管理规程2、监督厂房和设施设备的维护情况3、洁净区与非洁净区以及不同级别的洁净室之间应设缓冲锁装置，放置空气倒灌。洁净间与室外的静压差应不当与小于10Pa，洁净级别不同相邻洁净室之间的静压差一般不小于5Pa，并配备压差指示装置4、洁净间温度1826度，相对湿度45%65%5、批生产记录应按批号归档，保存至产品保质期后一年，保存期限不得少于2年。6、每批保健食品要按照企业标准的要求进行出厂检验，每个品种每年要按照产品技术要求至少进行一次全项目形式检验。7、致病菌检测的阳性对照、微生物限度检定要分室进行，并采取有效措施，避免交叉污染。GB7101食品安全国家标准饮料饮料：经过定量包装的，供直接饮用或用水冲调饮用的，乙醇含量不超过质量分 数为0.5%的制品微生物限量：致病菌限量应符合GB29921（食品中致病菌限量）的规定食品添加剂应符合GB2760营养强化剂GB14880
