1、微生物消毒与灭菌微生物消毒与灭菌第一节第一节 物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法&物理因素对微生物的影响物理因素对微生物的影响物理因素物理因素温温 度度辐辐 射射干干 燥燥超声波超声波微微 波波滤过除菌滤过除菌高温高温低温低温一、热力灭菌法一、热力灭菌法p高温对微生物虽具有明显的致死作用，但不高温对微生物虽具有明显的致死作用，但不同种类的微生物对热的敏感性有明显的的差同种类的微生物对热的敏感性有明显的的差异，细菌繁殖体最为敏感，其次是真菌和病异，细菌繁殖体最为敏感，其次是真菌和病毒，细菌的芽孢对热有很强的抵抗力。毒，细菌的芽孢对热有很强的抵抗力。p 热力灭菌的原理热力灭菌的原理破坏菌体蛋白质、核酸和
2、酶破坏菌体蛋白质、核酸和酶系统而致死微生物。系统而致死微生物。热力使蛋白质中的氢键破坏使之变性或凝固，热力使蛋白质中的氢键破坏使之变性或凝固，使双股使双股DNADNA分开为单股，受热活化的核酸酶使分开为单股，受热活化的核酸酶使单股的单股的DNA DNA 断裂，导致细菌死亡断裂，导致细菌死亡 p 影响高温灭菌的因素：影响高温灭菌的因素：细菌对高温的耐受性与细菌种类、发育时期、菌细菌对高温的耐受性与细菌种类、发育时期、菌体浓度及细菌所处介质有关。体浓度及细菌所处介质有关。l 热力灭菌法分类：干热灭菌热力灭菌法分类：干热灭菌 和湿热灭菌两种方法。和湿热灭菌两种方法。二者比较：在同一温度下，后者效力比
3、前者为大。二者比较：在同一温度下，后者效力比前者为大。l 原因：原因：（1 1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固；）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固；（2 2）湿热的穿透力比干热大；）湿热的穿透力比干热大；（3 3）湿热的蒸汽有潜热存在。）湿热的蒸汽有潜热存在。热力灭菌法热力灭菌法 高温杀灭细菌高温杀灭细菌l焚烧焚烧-最彻底的灭菌方法最彻底的灭菌方法l烧灼（火焰灭菌法）烧灼（火焰灭菌法）-直接用火焰灭菌方法直接用火焰灭菌方法l干烤干烤（热空气灭菌法、干热灭菌法）（热空气灭菌法、干热灭菌法）-加热加热160-180 2160-180 2小时小时干热灭菌法干热灭菌法l红外线红外线(2)(2)火焰灭菌法火焰灭菌
4、法 :火焰直接烧灼，用于接种环火焰直接烧灼，用于接种环(针针)和试管和试管口或瓶口的灭菌。口或瓶口的灭菌。(1)(1)焚烧法：用火焚烧，是一种彻底的灭菌方法，仅适焚烧法：用火焚烧，是一种彻底的灭菌方法，仅适用于废弃的污染物品和有传染性的动物尸体等。用于废弃的污染物品和有传染性的动物尸体等。(3)(3)干烤（热空气灭菌法、干热灭菌法）干烤（热空气灭菌法、干热灭菌法）n灭菌对象：为玻璃器皿、金属器械及不宜遇水的灭菌对象：为玻璃器皿、金属器械及不宜遇水的油、脂、凡士林等。油、脂、凡士林等。n方法方法160160（160160170170），），1 12h2h（180180纸纸、棉塞就可烧焦）、棉塞就
5、可烧焦）p 缺点缺点穿透力差，故需高温、长时间（繁殖体穿透力差，故需高温、长时间（繁殖体100100，1.5h1.5h杀灭；芽孢杀灭；芽孢140140，2h2h可杀灭）可杀灭）160160170170，1 12h2h可杀死繁殖体和芽孢。可杀死繁殖体和芽孢。降到室温（降到室温（6060）后再取物品）后再取物品p 注意事项注意事项 温度不能超过温度不能超过170170 物品不宜包、放过紧过厚、帖壁物品不宜包、放过紧过厚、帖壁湿热灭菌法湿热灭菌法p高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法最有效的灭菌方法最有效的灭菌方法 121 2030121 2030分钟分钟p煮沸消毒法煮沸消毒法水煮水煮100 5100 5分
6、钟分钟(繁殖体繁殖体)2)2小时小时(芽胞芽胞)p流通蒸汽消毒法流通蒸汽消毒法p巴氏消毒法巴氏消毒法p间歇蒸汽灭菌法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽水蒸汽100 1530100 1530分钟分钟(繁殖体繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌较低的温度（较低的温度（61 3061 30分钟）杀灭致病菌分钟）杀灭致病菌p方法：温度在方法：温度在100100左右，煮沸左右，煮沸101020 min20 min可杀死可杀死所有细菌的繁殖所有细菌的繁殖 体，芽胞常需煮沸体，芽胞常需煮沸1 12 h2 h才被杀才被杀死死 。若在水中加入若在水中加入2-5%2-5%酚，则酚，则10-15min
7、10-15min可杀灭可杀灭芽胞；若在水中加入芽胞；若在水中加入1-2%Na1-2%Na2 2COCO3 3，可提高沸点既，可提高沸点既可促进芽胞的摧毁，亦可防止金属器械生锈。可促进芽胞的摧毁，亦可防止金属器械生锈。p应用：灭菌对象应用：灭菌对象:饮水、玻璃器皿、外科器械饮水、玻璃器皿、外科器械(1)(1)煮沸灭菌煮沸灭菌 :(2)(2)巴氏消毒法巴氏消毒法 ：以较低温度杀灭液态食品中的病原菌或：以较低温度杀灭液态食品中的病原菌或特定微生物，而又不致严重损害其营养成分和风味的消特定微生物，而又不致严重损害其营养成分和风味的消毒方法毒方法 。低温维持巴氏消毒法低温维持巴氏消毒法 636365 3
8、0min 65 30min 高温瞬时巴氏消毒法高温瞬时巴氏消毒法 717172 15s 72 15s；迅速冷却；迅速冷却1010以下（冷击法）以下（冷击法）超高温巴氏消毒法超高温巴氏消毒法 132132管道管道 1 12s2s ；迅速冷却；迅速冷却常温保存半年。常温保存半年。(3)(3)流通蒸汽消毒法流通蒸汽消毒法 ：又叫常压蒸汽消毒法，用普通蒸笼：又叫常压蒸汽消毒法，用普通蒸笼或阿诺氏（或阿诺氏（ArnoldArnold）流通蒸汽灭菌器，在）流通蒸汽灭菌器，在1 1个大气压下，个大气压下，用用100100左右的水蒸汽，左右的水蒸汽，30min30min，可杀灭繁殖体。不杀芽孢，可杀灭繁殖体。
9、不杀芽孢和霉菌的孢子。和霉菌的孢子。用于食品、食具及不耐用高温的物品消毒。如敷料、用于食品、食具及不耐用高温的物品消毒。如敷料、糖培养基、半乳糖培养基糖培养基、半乳糖培养基 (4)(4)间歇灭菌法间歇灭菌法 （反复多次流通蒸汽）（反复多次流通蒸汽）p 利用连续利用连续3 3次的流通蒸汽消毒法，达到彻底灭菌的目的次的流通蒸汽消毒法，达到彻底灭菌的目的。即将待灭菌物品放入蒸笼（灭菌器）内，加热（约。即将待灭菌物品放入蒸笼（灭菌器）内，加热（约100100）15-30min15-30min，取出置室温，取出置室温(或或37)24h37)24h，次日重复，次日重复灭菌。连续灭菌。连续3 3次。次。p
10、用于一些不宜用于一些不宜100100以上温度灭菌物质，以达到杀灭芽以上温度灭菌物质，以达到杀灭芽胞的目的。常用于含糖、半乳糖、牛乳、血清等培养胞的目的。常用于含糖、半乳糖、牛乳、血清等培养基的灭菌。基的灭菌。（5）高压蒸汽灭菌法）高压蒸汽灭菌法p高压蒸汽灭菌器：高压蒸汽灭菌器：1515磅（磅（0.105MPa0.105MPa），），/平平方英寸，方英寸，121.3121.3温度下维持温度下维持151520min 20min。p 应用此法灭菌，一定要充分排除灭菌器内应用此法灭菌，一定要充分排除灭菌器内原有的冷空气。用于普通培养基、生理盐原有的冷空气。用于普通培养基、生理盐水、耐热药品、手术敷料等
11、。水、耐热药品、手术敷料等。手提式手提式立式立式 二、辐二、辐 射灭菌法射灭菌法辐射是能量通过空间传递的一种物理现象。能量可辐射是能量通过空间传递的一种物理现象。能量可借波动或粒子高速运行而传播。用于灭菌的辐射可分借波动或粒子高速运行而传播。用于灭菌的辐射可分为两种。为两种。p 电离辐射电离辐射、x x射线及高能中子、质子射线及高能中子、质子等。等。p 非电离辐射可见光、日光、紫外线等。非电离辐射可见光、日光、紫外线等。p 辐射的杀菌作用随波长的降低而增强。辐射的杀菌作用随波长的降低而增强。紫外、紫外、x x、杀菌增强杀菌增强 可见光、红外线作用弱可见光、红外线作用弱紫紫宇宙线宇宙线x可见可见
12、红外红外无线电波无线电波（二）理想消毒剂的条件主要用于陶瓷、耐热玻璃容器和塑料器皿，金属器皿忌用。光感作用原生动物、细菌、病毒、噬菌体等均有灭活作用。化学治疗剂对于宿主和病原微生物的作用具有选择性，它们使其生命活动受到抑制或使其死亡，而对宿主细胞毒副作用甚小。2%5%的碘酊用于手术部位、注射部位干燥缺水生化反应受阻新陈代谢障碍死亡。05%溶液用于食品厂、奶牛场的设备、用具消毒。射线：电离辐射强，穿透力强(4)间歇灭菌法（反复多次流通蒸汽）（一）影响消毒剂作用的因素可见光线是指在红外线和紫外线之间肉眼可见的光线，其波长400800nm。到目前为止，已发现的抗生素达2500多种，但其大多数对人和动
13、物有毒性，临床上最常用的抗生素只有几十种。(一）非电离辐射一）非电离辐射1.1.可见光线可见光线p 可见光线是指在红外线和紫外线之间肉眼可见的光线可见光线是指在红外线和紫外线之间肉眼可见的光线，其波长，其波长400400800nm800nm。可见光线对微生物一般无多大。可见光线对微生物一般无多大影响，但长时间作用也能妨碍微生物的新陈代谢与繁影响，但长时间作用也能妨碍微生物的新陈代谢与繁殖，故培养细菌和保存菌种，均应置于阴暗之处。殖，故培养细菌和保存菌种，均应置于阴暗之处。p 光感作用光感作用（photosensitization）某些染料（结晶紫某些染料（结晶紫、美蓝、伊红、汞溴红、沙黄等）加
14、入培养基中，能、美蓝、伊红、汞溴红、沙黄等）加入培养基中，能增强可见光的杀菌作用。增强可见光的杀菌作用。p 光感作用原生动物、细菌、病毒、噬菌体等均有灭活光感作用原生动物、细菌、病毒、噬菌体等均有灭活作用。作用。G G菌对光感作用比菌对光感作用比G G菌敏感，美蓝、伊红、汞菌敏感，美蓝、伊红、汞溴红因作用于溴红因作用于G G菌，而沙黄作用于菌，而沙黄作用于G G菌。菌。2.2.阳光阳光p直射日光有强烈的杀菌作用，直射日光有强烈的杀菌作用，p日光是天然杀菌因素日光是天然杀菌因素 细菌日光直射细菌日光直射30min30min数小时死亡。数小时死亡。碳疽芽孢直射碳疽芽孢直射20h20h死亡死亡p影响
15、日光杀菌的因素（烟尘、玻璃、有机物影响日光杀菌的因素（烟尘、玻璃、有机物、空气中的水分、温度），日光的杀菌效力、空气中的水分、温度），日光的杀菌效力因地、因时及微生物所处环境不同而异因地、因时及微生物所处环境不同而异 。3.3.紫外线紫外线p 杀菌原理波长为杀菌原理波长为100100400nm400nm，以，以254nm254nm杀菌力最杀菌力最强，短波紫外线灯为强，短波紫外线灯为253.7nm253.7nm。杀菌作用细菌杀菌作用细菌DNADNA对紫外线的吸收高峰在对紫外线的吸收高峰在265265266nm266nm之间，之间，O O2 2 O O3 3 O O 氧化能力强的氧原子氧化能力强的
16、氧原子-杀菌杀菌 诱发变异使诱发变异使DNADNA分子结构改变而诱发变异（影响分子结构改变而诱发变异（影响核酸同链上的胸腺嘧啶共价键结合形成胸腺嘧啶二聚核酸同链上的胸腺嘧啶共价键结合形成胸腺嘧啶二聚体，从而干扰了体，从而干扰了DNADNA的复制和转录）的复制和转录）p 方法紫外线灯照射杀菌方法紫外线灯照射杀菌p 应用手术室、病房、无菌室、实验室消毒（应用手术室、病房、无菌室、实验室消毒（G G-、G G+）p 光复活现象：微生物经致死量的紫外线照射后，若在光复活现象：微生物经致死量的紫外线照射后，若在3h3h内在遇到可见光照射，部分微生物可以恢复其活力内在遇到可见光照射，部分微生物可以恢复其活
17、力，这种现象称之。，这种现象称之。p 影响因素时间、强度、距离（一般要求距地面影响因素时间、强度、距离（一般要求距地面2m2m，时间，时间1 12h2h，1W1Wm m2 2）p 紫外线作用的特点：紫外线作用的特点：穿透力弱，只能用于房间空气、物体表面消毒；穿透力弱，只能用于房间空气、物体表面消毒；对眼睛角膜和皮肤有损伤作用对眼睛角膜和皮肤有损伤作用，工作人员切勿在，工作人员切勿在紫外线灯照射下进行操作。紫外线灯照射下进行操作。杀菌效果与照射时间，距离和强度有关；杀菌效果与照射时间，距离和强度有关；(二）电离辐射二）电离辐射p 具有较高的能量和穿透能力产生极强的致死效应。具有较高的能量和穿透能
18、力产生极强的致死效应。射线：电离辐射强射线：电离辐射强 ，穿透力差（，穿透力差（缺乏穿透力，不实缺乏穿透力，不实用）用）射线：电离辐射强射线：电离辐射强 ，穿透力强穿透力强 射线：电离辐射弱，射线：电离辐射弱，穿透力强，仅有抑菌作用和微穿透力强，仅有抑菌作用和微弱的杀菌作用。弱的杀菌作用。X X射线：杀菌力不如紫外线，穿透力强射线：杀菌力不如紫外线，穿透力强p用途：忌热用途：忌热塑料制品塑料制品物品物品（注射器、试管、吸（注射器、试管、吸管等）管等）的灭菌消毒、食品保藏和育种等方面的灭菌消毒、食品保藏和育种等方面 p 杀菌机制：射线使水电离为杀菌机制：射线使水电离为H H和和OHOH，这些游，
19、这些游离基是强烈的还原剂和氧化剂，可直接作用于离基是强烈的还原剂和氧化剂，可直接作用于细菌本身细菌本身 。（三）红外线（三）红外线l 利用红外线烤箱灭菌，红外线是波长为利用红外线烤箱灭菌，红外线是波长为0.77-1000m0.77-1000m的电磁波，尤以的电磁波，尤以1-10m1-10m波波长的热效应最高。多用于医疗器械的灭菌长的热效应最高。多用于医疗器械的灭菌（四）微波（四）微波p 从几百兆赫至几十万兆赫频率的无线电波称为微波。从几百兆赫至几十万兆赫频率的无线电波称为微波。p 微波灭菌，主要是利用微波的加热作用完成。灭菌物微波灭菌，主要是利用微波的加热作用完成。灭菌物品放在微波照射的交变电
20、场中时，物品内部的分子随品放在微波照射的交变电场中时，物品内部的分子随着电场的变化而相应的旋转振动起来，电场变化快，着电场的变化而相应的旋转振动起来，电场变化快，分子振动也就跟着快；由于分子间的相互作用力即产分子振动也就跟着快；由于分子间的相互作用力即产生摩擦力，因此分子克服其摩擦力而产生热量，使整生摩擦力，因此分子克服其摩擦力而产生热量，使整个物品则热起来，起到了摩擦加热灭菌的作用。这种个物品则热起来，起到了摩擦加热灭菌的作用。这种灭菌法，所需时间短、加热均匀是其显著的优点。灭菌法，所需时间短、加热均匀是其显著的优点。p 主要用于陶瓷、耐热玻璃容器和塑料器皿，金属器皿主要用于陶瓷、耐热玻璃容
21、器和塑料器皿，金属器皿忌用。忌用。三、超声波杀菌法三、超声波杀菌法p频率在频率在2000020000200000Hz200000Hz声波称为超声波。声波称为超声波。p超声波虽可使菌体裂解死亡，但往往有残超声波虽可使菌体裂解死亡，但往往有残存者，又因超声波费用颇大，故未应用于存者，又因超声波费用颇大，故未应用于消毒灭菌。消毒灭菌。p目前主要用于裂解细胞，提取细胞组分，目前主要用于裂解细胞，提取细胞组分，研究其抗原、酶类、细胞壁的化学性质以研究其抗原、酶类、细胞壁的化学性质以及从组织内提取病毒等。及从组织内提取病毒等。p 超声波主要通过四方面的作用达到杀菌目的：超声波主要通过四方面的作用达到杀菌目
22、的：震荡：使微生物细胞内含物强烈震荡而被破坏震荡：使微生物细胞内含物强烈震荡而被破坏 氧化杀菌：因在水溶液中超声波能产生过氧化氢氧化杀菌：因在水溶液中超声波能产生过氧化氢 产生热效应：破坏细胞的酶系统；产生热效应：破坏细胞的酶系统；空（腔）化作用：即在液体中形成许多真空状态的空（腔）化作用：即在液体中形成许多真空状态的小空腔，空腔崩破产生的巨大压力使细胞裂解。小空腔，空腔崩破产生的巨大压力使细胞裂解。四、过滤除菌法四、过滤除菌法p 滤过除菌滤过除菌 :通过机械阻留作用将液体或空气中的细菌通过机械阻留作用将液体或空气中的细菌等微生物除去的方法。但滤过除菌常不能除去病毒等微生物除去的方法。但滤过除
23、菌常不能除去病毒、霉形体以及细菌、霉形体以及细菌L L型等小颗粒。型等小颗粒。p 应用：应用：细菌滤器不耐热物品的灭菌（如不耐高温的营细菌滤器不耐热物品的灭菌（如不耐高温的营养液、血清、毒素、抗生素、养液、血清、毒素、抗生素、V V、酶、维生素等）、酶、维生素等）空气除菌超净工作台；空气除菌超净工作台；SPFSPF动物的饲养；动物的饲养；GMPGMP厂房的洁净度（四级）厂房的洁净度（四级）滤菌过程滤菌过程五、干燥及低温抑菌法五、干燥及低温抑菌法1.1.干燥干燥p 干燥可致微生物死亡干燥可致微生物死亡 干燥缺水生化反应受阻新陈代谢障碍干燥缺水生化反应受阻新陈代谢障碍死亡。甚至引起菌体蛋白质变性和
24、由于盐类浓度的增死亡。甚至引起菌体蛋白质变性和由于盐类浓度的增高而逐渐导致死亡。高而逐渐导致死亡。p 各种微生物对干燥的耐受性差异很大各种微生物对干燥的耐受性差异很大 巴氏杆菌、淋球菌、鼻疽杆菌几天巴氏杆菌、淋球菌、鼻疽杆菌几天 破伤风、碳疽芽孢几年、几十年破伤风、碳疽芽孢几年、几十年 霉菌孢子抵抗力很强霉菌孢子抵抗力很强p 应用：主要用于菌种和食品的保藏。应用：主要用于菌种和食品的保藏。2.低温对微生物的影响低温对微生物的影响 细菌对寒冷的抵抗力较强。因此，低温不细菌对寒冷的抵抗力较强。因此，低温不能用于灭菌。能用于灭菌。(1)微生物对低温有较强的抵抗力：微生物对低温有较强的抵抗力：微生物微
25、生物 低温低温 代谢活动降低，生长繁殖停止代谢活动降低，生长繁殖停止，可长期维持生命，可长期维持生命 T升高到适宜升高到适宜 苏醒苏醒生生长繁殖长繁殖低温常用于保存菌种。低温常用于保存菌种。但是，反复冻融对微生物但是，反复冻融对微生物不宜。不宜。各种细菌对低温的抵抗力亦不同。各种细菌对低温的抵抗力亦不同。（细菌、酵母菌、霉菌（细菌、酵母菌、霉菌0 044；病毒、某些细菌；病毒、某些细菌20207070，最好在液氮中（，最好在液氮中（196196）可长期保存；）可长期保存；但是巴氏杆菌、脑膜炎双球菌等低温敏感，低温比在但是巴氏杆菌、脑膜炎双球菌等低温敏感，低温比在室温中死亡更快。）室温中死亡更快
26、。）冷冻保存食品冷冻保存食品细菌生长繁殖停止细菌生长繁殖停止应应 用用（2 2）冷冻真空干燥法）冷冻真空干燥法 方法方法低温（低温（-40-40）迅速冻结，抽出空气，迅速冻结，抽出空气，真空状态下迅速脱水干燥真空状态下迅速脱水干燥可维持生命达数年可维持生命达数年加保护剂加保护剂脱脂奶粉或不含相应抗体的血浆或血脱脂奶粉或不含相应抗体的血浆或血清（清（10105050）注意事项注意事项细菌、真菌不宜长期冰冻保存细菌、真菌不宜长期冰冻保存尤尤其是反复冻融对任何微生物都有很大的破坏力。其是反复冻融对任何微生物都有很大的破坏力。在低温状态下真空抽去水分在低温状态下真空抽去水分用途：保存菌种用途：保存菌种
27、冷冻真空干燥法：冷冻真空干燥法：冷冻干燥机冷冻干燥机第二节第二节 化学消毒法化学消毒法防腐消毒剂：防腐消毒剂：许多化学药物能够抑制或杀死微生物，已广泛许多化学药物能够抑制或杀死微生物，已广泛用于消毒、防腐，统称为防腐消毒剂。消毒剂它在杀灭病用于消毒、防腐，统称为防腐消毒剂。消毒剂它在杀灭病原微生物的同时，对动物体的组织细胞也有损害作用。原微生物的同时，对动物体的组织细胞也有损害作用。消毒剂消毒剂（disinfectant）：用于杀灭物体上病原体的化学药品：用于杀灭物体上病原体的化学药品防腐剂防腐剂（antiseptic）：用于抑制微生物生长繁殖的化学药品：用于抑制微生物生长繁殖的化学药品或称抑
28、菌剂。或称抑菌剂。消毒剂和防腐剂区别：无严格的界限消毒剂和防腐剂区别：无严格的界限p 化学治疗剂：化学治疗剂：用于消除宿主体内病原微生物或其他用于消除宿主体内病原微生物或其他寄生虫的化学药物称为化学治疗剂。化学治疗剂对寄生虫的化学药物称为化学治疗剂。化学治疗剂对于宿主和病原微生物的作用具有选择性，它们使其于宿主和病原微生物的作用具有选择性，它们使其生命活动受到抑制或使其死亡，而对宿主细胞毒副生命活动受到抑制或使其死亡，而对宿主细胞毒副作用甚小。作用甚小。p 消毒剂与治疗剂的区别：对宿主组织细胞的作用。消毒剂与治疗剂的区别：对宿主组织细胞的作用。消毒剂特点：在杀灭病原微生物的同时，对肌体的消毒剂
29、特点：在杀灭病原微生物的同时，对肌体的组织细胞也有损害作用。因此，只用于局部（少数组织细胞也有损害作用。因此，只用于局部（少数不被吸收可由于消化道）、器械、环境。不被吸收可由于消化道）、器械、环境。治疗剂特点：治疗剂特点：对宿主和病原微生物作用有选择性，对对宿主和病原微生物作用有选择性，对宿主细胞副作用很小。可全身用药宿主细胞副作用很小。可全身用药一、消毒剂的种类及应用一、消毒剂的种类及应用(一一)常用消毒剂种类常用消毒剂种类种类繁多消毒目的、对象、特点进行选择种类繁多消毒目的、对象、特点进行选择酸类消毒剂酸类消毒剂碱类消毒剂碱类消毒剂其它消毒剂其它消毒剂H+OH-SH醇脱水醇脱水Hg1 1、
30、酸类消毒剂、酸类消毒剂无机酸（三大强酸）：具有腐蚀性。但硼酸腐蚀无机酸（三大强酸）：具有腐蚀性。但硼酸腐蚀性较小（杀菌力亦弱），常用性较小（杀菌力亦弱），常用1-2%1-2%硼酸用粘膜硼酸用粘膜消毒。消毒。有机酸：如甲酸，醋酸，乳酸等均有杀菌作用，有机酸：如甲酸，醋酸，乳酸等均有杀菌作用，常用乳酸水蒸气或溶液杀灭细菌或病毒。常用乳酸水蒸气或溶液杀灭细菌或病毒。2 2、碱类消毒剂、碱类消毒剂 碱类消毒剂对所有细菌及芽胞和病毒都碱类消毒剂对所有细菌及芽胞和病毒都有杀灭作用。尤其常用于病毒的消毒：有杀灭作用。尤其常用于病毒的消毒：10-20%10-20%石灰乳石灰乳 20-30%20-30%草木灰水
31、草木灰水 1-3%NaOH1-3%NaOH3 3、其它常用消毒剂、其它常用消毒剂0.1%0.1%升汞用于非金属器械消毒升汞用于非金属器械消毒0.1%KMnO0.1%KMnO4 4和和3%H3%H2 2O O2 2用于粘膜和创伤消毒用于粘膜和创伤消毒707075%75%乙醇用于体表和体温表的消毒乙醇用于体表和体温表的消毒1 13%3%碘液用于皮肤、粘膜消毒碘液用于皮肤、粘膜消毒5 510%10%碘液可杀灭放线菌碘液可杀灭放线菌0.20.20.5%0.5%过氧乙酸用于塑料、玻璃、人造纤维消毒及皮肤过氧乙酸用于塑料、玻璃、人造纤维消毒及皮肤消毒。消毒。3 35%5%酚、酚、3-5%3-5%来苏儿用于
32、环境消毒或空气消毒。来苏儿用于环境消毒或空气消毒。甲醛杀菌力较强，常用于器械消毒。甲醛杀菌力较强，常用于器械消毒。40%40%甲醛溶液用于烈性甲醛溶液用于烈性传染病的消毒，传染病的消毒，4 410%10%甲醛溶液浸泡甲醛溶液浸泡30min30min可杀灭繁殖体及真菌。可杀灭繁殖体及真菌。20%20%甲醛甲醛溶液浸泡溶液浸泡6h6h以上，可杀灭芽胞体。消毒房间：以上，可杀灭芽胞体。消毒房间：151525ml25ml福尔马林福尔马林/m/m加等量水薰蒸或加入加等量水薰蒸或加入KMnOKMnO4 4。要求湿度。要求湿度60608080；KMnOKMnO4 421g21g（1515）甲醛）甲醛42ml
33、42ml（3030），），24h24h。（二）常用的消毒剂使用方法及常用浓度（二）常用的消毒剂使用方法及常用浓度类别类别作用原理作用原理消毒剂消毒剂名称名称方法与浓度方法与浓度酸酸与与碱碱以以H+、OH-的解离的解离作用妨碍菌体代作用妨碍菌体代谢，杀菌力与浓度谢，杀菌力与浓度成正比成正比醋酸醋酸乳酸乳酸烧碱烧碱生石灰生石灰草木灰草木灰510ml/m3加等量水蒸发，空间消毒。加等量水蒸发，空间消毒。蒸汽熏蒸或蒸汽熏蒸或2%溶液喷雾，用于空气消毒溶液喷雾，用于空气消毒2%5%的苛性钠溶液（的苛性钠溶液（6070）消）消毒毒厩舍、饲槽、用具、车辆等。厩舍、饲槽、用具、车辆等。用用10%乳剂消毒厩舍、
34、运动场等。乳剂消毒厩舍、运动场等。用用10%草木灰水煮沸草木灰水煮沸2h，过滤，再加，过滤，再加24倍水，消毒厩舍、运动场等。倍水，消毒厩舍、运动场等。卤卤族族元元素素以氯化作用、氧化以氯化作用、氧化作用破坏作用破坏-SH基，基，使酶活性受到抑制使酶活性受到抑制产生杀菌效果产生杀菌效果漂白粉漂白粉碘酊碘酊用用5%20%的混悬液消毒畜禽舍、饲槽、的混悬液消毒畜禽舍、饲槽、车辆等；以车辆等；以0.30.4g/kg的剂量消毒的剂量消毒饮水。饮水。2%5%的碘酊用于手术部位、注射部的碘酊用于手术部位、注射部位位酚类酚类使菌体蛋白变性或使菌体蛋白变性或凝固凝固石炭酸石炭酸3%5%用于器械、排泄物消毒。用
35、于器械、排泄物消毒。（二）常用的消毒剂使用方法及常用浓度（二）常用的消毒剂使用方法及常用浓度 续续醇醇类类使菌体蛋白变性沉使菌体蛋白变性沉淀淀乙醇乙醇用用70%75%的乙醇作皮肤消毒，也用的乙醇作皮肤消毒，也用于体温计、器械等消毒。于体温计、器械等消毒。醛醛类类能与菌体蛋白的氨能与菌体蛋白的氨基酸结合，起到还基酸结合，起到还原作用原作用福尔福尔马林马林1%5%甲醛溶液或福尔马林气体熏蒸甲醛溶液或福尔马林气体熏蒸法消毒畜舍、禽舍、孵化器等用具和皮法消毒畜舍、禽舍、孵化器等用具和皮毛等。毛等。重重金金属属盐盐类类能与菌体蛋白质能与菌体蛋白质（酶）的（酶）的-SH基结基结合，使其失去活性；合，使其失
36、去活性；重金属离子易使菌重金属离子易使菌体蛋白变性体蛋白变性升汞升汞硫柳硫柳汞汞0.01%水溶液用于消毒手和皮肤；水溶液用于消毒手和皮肤；0.05%0.1%用于非金属器皿消毒。用于非金属器皿消毒。0.1%溶液可作皮肤消毒；溶液可作皮肤消毒；0.01%适于作适于作生物制品的防腐剂。生物制品的防腐剂。氧氧化化剂剂使菌体酶类发生氧使菌体酶类发生氧化而失去活性化而失去活性过氧过氧乙酸乙酸用用3%10%溶液熏蒸或喷雾，一般按每溶液熏蒸或喷雾，一般按每平方米空间平方米空间0.250.5ml用量，适于畜禽用量，适于畜禽舍空气消毒。舍空气消毒。烷烷化化剂剂能与菌体蛋白发生能与菌体蛋白发生烷化烷化环氧环氧乙烷乙
37、烷在密闭条件下，每平方米用在密闭条件下，每平方米用700900mg,消毒消毒24h，适于皮毛、裘皮、电，适于皮毛、裘皮、电动和光学仪器及医用胶手套等消毒。动和光学仪器及医用胶手套等消毒。（二）常用的消毒剂使用方法及常用浓度（二）常用的消毒剂使用方法及常用浓度 续续表表面面活活性性剂剂阳离子表面阳离子表面活性剂能改活性剂能改变细菌胞浆变细菌胞浆膜的通透膜的通透性，甚至使性，甚至使其崩解，使其崩解，使菌体内的物菌体内的物质外渗而产质外渗而产生杀菌作生杀菌作用；或以薄用；或以薄层包围胞浆层包围胞浆膜，干扰其膜，干扰其吸收作用吸收作用新洁尔灭新洁尔灭(溴苄烷溴苄烷铵铵)0.5%的水溶液用于皮肤和手的消
38、毒；的水溶液用于皮肤和手的消毒；0.1%用于玻璃器皿、手术器械、橡用用于玻璃器皿、手术器械、橡用品的消毒；品的消毒；0.15%2%用于禽舍空喷用于禽舍空喷雾消毒；雾消毒；0.1%可用于种蛋消毒可用于种蛋消毒(40433min)。度米芬度米芬(消毒宁消毒宁)对污染的表面用对污染的表面用0.1%0.5%喷洒，作喷洒，作用用1060min；浸泡金属器械可在其中；浸泡金属器械可在其中加入加入0.5%亚硝酸钠防锈；亚硝酸钠防锈；0.05%溶液溶液用于食品厂、奶牛场的设备、用具消毒用于食品厂、奶牛场的设备、用具消毒。洗必泰洗必泰（双氯苯（双氯苯双胍乙烷双胍乙烷）0.02%水溶液可消毒手；水溶液可消毒手；0
39、.05%溶液溶液冲洗创面，也可消毒禽舍、手术室、用冲洗创面，也可消毒禽舍、手术室、用具等；具等；0.1%用于手术器械的消毒、食用于手术器械的消毒、食品厂器具、设备的消毒。品厂器具、设备的消毒。消毒净消毒净0.05%0.1%水溶液用于皮肤和手的水溶液用于皮肤和手的消毒，也可用于玻璃器皿、手术器械、消毒，也可用于玻璃器皿、手术器械、橡胶用品等的消毒，一般浸泡橡胶用品等的消毒，一般浸泡10min即即可可（二）理想消毒剂的条件（二）理想消毒剂的条件 p种类很多，其杀菌作用亦不相同，一般可根种类很多，其杀菌作用亦不相同，一般可根据用途与消毒剂特点选择使用。据用途与消毒剂特点选择使用。p最理想的消毒剂应是
40、杀菌力强、价格低、无最理想的消毒剂应是杀菌力强、价格低、无腐蚀性、能长期保存、对动物无毒性或毒性腐蚀性、能长期保存、对动物无毒性或毒性较小、无残留或对环境无污染的化学药物。较小、无残留或对环境无污染的化学药物。（三）消毒剂的杀菌机制（三）消毒剂的杀菌机制复杂而多样，根据对菌体的作用大致可分为复杂而多样，根据对菌体的作用大致可分为:使菌体蛋白变性、凝固及水解。使菌体蛋白变性、凝固及水解。p药物与菌体蛋白质结合变性（金属离子药物与菌体蛋白质结合变性（金属离子、蛋、蛋白质白质）变性或沉淀）变性或沉淀-（金属盐、醇类）（金属盐、醇类）p与蛋白质的氨基酸结合蛋白质脱水凝固变形与蛋白质的氨基酸结合蛋白质脱
41、水凝固变形（醛类）（醛类）p使菌体蛋白质水解中和蛋白质电荷使菌体蛋白质水解中和蛋白质电荷-破坏其破坏其胶体稳定性而沉淀（碱或酸类）胶体稳定性而沉淀（碱或酸类）p改变改变DNADNA分子结构染料类（结晶紫）分子结构染料类（结晶紫）损伤胞浆膜损伤胞浆膜n降低菌细胞的表面张力，使胞浆膜通透性增加，菌体降低菌细胞的表面张力，使胞浆膜通透性增加，菌体破裂溶解。破裂溶解。n表面活性剂和酚（石炭酸、来苏儿、醇类等脂溶剂）表面活性剂和酚（石炭酸、来苏儿、醇类等脂溶剂）干扰细菌的酶系统和代谢干扰细菌的酶系统和代谢（与菌体内的酶类结合，影响细胞代谢或酶丧失活性）。（与菌体内的酶类结合，影响细胞代谢或酶丧失活性）。
42、使酶蛋白中的使酶蛋白中的SHSH改变二硫键，使酶失去活性氧化改变二硫键，使酶失去活性氧化剂（剂（高锰酸钾、过氧化氢、碘酊、漂白粉）、金属盐类）、金属盐类（汞、银）（汞、银）改变核酸的功能改变核酸的功能 如：染料龙胆紫可嵌入菌细胞双股如：染料龙胆紫可嵌入菌细胞双股DNADNA邻近邻近碱基对中，改变碱基对中，改变DNADNA分子结构，使细菌生长分子结构，使细菌生长繁殖受到抑制或死亡。繁殖受到抑制或死亡。二、影响消毒剂作用的因素二、影响消毒剂作用的因素消毒剂消毒剂种类种类浓度浓度作用时间作用时间细菌细菌菌龄菌龄种类种类 环境环境有机物有机物温度温度酸碱度酸碱度（一）影响消毒剂作用的因素（一）影响消毒
43、剂作用的因素1.1.消毒剂的性质、浓度与作用时间消毒剂的性质、浓度与作用时间2.2.环境中的有机物的存在（对细菌有保护作用、与消毒环境中的有机物的存在（对细菌有保护作用、与消毒剂发生反应）剂发生反应）意义：意义：3.3.微生物的种类和特性广谱、交替微生物的种类和特性广谱、交替 （G+G+、繁殖体、幼龄菌）、繁殖体、幼龄菌）清创、清扫最好的预防药物清创、清扫最好的预防药物4.4.温度与酸碱度的影响温度与酸碱度的影响温度：升高温度：升高18182020；石炭酸升高；石炭酸升高1010，杀菌效果提高，杀菌效果提高5 58 8倍倍PHPH值：一般为电离的分子较易通过值：一般为电离的分子较易通过C C膜
44、，杀菌效果好。膜，杀菌效果好。碱性溶液中，阳离子去污剂杀菌力强；酸性溶液中，碱性溶液中，阳离子去污剂杀菌力强；酸性溶液中，阴离子去污剂杀菌力强。阴离子去污剂杀菌力强。例如戊二醛本身呈中性，其水溶液呈弱酸性，当加入例如戊二醛本身呈中性，其水溶液呈弱酸性，当加入碳酸氢钠后才发挥杀菌作用。新洁尔灭的杀菌作用是碳酸氢钠后才发挥杀菌作用。新洁尔灭的杀菌作用是pHpH愈低所需杀菌浓度愈高，如在愈低所需杀菌浓度愈高，如在pH3pH3时，其所需杀菌时，其所需杀菌浓度较浓度较pH9pH9时要高时要高1010倍左右。倍左右。5.5.消毒剂的相互颉颃消毒剂的相互颉颃：阴离子清洁剂肥皂与阳离子清洁剂苯扎溴阴离子清洁剂
45、肥皂与阳离子清洁剂苯扎溴铵共用铵共用6.6.影响消毒效果的其他因素影响消毒效果的其他因素还有湿度、穿透力、表面张力及颉抗还有湿度、穿透力、表面张力及颉抗物质等。物质等。第三节抗生素和细菌素的杀菌作用第三节抗生素和细菌素的杀菌作用 自然界中各种微生物之间，或是在微生物与高自然界中各种微生物之间，或是在微生物与高等动植物之间，经常呈现相互影响的作用，如寄等动植物之间，经常呈现相互影响的作用，如寄生、共生和颉抗现象等。导致颉抗的物质基础是生、共生和颉抗现象等。导致颉抗的物质基础是抗生素、细菌素等细菌的代谢产物。此外植物中抗生素、细菌素等细菌的代谢产物。此外植物中也存在杀菌物质如黄连素也存在杀菌物质如
46、黄连素(小蘖碱小蘖碱)，噬菌体则是可，噬菌体则是可杀灭细菌的活的微生物。杀灭细菌的活的微生物。1、抗生素、抗生素(antibiotics)l 某些微生物在代谢过程中产生的一类能抑制或杀某些微生物在代谢过程中产生的一类能抑制或杀死另一些微生物的物质称为抗生素。死另一些微生物的物质称为抗生素。l 主要来源主要来源:放线菌放线菌(如链霉菌如链霉菌)，少数来源于某些霉，少数来源于某些霉菌菌 (如青霉菌等如青霉菌等)和细菌和细菌 (如多黏菌素如多黏菌素)，有些亦能，有些亦能用化学方法合成或半合成。到目前为止，已发现用化学方法合成或半合成。到目前为止，已发现的抗生素达的抗生素达25002500多种，但其大
47、多数对人和动物有多种，但其大多数对人和动物有毒性，临床上最常用的抗生素只有几十种。毒性，临床上最常用的抗生素只有几十种。l抗生素的作用原理抗生素的作用原理 抑制细菌细胞壁的合成。如青霉素、头孢类抑制细菌细胞壁的合成。如青霉素、头孢类影响细菌细胞膜的通透性。多粘菌素、杆菌肽影响细菌细胞膜的通透性。多粘菌素、杆菌肽抑制菌体蛋白质的合成。如氯、四、糖苷类抑制菌体蛋白质的合成。如氯、四、糖苷类抑制细菌核酸合成。如灰黄霉素、利福平。抑制细菌核酸合成。如灰黄霉素、利福平。药敏试验结果及观察药敏试验结果及观察2.2.细菌素细菌素（bacteriocin）p 细菌素是某种细菌产生的一种具有杀菌作用的蛋白质细菌
48、素是某种细菌产生的一种具有杀菌作用的蛋白质。只能对同种细菌不同菌株产生作用。只能对同种细菌不同菌株产生作用。p 作用：杀菌范围较窄，有一定的特异性只作用于作用：杀菌范围较窄，有一定的特异性只作用于同种菌株的细菌以及与它相近的细菌。同种菌株的细菌以及与它相近的细菌。p 特点：作用类似抗生素。但不裂解菌体，也不能在菌特点：作用类似抗生素。但不裂解菌体，也不能在菌体内繁殖（不同噬菌体）。体内繁殖（不同噬菌体）。p 种类：大肠杆菌素（某些大肠杆菌；志贺氏杆菌）；种类：大肠杆菌素（某些大肠杆菌；志贺氏杆菌）；弧菌素；绿脓杆菌素；葡萄球菌素弧菌素；绿脓杆菌素；葡萄球菌素3.3.植物杀菌素植物杀菌素(phy
49、tocidin)p 植物杀菌素：某些植物中存在有杀菌物质，这植物杀菌素：某些植物中存在有杀菌物质，这种杀菌物质一般称植物杀菌素。种杀菌物质一般称植物杀菌素。p 中草药：如黄连、黄柏、黄芩、大蒜、金银花中草药：如黄连、黄柏、黄芩、大蒜、金银花、连翘、鱼腥草、穿心莲、马齿苋、板蓝根等、连翘、鱼腥草、穿心莲、马齿苋、板蓝根等都含有杀菌物质，其中有的已制成注射液或其都含有杀菌物质，其中有的已制成注射液或其他制剂的药品。他制剂的药品。第四节第四节 兽医微生物实验室的生物安全兽医微生物实验室的生物安全一、生物安全的概念和一般要求一、生物安全的概念和一般要求实验室的生物安全有三层含义：实验室的生物安全有三层
50、含义：p 其一主要是指防止病原微生物等及其他有害生物或物其一主要是指防止病原微生物等及其他有害生物或物质传入实验室，此种生物安全英文称质传入实验室，此种生物安全英文称“biosecurity”p 其二主要是指防止病原微生物等传出实验室，此种生其二主要是指防止病原微生物等传出实验室，此种生物安全英文为物安全英文为“biosafety”。p 其三是指实验室人员的自身安全防护，其三是指实验室人员的自身安全防护，biosecurity及及biosafety都包括此义。都包括此义。兽医微生物实验室主要从事病原微生物的检兽医微生物实验室主要从事病原微生物的检验及相关研究，我国政府对必病原微生物实验验及相关
