1、细胞表面分子的检测与分析细胞表面分子的检测与分析一、新鲜实体组织样本的制备一、新鲜实体组织样本的制备n 酶消化法。常用的酶类试剂：胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胶原蛋白酶等n 机械法。1、剪碎法 2、网搓法 3、研磨法n 化学处理法。常用试剂：0.2%EDTA 0.25%胰酶+0.2%EDTA注意注意：除消化过程外，其余步骤最好在4度环境下操作，提高 细胞活性。四、贴壁细胞单细胞悬液的制备（1）将培养细胞用0.04EDTA或0.25胰酶消化37分钟，至光镜下见到贴壁细胞变圆还没有漂浮为止，弃消化 液，加PBS；（2）用吸管将细胞从瓶壁上轻轻吹打下来，移入离心管中；（3）离心，1000r/mi
2、n，5min；（4）加PBS洗两遍；（5）PBS重悬，将细胞吹打均匀；（6）荧光标记。口诀：横平竖直 溶血，即裂解红细胞。它是流式细胞术分析白细胞的先决条件。溶血不好，白细胞群不能很好分开，溶血好坏直接影响检测结果。因此，必须对溶血过程进行严格控制。实验：人外周血T淋巴细胞亚群的 检测与分析淋巴细胞淋巴细胞单核细胞单核细胞粒细胞粒细胞这三群细胞分别由具有不同功能的细胞组成这些细胞数量不等，甚至非常稀少这些细胞表达不同的标记物，是用来区分它们的基础1.取新鲜抗凝血100ul，置于FCM测量管中；2.直接标记法：加入带荧光标记抗人的单克隆抗体 10ul，充分混匀，4闭光孵育2030min;3.加入溶血剂A液600ul,轻轻振荡15s,加入溶血剂B液260ul,轻轻振荡15s，加入溶血剂C液100ul,振荡10s,上机检测。ACK溶血剂:加入2mlACK溶血剂，充分混匀，反应5min,1000r/min离心5min，去上清；重复一遍，用PBS洗涤1遍，收集细胞上机检测。Thank you！
