1、微生物培养技术微生物培养技术模块四 微生物的生长微生物的生长微生物的生长一、一、微生物的繁殖微生物的繁殖二、二、微生物的生长曲线微生物的生长曲线三、三、微生物的微生物的培养培养微生物微生物的繁殖的繁殖个体生长个体生长 个体个体繁殖繁殖 群体群体生长生长群体生长群体生长 个体生长个体生长 +个体个体繁殖繁殖 由于微生物的个体极小，所以常用群体由于微生物的个体极小，所以常用群体生长来反映个体生长的生长来反映个体生长的状况状况1 1、繁殖方式、繁殖方式细菌细菌裂殖裂殖放线菌放线菌无性孢子无性孢子酵母菌酵母菌无性繁殖、有性繁殖无性繁殖、有性繁殖霉菌霉菌孢子（无性、有性）孢子（无性、有性）病毒病毒复制复
2、制2 2、细菌的繁殖、细菌的繁殖2 2、细菌的繁殖、细菌的繁殖3 3、霉菌的繁殖分生孢子的形成微生物的生长规律 将少量细菌接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜条件下培养，定时取样测定细胞密度（CFU），以活细胞数的对数（Y轴）培养时间（X轴）所作出的曲线称为生长曲线（growth curve)。微生物的生长曲线微生物的生长曲线图：典型生长曲线延滞期 指数期 稳定期 衰亡期延滞期的特点生长速度为零细胞体积急剧增大细胞内的RNA尤其是rRNA含量增高，细胞呈嗜碱性合成代谢活跃，易产生诱导酶对外界不良环境条件敏感生长速度常数R最大细胞进行平衡生长酶系活跃，代谢旺盛指数期的特点在最适条件下几种微
3、生物的世代时间稳定期特点：1、生长速率常数R等于0 2、菌体产量达到了最高值 3、合成次生代谢产物 4、细胞内出现储藏物质，芽孢菌内开始产生芽孢产生原因：1、营养物尤其是生长限制因子的耗尽 2、营养物的比例失调，如碳氮比不合适 3、有害代谢废物的积累（酸、醇、毒素等）4、物化条件（pH、氧化还原势等）不合适衰亡期特点：1、R为负值 2、细胞的形态发生变化，出现不规则的衰退形态 3、释放次生代谢产物，芽孢等 4、菌体开始自溶产生原因：生长条件的进一步恶化，使细胞内的分解代谢大大超过合成代谢，继而导致菌体的死亡。主要的生长参数主要的生长参数迟缓时间：迟缓时间：实际达到对数生长期所需时间与理想条件下
4、达到对数期所需时间之差。延缓生长量反映了迟缓期给细胞物质的工业化生产造成的损失。比生长率比生长率：表示生长速度与生长基质浓度之间的关系，当营养物质浓度很低时，比生长率与营养物质浓度成正比。总生长量总生长量：通过培养获得的微生物总量与原来接种的微生物量之差值。产量常数产量常数：总生长量与消耗基质总量之比。1 1、纯培养、纯培养 把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代,称纯培养。微生物的培养微生物的培养首先将待分离的样品进行连续稀释首先将待分离的样品进行连续稀释,目的是得到高度稀释的目的是得到高度稀释的效果效果,使一支试管中分配不到一个微生物使一支试管中分配不到一个微生物.如果经过稀
5、释后如果经过稀释后的大多数试管中没有微生物生长的大多数试管中没有微生物生长,那么有微生物生长的试管那么有微生物生长的试管得到的培养物可能就是由一个微生物个体繁殖而来的纯培得到的培养物可能就是由一个微生物个体繁殖而来的纯培养物养物。液体液体稀释法稀释法适合于细胞较大的微生物适合于细胞较大的微生物平板划线平板划线法法平板划线平板划线法法1.斜线法斜线法 2.曲线法曲线法 3.方格法方格法 4.放射法放射法 5.四格法四格法倾注平板法倾注平板法平板涂布分离平板涂布分离法法简单易行，简单易行，但易造成机械损伤但易造成机械损伤2 2、分批培养分批培养 将微生物置于一定容积的培养基中，经过培养生长，最后一次收获的培养方法。摇床培养发酵罐培养微生物的培养微生物的培养3 3、连续培养连续培养 在微生物培养的过程中，不断地供给新鲜的营养物质，同时排除含菌体及代谢产物的发酵液，让培养的微生物长时间地处于对数生长期，以利于微生物的增殖速度和代谢活性处于某种稳定状态。微生物的培养微生物的培养4 4、混菌培养混菌培养 两种或两种以上的微生物的培养。通常是在发酵工业中用两种或两种以上的具有互补性质的菌种进行混合培养。微生物的培养微生物的培养
