1、 海南大学学士论文答辩海南大学学士论文答辩论文题目：迷迭香中鼠尾草酸的提取工艺研究论文题目：迷迭香中鼠尾草酸的提取工艺研究 指导老师：指导老师：班班 级：级：姓姓 名：名：学学 号：号：LOGOB2uContents前言前言1鼠尾草酸的分析方法鼠尾草酸的分析方法2鼠尾草酸提取方法的选择鼠尾草酸提取方法的选择 3匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 456柱层析法纯化鼠尾草酸柱层析法纯化鼠尾草酸 总结总结LOGOB3前言前言迷迭香迷迭香u 主要分布：法国、西班牙、南斯拉夫、突尼斯、摩洛哥、保加利亚主要分布：法国、西班牙、南斯拉夫、突尼斯、摩洛哥、保加利亚 ，等，等u 主要成分：萜类、黄酮
2、类、酚酸类及其他化学物质主要成分：萜类、黄酮类、酚酸类及其他化学物质 u 抗氧化成分：鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酸、迷迭香酚、表迷迭香酚，等抗氧化成分：鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酸、迷迭香酚、表迷迭香酚，等 u 主要作用：主要作用：抗氧化、抑菌、抗病毒、抗癌及作香料，等抗氧化、抑菌、抗病毒、抗癌及作香料，等1LOGOB4前言前言鼠尾草酸（鼠尾草酸（CA）u 分子式：分子式：C20H28O4 结构式：结构式：u 主要作用：主要作用：抗氧化、抗癌、抗炎及美容，等抗氧化、抗癌、抗炎及美容，等 u 意义：随着科技的不断发展及其市场需求量的不断扩大，意义：随着科技的不断发展及其市场需求量的不断扩大，对鼠
3、尾草酸的要求不断提高。对鼠尾草酸的要求不断提高。目前国内对鼠尾草酸的提取率并不理想，目前国内对鼠尾草酸的提取率并不理想，因此，对迷迭香中鼠尾草酸的提取工艺研究有重大意义。因此，对迷迭香中鼠尾草酸的提取工艺研究有重大意义。本实验主要是建立一个最佳的提取方法及工艺，本实验主要是建立一个最佳的提取方法及工艺，以提高迷迭香中鼠尾草酸的提取率。以提高迷迭香中鼠尾草酸的提取率。1LOGOB5色谱条件的建立色谱条件的建立 色谱柱：色谱柱：Waters C18（1504.6 mm,5 um）；）；流动相：乙腈流动相：乙腈-0.5%磷酸水溶液（磷酸水溶液（75:25）；）；流速：流速：1.0 mL/min；检测
4、器：紫外检测器；检测器：紫外检测器；检测波长：检测波长：230 nm；灵敏度灵敏度:0.16 AFUS；柱温柱温:室温（室温（25）。）。鼠尾草酸的分析方法鼠尾草酸的分析方法2LOGOB6u标准曲线绘制标准曲线绘制配配1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml混合标准品溶液混合标准品溶液，溶解液使用甲醇溶解液使用甲醇鼠尾草酸的分析方法鼠尾草酸的分析方法2LOGOB7取1ml经0.45m 微孔滤膜过滤之后进行HPLC检测，得C1提取液提取液置于60烘箱中烘干,取烘干样称量得m2,用无水乙醇溶解、定容于25 mL棕色容量瓶,。过滤后进行HPLC检测.得C2鼠尾草酸的分
5、析方法鼠尾草酸的分析方法2l鼠尾草酸提取量(mg/g)：q=c1 v1 m l鼠尾草酸纯度(%)：p=c2 v2 m2 l鼠尾草酸提取率(%)：w=c2 v2 ml注：v1为提取液体积(mL),m为原料(迷迭香)质量(g)；v2 为乙醇溶解液体积25mlLOGOB8u实验部分大纲实验部分大纲Phase 1Phase 2Phase 3提取方法的选择提取方法的选择提取工艺优化提取工艺优化分离纯化分离纯化LOGOB9匀浆匀浆提取法提取法超声波超声波提取法提取法 回流回流提取法提取法 常温浸常温浸提法提法其他其他方法方法提取方法提取方法鼠尾草酸提取方法的选择鼠尾草酸提取方法的选择 3LOGOB10鼠尾
6、草酸提取方法的选择鼠尾草酸提取方法的选择 3不同提取方法各项指标的比较不同提取方法各项指标的比较提取方法提取温度/提取时间/h提取率/%超声波提取法250.51.194回流提取法8020.947常温浸提法25240.742匀浆提取法250.0671.153u准确称取迷迭香干叶准确称取迷迭香干叶10g，加入体积溶剂为，加入体积溶剂为80%乙醇溶液乙醇溶液200ml置于烧瓶中置于烧瓶中。其他条件根据下表进行实验，并计算出该方法下所。其他条件根据下表进行实验，并计算出该方法下所得到的鼠尾草酸提取率。得到的鼠尾草酸提取率。u匀浆提取和其它提取方法相比匀浆提取和其它提取方法相比,匀浆提取所用时间短匀浆提
7、取所用时间短,不需加温不需加温,提取提取率高率高,因此因此,匀浆提取在提高产率、节省时间等方面具有明显的优势。匀浆提取在提高产率、节省时间等方面具有明显的优势。LOGOB11匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4匀浆提取原理图匀浆提取原理图匀浆提取是指生物组织通过加入溶剂进行组织匀浆，以提取活体组匀浆提取是指生物组织通过加入溶剂进行组织匀浆，以提取活体组织中有效成分的一种提取方法，将植物细胞膜和细胞壁破裂，溶剂织中有效成分的一种提取方法，将植物细胞膜和细胞壁破裂，溶剂便较易进入细胞内部，活性物质便溶解于溶剂中，再由传质扩散作便较易进入细胞内部，活性物质便溶解于溶剂中，再由传质扩散作用
8、，进入溶剂主体。所以有效成分的提取实际上是目标成分从细胞用，进入溶剂主体。所以有效成分的提取实际上是目标成分从细胞内释放、扩散到溶剂中的非稳态非平衡过程。内释放、扩散到溶剂中的非稳态非平衡过程。LOGOB12实验操作流程实验操作流程匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4迷迭香干叶迷迭香干叶蒸馏法取精油蒸馏法取精油单因素实验单因素实验正交实验正交实验优化条件下提取优化条件下提取匀匀浆浆提提取取分分析析计计算算LOGOB13蒸馏法提取精油蒸馏法提取精油匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4l条件条件p60g迷迭香叶迷迭香叶p600ml蒸馏水蒸馏水p加热加热2.5小时小时l装置图
9、装置图LOGOB14乙醇浓度选择乙醇浓度选择 匀浆法提取鼠尾草酸研究（单因素实验）匀浆法提取鼠尾草酸研究（单因素实验）4l条件条件p10g迷迭香叶迷迭香叶p150ml不同浓度乙醇不同浓度乙醇p匀浆匀浆4min（乙醇浓度：（乙醇浓度：50%、60%、70%、80%、90%、100%）l 结果结果随着乙醇浓度体积分数的升高，鼠尾草酸溶出程度提取量也随随着乙醇浓度体积分数的升高，鼠尾草酸溶出程度提取量也随之增加。但当乙醇浓度达到之增加。但当乙醇浓度达到80%时，鼠尾草酸和鼠尾草酚的溶时，鼠尾草酸和鼠尾草酚的溶出程度均达到最大值，继续增加乙醇的体积分数时，鼠尾草酸出程度均达到最大值，继续增加乙醇的体积
10、分数时，鼠尾草酸的提取量并无明显升高，反而，鼠尾草酸的纯度明显下降的提取量并无明显升高，反而，鼠尾草酸的纯度明显下降。l结论结论选择体积分数为选择体积分数为80%的乙醇作为优化提取溶剂的乙醇作为优化提取溶剂 LOGOB15提取溶剂提取溶剂PH值选择值选择 匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4l条件条件p10g迷迭香叶迷迭香叶p150ml80%乙醇乙醇p匀浆匀浆4minp盐酸和氢氧化钠盐酸和氢氧化钠 调节调节PH（PH值：值：2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0）l 结果结果在在PH值为值为3-4的时候鼠尾草酸氧化成鼠尾草酚的量
11、最少的时候鼠尾草酸氧化成鼠尾草酚的量最少，因，因为酸性条件所提供的质子有助于保护不向鼠尾草酚转化，但是为酸性条件所提供的质子有助于保护不向鼠尾草酚转化，但是酸性太强对设备的腐蚀性增加。酸性太强对设备的腐蚀性增加。l结论结论选择提取溶剂的选择提取溶剂的PH值为值为3.0作为最佳提取溶剂的作为最佳提取溶剂的PH值值 LOGOB16提取溶剂调节酸种类的选择提取溶剂调节酸种类的选择 匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4l条件条件p10g迷迭香叶迷迭香叶p150ml80%乙醇乙醇p匀浆匀浆4min（调节酸种类：盐酸、硫酸、柠檬酸、磷酸（调节酸种类：盐酸、硫酸、柠檬酸、磷酸）l 结果结果使用磷
12、酸作为调节酸时鼠尾草酸转化成鼠尾草酚的量最多，保使用磷酸作为调节酸时鼠尾草酸转化成鼠尾草酚的量最多，保护作用最差，在达到相同护作用最差，在达到相同PH值的时候，盐酸的用量最少值的时候，盐酸的用量最少。l结论结论选择盐酸作为最佳酸性调节物质选择盐酸作为最佳酸性调节物质。LOGOB17料液比的选择料液比的选择 匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4l条件条件p10g迷迭香叶迷迭香叶p80%乙醇乙醇p匀浆匀浆4minp盐酸调节盐酸调节PH为为3.0（料液比：（料液比：1:6、1:8、1:10、1:12、1:14、1:16、1:20 ）l 结果结果随着料液比的增大，鼠尾草酸的提取量也一直在增
13、加，当料液随着料液比的增大，鼠尾草酸的提取量也一直在增加，当料液比达到比达到1:12后，再增加料液比，鼠尾草酸的提取量变化量较少。后，再增加料液比，鼠尾草酸的提取量变化量较少。l结论结论选择料液比为选择料液比为1:12优化条件优化条件 LOGOB18匀浆提取时间的选择匀浆提取时间的选择 匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4l条件条件p10g迷迭香叶迷迭香叶p120ml80%乙醇乙醇pPH为为3.0（时间：（时间：1、2、3、4、5、6、7min）l 结果结果随着提取时间的增加，鼠尾草酸的提取量也不断增加，但在四随着提取时间的增加，鼠尾草酸的提取量也不断增加，但在四分钟后基本无明显变
14、化进一步延长匀浆时间，可能会导致某些分钟后基本无明显变化进一步延长匀浆时间，可能会导致某些本不易溶出的杂质成分也被溶剂溶出，从而使鼠尾草酸的纯度本不易溶出的杂质成分也被溶剂溶出，从而使鼠尾草酸的纯度有所下降。从提取效率及节能的方面考虑，应选择在最短的时有所下降。从提取效率及节能的方面考虑，应选择在最短的时间内，达到近于最好的提取效果。间内，达到近于最好的提取效果。l结论结论选择匀浆时间选择匀浆时间4min作为优化条件作为优化条件 LOGOB19正交实验正交实验匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4正交实验因数水平表正交实验因数水平表A乙醇浓度（%）B溶剂PH值C提取时间（min）D料
15、液比70231:1080341:1290451:14LOGOB20正交实验结果正交实验结果匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4因素实验号ABCD鼠尾草酸的提取率%鼠尾草酸的纯度%综合评价因数170231:100.87520.63529.385270341:121.08221.28932.109370451:141.10019.48230.482480241:141.23621.76534.125580351:101.12320.47331.703680431:121.25521.05433.604790251:121.31019.48232.582890331:141.28720.
16、56333.433990441:101.25920.36532.955正交实验结果数据表正交实验结果数据表定义：提取率数值定义：提取率数值的十倍与纯度的数的十倍与纯度的数值之和为综合评价值之和为综合评价因数因数LOGOB21正交实验结果正交实验结果匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4以鼠尾草酸提取率为指标，极差分析表以鼠尾草酸提取率为指标，极差分析表因素ABCDk11.1091.1401.1391.086k21.2051.1641.1921.216k31.2851.2051.1781.208R0.2660.0650.0530.130结论：影响匀浆提取鼠尾草酸的提取率的各因素主次结论
17、：影响匀浆提取鼠尾草酸的提取率的各因素主次顺序为：乙醇浓度顺序为：乙醇浓度 料液比料液比 溶剂溶剂PH值值 提取时间提取时间 LOGOB22正交实验结果正交实验结果匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4以鼠尾草酸的纯度指标，极差分析表以鼠尾草酸的纯度指标，极差分析表结论：影响匀浆提取鼠尾草酸的纯度的各因素主次顺结论：影响匀浆提取鼠尾草酸的纯度的各因素主次顺序为：提取时间序为：提取时间 乙醇浓度乙醇浓度 溶剂溶剂PH值值 料液比料液比 因素ABCDk120.47220.62720.75120.491k221.09720.77821.14320.611k320.13720.30019.8
18、1220.603R0.9600.4781.3310.120LOGOB23正交实验结果正交实验结果匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4综合评价分析表综合评价分析表结论：得出最佳的提取工艺条件结论：得出最佳的提取工艺条件 A2B2C3D2，即乙醇，即乙醇浓度为浓度为80%，溶剂，溶剂PH值为值为3.0（HCl调节），提取时调节），提取时间为间为5min及料液比为及料液比为1:12。因素ABCDk130.65932.03132.14131.348k233.14432.41533.06332.765k332.99032.34731.58932.680R2.4850.3841.4741.41
19、7LOGOB24优化条件下进行匀浆提取鼠尾草酸优化条件下进行匀浆提取鼠尾草酸 匀浆法提取鼠尾草酸研究匀浆法提取鼠尾草酸研究 4标准品谱图标准品谱图样品谱图样品谱图l结果：结果：提取率达到提取率达到1.35%，平均纯度达到平均纯度达到22.3%LOGOB255柱层析法纯化鼠尾草酸柱层析法纯化鼠尾草酸 l硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离，一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程即是吸附、解吸、再
20、吸附、再解吸过程。具体流程操作如下图。过程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。具体流程操作如下图。迷 迭 香 叶 干迷 迭 香 叶 干200g料液比：1：15蒸馏提取精油l乙醇浓度：80%l溶剂PH：3.0（HCl调节）l提取时间：5minl料液比：1：12匀浆提取提取液过滤滤液60烘干准确称量5g30ml蒸馏水，水洗40水域振荡30min过滤沉淀100ml乙醇溶解20g活性碳脱色60水域振荡30min过滤滤液50减压浓缩60烘箱烘干得粗提物硅胶柱层析分段收集流分剂HPLC分段检测回收洗脱剂烘干得产品HPLC检测LOGOB265柱层析法纯化鼠尾草酸柱层析法纯化鼠尾草酸 l硅胶柱层析硅胶柱层析l
21、柱层析条件的建立柱层析条件的建立 柱层析条件的建立柱层析条件的建立 p洗脱剂：乙酸乙酯p洗脱剂比例：乙酸乙酯:正丁烷=4:6p硅胶粒度：100-200目p硅胶初始含水量：6%p径高比：1/10p流速：4ml/minp负载量：0.3g粗提物:20g硅胶l鼠尾草酸洗脱曲线鼠尾草酸洗脱曲线注：接样管容量为注：接样管容量为10mlLOGOB275柱层析法纯化鼠尾草酸柱层析法纯化鼠尾草酸 l硅胶柱层析结果硅胶柱层析结果柱层析条件的建立柱层析条件的建立 l产品液相色谱图产品液相色谱图l结论结论鼠尾草酸产品鼠尾草酸产品 纯度为纯度为76.5%LOGOB28u分析方法的建立分析方法的建立u提取方法的选择提取方
22、法的选择u匀浆法提取工艺优化匀浆法提取工艺优化u硅胶柱层析法纯化硅胶柱层析法纯化CA 盐酸调节盐酸调节PH值为值为3.0的体积分数为的体积分数为80%乙醇作乙醇作为提取溶剂，提取时间为为提取溶剂，提取时间为5min及料液比为及料液比为1：12.鼠尾草酸线性回归方程鼠尾草酸线性回归方程y=2E+07x+234580 6总结总结匀浆提取操作简单、快速、充匀浆提取操作简单、快速、充分，并能达到较高的提取效果分，并能达到较高的提取效果 浓缩物真空干燥得产物纯度可达浓缩物真空干燥得产物纯度可达到到76.5%的鼠尾草酸产品的鼠尾草酸产品。LOGOB29l感谢感谢老师老师的悉心指导老师老师的悉心指导。l感谢感谢等同学在实验过程中的大力支持和帮助等同学在实验过程中的大力支持和帮助l同时论文评阅人和答辩委员会所有老师致以最诚挚的谢意同时论文评阅人和答辩委员会所有老师致以最诚挚的谢意
