1、11/22/2022111/22/20222内容内容&1 急性毒性作用急性毒性作用&2 蓄积毒性蓄积毒性&3 亚慢性和慢性毒性作用亚慢性和慢性毒性作用&4 局部毒性作用局部毒性作用&5 LD50 计算方法计算方法11/22/202231 急性毒性作用急性毒性作用n一、急性毒性和急性毒性试验的目的一、急性毒性和急性毒性试验的目的n二、急性毒性试验二、急性毒性试验n三、急性毒性分级三、急性毒性分级11/22/20224一、急性毒性和急性毒性试验的目的一、急性毒性和急性毒性试验的目的n急性毒性急性毒性(acute toxicity)(acute toxicity)是指机体是指机体(人或试验人或试验动
2、物动物)一次接触或一次接触或2424小时内多次接触小时内多次接触化学物后在化学物后在短期短期(最长到最长到1414天天)内所发生的内所发生的毒性效应毒性效应，包括，包括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡效应。效应。11/22/20225一、急性毒性和急性毒性试验的目的一、急性毒性和急性毒性试验的目的n目的目的测试和求出化学毒物对一种或几种试验动物的致死量测试和求出化学毒物对一种或几种试验动物的致死量(以以LDLD5050表示表示)以及其它的急性毒性参数，了解急性毒作用以及其它的急性毒性参数，了解急性毒作用强度。强度。并通过观察动物中毒表现和死亡的情
3、况，了解急性毒作并通过观察动物中毒表现和死亡的情况，了解急性毒作用性质、可能的靶器官和致死原因，提供化学毒物的急性用性质、可能的靶器官和致死原因，提供化学毒物的急性中毒资料、初步评价对人体产生损害的危险性。中毒资料、初步评价对人体产生损害的危险性。探求化学毒物急性毒性的剂量探求化学毒物急性毒性的剂量反应关系与中毒特征。反应关系与中毒特征。为亚慢性、慢性毒性作用试验的染毒剂量设计提供参考为亚慢性、慢性毒性作用试验的染毒剂量设计提供参考依据。依据。研究化学毒物急性中毒的预防和急救治疗措施。研究化学毒物急性中毒的预防和急救治疗措施。为毒理学机制研究提供线索为毒理学机制研究提供线索。11/22/202
4、26一、急性毒性和急性毒性试验的目的一、急性毒性和急性毒性试验的目的n急性毒性试验常用的毒性参数：急性毒性试验常用的毒性参数：LD50/LC50Zac（LD50/Limac）LD84/LD16(或或LC84LC16)剂量剂量反应曲线斜率反应曲线斜率 11/22/20227二、急性毒性试验二、急性毒性试验n(一一)试验动物试验动物 原则原则：n急性毒性试验要求选择对化学毒物的代谢急性毒性试验要求选择对化学毒物的代谢和毒效应表现与人的反应尽可能一致的试验和毒效应表现与人的反应尽可能一致的试验动物。动物。n动物易于获得动物易于获得n品系纯化品系纯化n价格较低和易于饲养等条件。价格较低和易于饲养等条件
5、。11/22/20228二、急性毒性试验二、急性毒性试验n1 1试验动物的种属和品系试验动物的种属和品系最好用两种种属的动物最好用两种种属的动物啮齿类啮齿类:小鼠、大鼠、豚鼠或家兔小鼠、大鼠、豚鼠或家兔非啮齿类：非啮齿类：狗或猴狗或猴。急性皮肤毒性试验可选用成年大鼠、豚鼠或家兔，急性皮肤毒性试验可选用成年大鼠、豚鼠或家兔，优先考虑白色家兔。而急性吸入毒性试验和经口急优先考虑白色家兔。而急性吸入毒性试验和经口急性毒性试验则优先考虑大鼠。性毒性试验则优先考虑大鼠。11/22/20229二、急性毒性试验二、急性毒性试验n试验动物的年龄和体重：试验动物的年龄和体重：急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求
6、选择刚成年急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的动物。例动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的动物。例如：大鼠如：大鼠180180240g240g、小鼠、小鼠181825g25g、家兔、家兔2 22.5kg2.5kg、豚鼠豚鼠200200250g250g、狗、狗101015kg15kg。同一批试验动物体重同一批试验动物体重变异范围不应超过该批动物平均体重的变异范围不应超过该批动物平均体重的2020。11/22/202210二、急性毒性试验二、急性毒性试验n3.3.试验动物的性别：试验动物的性别：急性毒性试验的主要内容是求急性毒性试验的主要内容是求L
7、DLD5050，除特殊要求，除特殊要求外，一般急性毒性试验对动物性别要求为外，一般急性毒性试验对动物性别要求为雌雄各雌雄各半半。如果在预试验时发现化学毒物。如果在预试验时发现化学毒物(如农药如农药)对雌、对雌、雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分别求出雌性与雄性动物各自的别求出雌性与雄性动物各自的LDLD5050。如果试验是。如果试验是为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的LDLD5050测测试。试。11/22/202211二、急性毒性试验二、急性毒性试验n4.动物数量与随机分组：动物数量与随机分组：大、小鼠等小
8、动物大、小鼠等小动物 每组每组10只只狗等大动物狗等大动物 每组每组6只只分组原则分组原则随机化原则随机化原则n5.禁食：禁食：经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜进食；染毒后禁食隔夜进食；染毒后禁食4h大动物大动物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒染毒后继续禁食染毒后继续禁食24h，但在禁食时要保障饮水。，但在禁食时要保障饮水。n6.实验动物的预检：实验动物的预检：选择健康动物选择健康动物12周的检疫期周的检疫期11/22/202212二、急性毒性试验二、急性毒性试验 （二）试验动物的饲养环境（二）试验动物的饲养环境恒定的温度：恒
9、定的温度：223湿度：湿度：3070%照明：昼夜各半照明：昼夜各半饲料合格、饮水合格、垫料合格饲料合格、饮水合格、垫料合格11/22/202213二、急性毒性试验二、急性毒性试验（三）染毒途径的选择（三）染毒途径的选择:染毒途径（染毒途径（exposure routes）的选择需考虑：）的选择需考虑：模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的模拟人在生活和生产环境中实际接触受试物的途径和方式途径和方式；有利于不同化学物之间急性毒性有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较大小的比较；受试物的性质和用途；各种受试受试物的性质和用途；各种受试物毒性评价程序的要求等。物毒性评价程序的要求等。最常用的染毒途
10、径为最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及经口、经呼吸道、经皮及注射途径。注射途径。11/22/202214二、急性毒性试验二、急性毒性试验n经口经口(胃肠道胃肠道)接触接触 n经呼吸道接触经呼吸道接触 n经皮肤接触经皮肤接触 n注射途径接触注射途径接触11/22/202215二、急性毒性试验二、急性毒性试验n经口经口(胃肠道胃肠道)接触接触:灌胃灌胃:空腹空腹 灌胃后灌胃后2-3 h2-3 h复食复食 灌胃的体积不超过体重的灌胃的体积不超过体重的1-21-2：小鼠为小鼠为 0.2-1.0ml/0.2-1.0ml/只或只或0.1-0.5ml/10g0.1-0.5ml/10g 大鼠为大鼠为5m
11、l/5ml/只只(通常用通常用0.5-1.0ml/100g0.5-1.0ml/100g）家兔为家兔为10ml/2kg10ml/2kg体重体重 狗不超过狗不超过50ml/10kg 50ml/10kg 喂饲：喂饲：吞咽胶囊吞咽胶囊:11/22/202216二、急性毒性试验二、急性毒性试验 静式吸入接触：静式染毒静式吸入接触：静式染毒 吸入接触吸入接触 动式染毒动式染毒 动式吸入接触动式吸入接触 面罩吸入染毒面罩吸入染毒 注入接触注入接触经经呼呼吸吸道道接接触触11/22/202217二、急性毒性试验二、急性毒性试验n经皮肤接触经皮肤接触:研究外源化学物经皮肤吸收应当尽量研究外源化学物经皮肤吸收应当
12、尽量 选择皮肤解选择皮肤解剖、生理与人类较近似的剖、生理与人类较近似的 动物为对象，目前多选用动物为对象，目前多选用家兔和豚鼠家兔和豚鼠 但由于研究化学物经皮肤吸收的毒性但由于研究化学物经皮肤吸收的毒性 (求经皮求经皮LD LD 50)50)所需的实验动物较多，所需的实验动物较多，使用家兔、豚鼠不够经使用家兔、豚鼠不够经济，也常用大济，也常用大 鼠代替鼠代替11/22/202218二、急性毒性试验二、急性毒性试验经皮肤染毒程序经皮肤染毒程序 给予受试物前给予受试物前24 h，确定受试部位，确定受试部位 机械或化学脱毛机械或化学脱毛 面积面积10%15%体表面积体表面积 24H后检查去毛部位有无
13、异常现象后检查去毛部位有无异常现象 单位体重相同容积染毒，接触时间单位体重相同容积染毒，接触时间 与人实际接触该化学物的时间相仿与人实际接触该化学物的时间相仿11/22/202219二、急性毒性试验二、急性毒性试验n注射途径接触注射途径接触:常用实验动物给予受试物的体积常用实验动物给予受试物的体积(ml)注射方式注射方式 小鼠小鼠 大鼠大鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 狗狗腹腹 腔腔 0.21.0 13 25 510 515肌肌 肉肉 0.10.2 0.20.5 0.20.5 0.51 25静静 脉脉 0.20.5 12 15 310 515皮皮 下下 0.10.5 0.51 0.52 13 31011/
14、22/202220二、急性毒性试验二、急性毒性试验n（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分组:1 1查阅文献查阅文献n了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水态、熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水溶性和脂溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成溶性和脂溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成分与含量等。分与含量等。n确定使用哪一种计算方法求确定使用哪一种计算方法求LDLD5050，然后再设计剂量，然后再设计剂量分组。分组。LDLD5050的计算方法常用寇氏法、概率单位法、霍的计算方法常用寇氏法、概
15、率单位法、霍思法等。思法等。n找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的接触途径所测得的LDLD5050(LC(LC5050)值作为受试化学物的预期值作为受试化学物的预期毒性中值。毒性中值。11/22/202221二、急性毒性试验二、急性毒性试验n（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分组:2 2预试验预试验 n设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并在该剂量的上下各设计在该剂量的上下各设计l l
16、一一2 2个剂量组作为预试验剂量。个剂量组作为预试验剂量。n根据确定的剂量组进行染毒。根据确定的剂量组进行染毒。n根据预试验的死亡资料确定组距。根据预试验的死亡资料确定组距。可根据以下公式计算出剂量分组：可根据以下公式计算出剂量分组：i=(lgLDi=(lgLD9090-lgLD-lgLD1010)(n-1)(n-1)或：或：i=(lgLDi=(lgLD100100-lgLD-lgLD0 0)(n-1)(n-1)式中式中i i为组距为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差相邻的两个剂量组对数剂量之差)；n n为设计的剂量组数。为设计的剂量组数。11/22/202222二、急性毒性试验二、急性毒性试
17、验n（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分组:3 3正式试验正式试验;n一般来说、根据试验设计所选用的一般来说、根据试验设计所选用的LDLD5050计算方法来确定计算方法来确定组数。例如几率单位法、寇氏法一般设组数。例如几率单位法、寇氏法一般设6 61010个剂量组；个剂量组；霍恩法固定设霍恩法固定设4 4个剂量组。求得个剂量组。求得i i值后以最低剂量组值后以最低剂量组(LD(LD0 0或或LDLD1010)的对数剂量加上一个的对数剂量加上一个i i值，即是第二个剂量组值，即是第二个剂量组的对数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对的对数剂量，依此类推直至最高剂量组，查各自的反对数即得出
18、各组剂量的真实值。数即得出各组剂量的真实值。1 2 3 4 5 6 1 2 3 4 5 6 nLgLD0 LgLD0+i LgLD0+2i LgLD0+3i LgLD0+4i 11/22/202223二、急性毒性试验二、急性毒性试验n（五）试验周期与毒效应观察五）试验周期与毒效应观察1.中毒症状中毒症状11/22/202224二、急性毒性试验二、急性毒性试验n（五）试验周期与毒效应观察（五）试验周期与毒效应观察:2.体重体重n在观察试验动物中毒症状的过程中，应同时观察体在观察试验动物中毒症状的过程中，应同时观察体重的变化。重的变化。体重可以反映动物中毒后的整体变化。体重可以反映动物中毒后的整体
19、变化。体重改变的原因很多，若化学毒物刺激或损伤消化体重改变的原因很多，若化学毒物刺激或损伤消化道可出现试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重道可出现试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重减轻。若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利减轻。若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利用，体重也会减轻。如果化学毒物影响水的摄取或用，体重也会减轻。如果化学毒物影响水的摄取或肾功能急性损伤，也可能在体重上反映出来。所以，肾功能急性损伤，也可能在体重上反映出来。所以，对存活动物尤其是对低于对存活动物尤其是对低于LDLD5050剂量组的存活动剂量组的存活动物应在观察期物应在观察期1414天内称量其体重的变化以便了天内
20、称量其体重的变化以便了解受试物引起毒效应的持续时间。解受试物引起毒效应的持续时间。11/22/202225二、急性毒性试验二、急性毒性试验n（五）试验周期与毒效应观察（五）试验周期与毒效应观察:3.3.病理检查及其他指标病理检查及其他指标:n急性毒性试验中，对死亡的动物均应及时进行大体急性毒性试验中，对死亡的动物均应及时进行大体解剖和病理组织学检查，肉眼观察主要脏器的大体解剖和病理组织学检查，肉眼观察主要脏器的大体病理变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，有无病理变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，有无充血、出血、水肿或其它改变，对有改变的脏器进充血、出血、水肿或其它改变，对有改变的脏器进行取材
21、做组织病理学检查。对存活动物在观察期结行取材做组织病理学检查。对存活动物在观察期结束时进行大体病理检查必要时做组织病理学检查。束时进行大体病理检查必要时做组织病理学检查。根据试验需要可进一步扩大观察项目如体温、心根据试验需要可进一步扩大观察项目如体温、心电图、脑电图或进行某些生化指标测定等。电图、脑电图或进行某些生化指标测定等。11/22/202226二、急性毒性试验二、急性毒性试验n（五）试验周期与毒效应观察五）试验周期与毒效应观察4.死亡和死亡时间死亡和死亡时间n重点观察和记录每只动物死亡的时间，特别是重点观察和记录每只动物死亡的时间，特别是最早出现死亡的时间以及各个剂量组动物的死最早出现
22、死亡的时间以及各个剂量组动物的死亡数。分析中毒死亡时间的规律具有一定意义，亡数。分析中毒死亡时间的规律具有一定意义，可为深人研究化学物的毒作用机制提供参考。可为深人研究化学物的毒作用机制提供参考。11/22/202227二、急性毒性试验二、急性毒性试验n(六六)经典急性毒性试验的局限性经典急性毒性试验的局限性1.消耗的动物量大消耗的动物量大2.获得的信息有限获得的信息有限3.测得的测得的LD50仅仅是一个近似值仅仅是一个近似值4.在安全性评价中仅评价动物死亡和简单在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的症状观察是不够的，更需要的是生理学、的症状观察是不够的，更需要的是生理学、血液学及其它化验检查所
23、提供的深入细致血液学及其它化验检查所提供的深入细致的毒性信息。的毒性信息。11/22/202228外源化学物急性毒性分级（外源化学物急性毒性分级（WHO）毒性分级毒性分级大鼠一次经口大鼠一次经口LD50 (mg/kg)6只大鼠吸入只大鼠吸入4小时，死小时，死亡亡24只的浓度只的浓度(ppm)兔经皮兔经皮LD50(/mg/kg)对人可能致死的估计量对人可能致死的估计量g/kg总量总量(g/60kg)剧毒剧毒110515100011/22/202229我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法(1994)急性毒性分级急性毒性分级大鼠经口大鼠经口LD50(mg/kg)大致相当于大致相当于7
24、0kg人的致死量人的致死量6级级(极毒极毒)1稍尝稍尝,150001050克克11/22/202230一、一、基本概念基本概念二二、蓄积毒性试验方法及其评价蓄积毒性试验方法及其评价 2 蓄积毒性蓄积毒性11/22/202231 当机体反复多次接触化学物，化学物当机体反复多次接触化学物，化学物进入机体的速度进入机体的速度(或总量或总量)超过其消除速度超过其消除速度(或总量或总量)时，化学物或其代谢产物就有可时，化学物或其代谢产物就有可能在机体内逐渐增加并贮留，这种现象称能在机体内逐渐增加并贮留，这种现象称为化学毒物的为化学毒物的蓄积作用蓄积作用(accumulation)(accumulatio
25、n)。一、基本概念一、基本概念11/22/202232 蓄积作用实际上有二个含义：蓄积作用实际上有二个含义：物质蓄积物质蓄积(material accumulation)(material accumulation)当实验动物反复多次接触化学物后可以用分析方当实验动物反复多次接触化学物后可以用分析方法在体内测出物质的原型或代谢产物时，称为法在体内测出物质的原型或代谢产物时，称为。功能蓄积功能蓄积(functional accumulation)(functional accumulation)有些化学物在长期接触后，机体内虽不能测出其有些化学物在长期接触后，机体内虽不能测出其原型或代谢产物，却
26、出现了慢性毒性作用，称之原型或代谢产物，却出现了慢性毒性作用，称之为为。一、基本概念一、基本概念11/22/202233二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价目的：目的：1.1.化学毒物的化学毒物的蓄积作用是发生慢性中毒的物质基础蓄积作用是发生慢性中毒的物质基础，因此因此研究化学毒物在机体内的蓄积性是评价化学毒物能否引起研究化学毒物在机体内的蓄积性是评价化学毒物能否引起潜在慢性毒性的依据之一，也是卫生标准制订过程选择安潜在慢性毒性的依据之一，也是卫生标准制订过程选择安全系数的主要依据。全系数的主要依据。2.2.蓄积毒性试验是研究化学毒物基础毒性的重要内容之一，蓄积毒性试验是研
27、究化学毒物基础毒性的重要内容之一，目的是通过试验求出蓄积系数目的是通过试验求出蓄积系数K K，了解化学毒物蓄积毒性，了解化学毒物蓄积毒性的强弱，的强弱，并为慢性毒性试验及其他有关毒性试验的剂量选并为慢性毒性试验及其他有关毒性试验的剂量选择提供参考。择提供参考。11/22/202234 蓄积系数法蓄积系数法 蓄积系数蓄积系数(accumulation coefficient)(accumulation coefficient)是多是多次染毒使半数动物出现效应次染毒使半数动物出现效应(或死亡或死亡)的累积的累积剂量剂量EDED5050(n)(n)与一次染毒使半数动物出现相与一次染毒使半数动物出现相
28、同效应同效应(或死亡或死亡)的剂量的剂量EDED5050(1)(1)的比值，即：的比值，即：K KEDED5050(n)/ED(n)/ED5050(1)(1)K KLDLD5050(n)/LD(n)/LD5050(1)(1)二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价11/22/202235 1 1固定剂量法：固定剂量法：按照常规方法先求出按照常规方法先求出LDLD5050，然后选取相同条，然后选取相同条件的件的4040只只(或更多或更多)实验动物，分为两组，一为实验动物，分为两组，一为染毒组，一为对照组，每组至少染毒组，一为对照组，每组至少2020只，雌雄各只，雌雄各半。试验组在
29、半。试验组在1 12020l l50LD50LD5050的范围内选定的范围内选定一个剂量，每日以固定剂量、定时和相同途径一个剂量，每日以固定剂量、定时和相同途径进行染毒进行染毒,试验期间观察记录每组动物死亡数。试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，计算累积总接触剂量此时，计算累积总接触剂量LDLD5050(n)(n)，根据，根据公式计算公式计算K K值。但若接触剂量已累积达到值。但若接触剂量已累积达到5 5个个LDLD5050剂量，也可终止试验。剂量，也可终止试验。二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方
30、法及其评价11/22/202236 2 2剂量递增法：剂量递增法：二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价11/22/202237一一 亚慢性毒性作用：亚慢性毒性作用：亚慢性毒性的概念亚慢性毒性的概念 亚慢性毒性试验的目的亚慢性毒性试验的目的 亚慢性毒性试验的设计亚慢性毒性试验的设计 二二 慢性毒性作用：慢性毒性作用：慢性毒性的概念慢性毒性的概念 慢性毒性试验的目的慢性毒性试验的目的 慢性毒性试验设计慢性毒性试验设计 3 亚慢性和慢性毒性试验亚慢性和慢性毒性试验11/22/202238(一一)概念：概念：亚慢性毒性亚慢性毒性(subchronic toxicity)是指人是指人
31、 或实验动物连续接触较长时间、较大剂量或实验动物连续接触较长时间、较大剂量的外源化合物所引起的毒性效应。的外源化合物所引起的毒性效应。慢性毒性慢性毒性(chronic toxicity)是指人或实验是指人或实验动物长期动物长期(甚至终生甚至终生)反复接触低剂量的化反复接触低剂量的化学毒物所产生的毒性效应。学毒物所产生的毒性效应。一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的11/22/202239（二）试验目的：（二）试验目的：1.1.确定受试物亚慢性和慢性毒性的效应谱，对在急性及亚急性毒确定受试物亚慢性和慢性毒性的效应谱，对在急性及亚急性毒 性试验中发现的毒作用提供
32、新的信息，并发现在急性及亚急性毒性试验中发现的毒作用提供新的信息，并发现在急性及亚急性毒性试验中未发现的毒作用；性试验中未发现的毒作用；2.2.研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；3.3.研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量反应反应(效应效应)关系，确定其观关系，确定其观察到有害作用的最低剂量察到有害作用的最低剂量(LOAEL)(LOAEL)和未观察到有害作用的剂量和未观察到有害作用的剂量（NOAELNOAEL），提出此受试物的安全限量参考值），提出此受试物的安全限量参考值;4.4.亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标
33、选择提亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择提 供依据供依据;5.5.确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，为将确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，为将毒性研究结果外推到人提供依据。毒性研究结果外推到人提供依据。一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的11/22/202240 二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计 （一）实验动物选择（一）实验动物选择 亚慢性毒性试验亚慢性毒性试验 年龄：年龄：大鼠大鼠80100g 狗狗 812月月 小鼠小鼠1015g数量：数量：小动物小动物20 大动物大动物6性别：性别
34、：雌雄各半雌雄各半 慢性毒性试验慢性毒性试验年龄：年龄：大鼠大鼠 5070g 狗狗 8月月 小鼠小鼠 初断乳初断乳数量：数量：小动物小动物40 大动物大动物8性别：性别：雌雄各半雌雄各半11/22/202241（二）实验动物染毒期限：（二）实验动物染毒期限：工业毒理学工业毒理学 36个月个月食品毒理学食品毒理学 6个月个月1年年环境毒理学环境毒理学 6个月个月1年年致癌试验致癌试验 接近或等于动物的预期寿命接近或等于动物的预期寿命二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计11/22/202242二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计（二）实验动物染毒期限（二）实
35、验动物染毒期限11/22/202243 经消化道经消化道经呼吸道经呼吸道经皮肤经皮肤 二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计（三）实验动物染毒方式（三）实验动物染毒方式11/22/202244亚慢性毒性的剂量选亚慢性毒性的剂量选择择n阴性对照组阴性对照组n低剂量组低剂量组n中剂量组中剂量组n高剂量组高剂量组 急性毒性的阈剂量急性毒性的阈剂量 1/201/5 LD50n组距：组距：310倍，最倍，最低不小于低不小于2倍倍慢性毒性的剂量选择慢性毒性的剂量选择n阴性对照组阴性对照组n低剂量组低剂量组n中剂量组中剂量组n高剂量组高剂量组 亚慢性阈剂量或其亚慢性阈剂量或其1/51/2
36、1/10 LD50n组距：组距：25倍，最低不小于倍，最低不小于2倍倍二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计（四）试验分组和剂量设计（四）试验分组和剂量设计11/22/202245（五）观察指标（五）观察指标二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计11/22/2022461.一般综合性观察指标：一般综合性观察指标：n外观体征、行为活动、体重、食物利用率外观体征、行为活动、体重、食物利用率2.一般化验指标：一般化验指标：3.系统尸解和病理学检查：系统尸解和病理学检查：n（1）脏器湿重、脏器系数（脏器湿重、脏器系数（脏脏/体比值体比值）（如肝如肝/体比，即体比，即
37、(全肝湿重全肝湿重/体重体重)100100）n（2）病理学检查病理学检查4.特异性指标：特异性指标：二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计（五）观察指标（五）观察指标11/22/202247二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计11/22/2022484 局部毒性作用局部毒性作用观察项目观察项目评分评分 红斑与焦茄形成红斑与焦茄形成 无红斑无红斑0 很轻微红斑很轻微红斑1 易于察觉的红斑易于察觉的红斑2 中度至严重红斑中度至严重红斑3 严重红斑至轻度焦茄形成严重红斑至轻度焦茄形成4水肿形成水肿形成 无水肿无水肿0 很轻微水肿很轻微水肿1 轻度水肿（边缘隆起）
38、轻度水肿（边缘隆起）2 中度水肿（隆起约中度水肿（隆起约1mm）3 重度水肿（隆起大于重度水肿（隆起大于1mm 并超出涂抹范围）并超出涂抹范围）4评价斑贴后评价斑贴后24小时反应和小时反应和72小时反应，取其平均值，称为原发性刺激指数。小时反应，取其平均值，称为原发性刺激指数。2分者为轻度刺激，分者为轻度刺激，25分者为中度刺激，分者为中度刺激，6分者为重度刺激分者为重度刺激11/22/2022504 局部毒性作用局部毒性作用诱导接触（诱导接触（induction exposure）：以较低或中等浓）：以较低或中等浓度受试物对皮肤重复染毒，该阶段一般需要度受试物对皮肤重复染毒，该阶段一般需要1
39、014天天（诱导阶段）。（诱导阶段）。激发接触（激发接触（challenge exposure）：间隔）：间隔1014天后，天后，用激发剂量（低于诱导剂量）的受试物处理未染毒的皮用激发剂量（低于诱导剂量）的受试物处理未染毒的皮肤部位，观察皮肤反应。肤部位，观察皮肤反应。11/22/2022514 局部毒性作用局部毒性作用Draize试验：使用试验：使用9只兔子，每只兔子的一只眼内滴入只兔子，每只兔子的一只眼内滴入0.1ml受试物，其中受试物，其中3只兔子于滴药后只兔子于滴药后2秒钟，用秒钟，用20ml温水温水冲洗，另外冲洗，另外3只在滴药后只在滴药后4秒钟用温水冲洗，其余秒钟用温水冲洗，其余3
40、只保留药只保留药液。肉眼或裂隙镜观察处理后液。肉眼或裂隙镜观察处理后24小时、小时、48小时、小时、72小时、小时、4天、天、7天眼的反应。天眼的反应。角膜反应：溃疡、浑浊角膜反应：溃疡、浑浊虹膜反应：粘连、肿胀、周围角膜充血虹膜反应：粘连、肿胀、周围角膜充血结膜反应：红肿、球结膜水肿、渗出结膜反应：红肿、球结膜水肿、渗出眼刺激分级评分标准眼刺激分级评分标准 表表 现现分级分级角膜角膜 无溃疡和浑浊0 散在和弥散的浑浊（并非正常光泽的暗迹）1 虹膜细部清晰可见1 易见的半透明区域1 虹膜细部轻微模糊2 珍珠色区域，虹膜细部不可见，瞳孔大小难辨认3 不透明角膜，无法通过角膜见虹膜4虹膜虹膜 正常
41、0 明显加深的皱褶、充血、肿胀，中度环角膜充血或出血（以 上症状之一或几种），虹膜对光学仍有反应1 对光无反应，出血，大体破坏（其中之一或全部）2眼刺激分级评分标准（续）眼刺激分级评分标准（续）表表 现现分级分级结膜结膜 发红（睑结膜和球结膜，角膜和虹膜）0 血管正常0 肯定的某些血管充血（出血）1 弥散、紫色、个别血管不易察光2 弥散的洋红色3球结膜水肿、眼睑和（或）睑结膜球结膜水肿、眼睑和（或）睑结膜 无肿胀0 任何肿胀（包括睑结膜）1 明显肿胀并伴有部分睑外翻2 肿胀并伴有睑半闭3 肿胀并伴有超过一半的眼睑闭合45 LD50 计算方法计算方法n霍恩（Horm）氏法n改进寇氏法11/22/202265
