1、实验四实验四类风湿因子的检测类风湿因子的检测1类风湿因子的检测类风湿因子的检测 类风湿因子（类风湿因子（RF）是一种抗人或动物）是一种抗人或动物IgG分分子子Fc片段抗原决定簇的抗体，是以片段抗原决定簇的抗体，是以变性变性IgG为靶为靶抗原的自身抗体。抗原的自身抗体。RF最初由最初由Rose等（等（1984年）年）在类风湿性关节炎（在类风湿性关节炎（RA）患者血清中发现。）患者血清中发现。RA患者体内有产生患者体内有产生RF的的B细胞克隆，在变性细胞克隆，在变性IgG或或EB病毒的直接作用下可大量合成病毒的直接作用下可大量合成RF。RF主要为主要为19S的的IgM，也有，也有7S的的IgG和和
2、IgA，它与天然，它与天然IgG结合的能力较差，最易与人和动物的变性结合的能力较差，最易与人和动物的变性IgG或或免疫复合物中的免疫复合物中的IgG结合。结合。2 RF与体内变性的与体内变性的IgG结合形成免疫复合物后结合形成免疫复合物后可活化补体，或被吞噬细胞吞噬。由吞噬细胞释可活化补体，或被吞噬细胞吞噬。由吞噬细胞释放的溶酶体酶、活化肽、胶原酶、前列腺素放的溶酶体酶、活化肽、胶原酶、前列腺素E2等等物质，在细胞因子和炎性粘附分子的参与下，致物质，在细胞因子和炎性粘附分子的参与下，致组织炎性损伤，可使患者发生骨关节炎及血管炎。组织炎性损伤，可使患者发生骨关节炎及血管炎。3类风湿性关节炎 类风
3、湿关节炎类风湿关节炎(RA)(RA)：其病因及发病机制仍其病因及发病机制仍不完全明了不完全明了,推测可能为推测可能为外源性感染外源性感染作用于作用于遗传易感个体遗传易感个体,导致机体导致机体免疫系统紊乱免疫系统紊乱,进进而引起关节滑膜、软骨组织慢性炎症和破坏而引起关节滑膜、软骨组织慢性炎症和破坏的的自身免疫性疾病自身免疫性疾病。4 RF在在RA患者中的阳性检出率很高，可达患者中的阳性检出率很高，可达79.6%，是是RA患者血清中常见的自身抗体。高滴度患者血清中常见的自身抗体。高滴度RF阳性阳性支持对早期支持对早期RA的诊断，在的诊断，在RA患者，患者，RF的滴度与患的滴度与患者的临床表现呈正相
4、关，即随症状加重而效价升高。者的临床表现呈正相关，即随症状加重而效价升高。但但RF不是仅在不是仅在RA患者中出现，在患者中出现，在SLE、进行性全、进行性全身性硬化症等自身免疫性疾病患者和部分老年人中身性硬化症等自身免疫性疾病患者和部分老年人中RF的阳性率可达的阳性率可达28.9%50%。因而。因而RF对对RA患者患者并不具有严格特异性，并不具有严格特异性，RF阳性不能作为诊断阳性不能作为诊断RA的的惟一标准。尽管在多种疾病中可有惟一标准。尽管在多种疾病中可有RF阳性，但滴均阳性，但滴均较低（较低（40IU/ml），随着），随着RF滴度增加，滴度增加，RF对对RA的诊断特异性增高。的诊断特异性
5、增高。5类风湿因子的病理作用（一）类风湿因子的病理作用（一）类风湿性血管炎，在外周血液循环中，类类风湿性血管炎，在外周血液循环中，类风湿性关节炎特异性风湿性关节炎特异性RFRF与自身与自身IgGIgG分子结合分子结合形成稳定的免疫复合物，部分被单核形成稳定的免疫复合物，部分被单核-吞噬吞噬细胞系统清除，部分沉积于血管壁，激活细胞系统清除，部分沉积于血管壁，激活补体导致血管炎。补体导致血管炎。6类风湿因子的病理作用类风湿因子的病理作用（二）（二）关节型损伤由于类风湿关节滑液中缺少正关节型损伤由于类风湿关节滑液中缺少正常的常的IgGIgG分子，分子，IgG-RFIgG-RF自身结合形成多聚体自身结
6、合形成多聚体复合物，复合物，IgG-RFIgG-RF多聚体沉积于关节表面激多聚体沉积于关节表面激活补体引起关节性损伤。活补体引起关节性损伤。7 常见的RF有IgM型、IgG型、IgA型和IgE型，其中IgM和IgA类风湿因子易于检测，而IgG类风湿因子难于测出。IgA类风湿因子及IgM类风湿因子对类风湿关节炎诊断有较好的参考价值。IgM型RF：在RA患者血清中IgM型RF效价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时，通常提示患者预后不良。8 IgGIgG型型RFRF：在：在RARA患者血清或滑膜液中患者血清或滑膜液中IgGIgG型型RFRF的出现的出现与患者的滑膜炎、血管炎和关节的症状密切相关，
7、与患者的滑膜炎、血管炎和关节的症状密切相关，此类此类RFRF常伴随高滴度的常伴随高滴度的IgMIgM型型RFRF在同一在同一RARA患者血清患者血清或滑膜液中出现。在正常人及非或滑膜液中出现。在正常人及非RARA患者中很难检测患者中很难检测出出IgGIgG型型RFRFIgGIgG型型RFRF在关节软骨表面的沉积可激活在关节软骨表面的沉积可激活补体引起关节的炎性损伤，因此滑膜液中检测出补体引起关节的炎性损伤，因此滑膜液中检测出IgGIgG型型RFRF比血清中检出比血清中检出IgMIgM型型RFRF更具病理意义。更具病理意义。RFRF检测方法一般有检测方法一般有胶乳凝集试验胶乳凝集试验、双抗原夹心
8、、双抗原夹心ELISAELISA法、速率散射比浊法法、速率散射比浊法 。一般医院主要采用胶乳凝集法和酶联免疫吸附法测一般医院主要采用胶乳凝集法和酶联免疫吸附法测定类风湿因子。定类风湿因子。9类风湿因子的检测类风湿因子的检测 类风湿因子的主要类型：类风湿因子的主要类型：IgMIgM型型 特点：高凝集、易于沉淀特点：高凝集、易于沉淀 测定方法为：测定方法为：1 1、乳胶凝集法、乳胶凝集法2 2、酶联免疫吸附法、酶联免疫吸附法3 3、乳胶免疫比浊法、乳胶免疫比浊法10胶乳凝集试验检测胶乳凝集试验检测RF11正向间接凝集试验正向间接凝集试验测测RFRF12原理（胶乳凝集试验）原理（胶乳凝集试验）类风湿
9、因子（类风湿因子（RFRF）是一组）是一组抗变性抗变性IgGIgG的自身抗体的自身抗体，它能与人或动物的变性它能与人或动物的变性IgGIgG结合，而不与正常人结合，而不与正常人IgGIgG发生凝集反应。发生凝集反应。将处理过的人将处理过的人IgGIgG与胶乳颗粒共价交联，使其吸附与胶乳颗粒共价交联，使其吸附于胶乳颗粒载体上，称为于胶乳颗粒载体上，称为致敏胶乳颗粒致敏胶乳颗粒。当待检。当待检血清中有血清中有RFRF时，则与致敏胶乳颗粒上的变性时，则与致敏胶乳颗粒上的变性IgGIgG发发生反应，出现凝集现象。生反应，出现凝集现象。13（正向）间接凝集反应原理示意图（正向）间接凝集反应原理示意图 （
10、变性（变性IgG）14主要的试剂和器材主要的试剂和器材 类风湿胶乳诊断试剂类风湿胶乳诊断试剂 RFRF阴性对照阴性对照 RFRF阳性对照阳性对照 反应板反应板 搅拌棒搅拌棒15操作步骤操作步骤（1）在）在3块载玻片上分别加一滴块载玻片上分别加一滴RF阳性血清、阳性血清、RF阴性血清及待检血清。阴性血清及待检血清。（2）加）加20ul IgG致敏的胶乳于各血清样品中，致敏的胶乳于各血清样品中，轻微晃动载玻片混匀。轻微晃动载玻片混匀。（3）1 min 后观察凝集反应发生情况后观察凝集反应发生情况16结果观察和判断结果观察和判断 在室内的光线下观察，有清晰的凝集颗粒在室内的光线下观察，有清晰的凝集颗
11、粒出现，且液体澄清者为出现，且液体澄清者为RFRF阳性。阳性。若需做半定量测定，可将血清作倍比稀释，若需做半定量测定，可将血清作倍比稀释，重复上述测定，以出现凝集的血清最高稀重复上述测定，以出现凝集的血清最高稀释度为释度为RFRF的效价（滴度）。的效价（滴度）。17 注意事项注意事项（1）器材要洁净、血清要新鲜、以确保结果）器材要洁净、血清要新鲜、以确保结果可靠可靠（2）注意阴性、阳性对照的设立）注意阴性、阳性对照的设立（3）注意血清及致敏胶乳加样量的比例）注意血清及致敏胶乳加样量的比例18直接凝集试验（玻片法）直接凝集试验（玻片法）-测测ABOABO血型血型19原理原理 天然的颗粒性抗原（如
12、细胞、细菌等）与相应抗天然的颗粒性抗原（如细胞、细菌等）与相应抗体在适宜条件下反应，出现肉眼可见的凝集物，体在适宜条件下反应，出现肉眼可见的凝集物，称为直接凝集反应。称为直接凝集反应。玻片法属于玻片法属于定性定性试验。试验。2021主要的试剂和器材主要的试剂和器材 抗抗A A血型定型试剂血型定型试剂 抗抗B B血型定型试剂血型定型试剂 搅拌棒搅拌棒 玻片玻片22步骤步骤 取玻片取玻片1 1块，左上角和右上角分别标上块，左上角和右上角分别标上“A A”和和“B B”用采血针采指尖血（用采血针采指尖血（左手无名指尺侧左手无名指尺侧），将血滴在），将血滴在玻片的两端。玻片的两端。在两血滴上分别滴上抗
13、在两血滴上分别滴上抗A A标准血清和抗标准血清和抗B B标准血清，标准血清，用搅拌棒搅匀。用搅拌棒搅匀。手持玻片，前后旋转摇动，促使血清与红细胞充分手持玻片，前后旋转摇动，促使血清与红细胞充分混合，用肉眼观察有无凝集。混合，用肉眼观察有无凝集。23结果观察和判断结果观察和判断 有凝集时红细胞相互聚集成团，出现大小不等的有凝集时红细胞相互聚集成团，出现大小不等的颗粒。颗粒。24注意事项注意事项 玻片应洁净、干燥、中性，以防止和减少玻片应洁净、干燥、中性，以防止和减少非特异性凝集。非特异性凝集。室温低于室温低于1010时，易出现冷凝集而造成的时，易出现冷凝集而造成的结果。结果。25临床意义临床意义
14、 在美国风湿病协会所规定的类风湿性关节炎诊断标在美国风湿病协会所规定的类风湿性关节炎诊断标准中，本试验是诊断标准之一。本试验对类风湿性准中，本试验是诊断标准之一。本试验对类风湿性疾病的阳性率约疾病的阳性率约8090。类风湿因子并非类风湿病所特有，部分正常人及肝类风湿因子并非类风湿病所特有，部分正常人及肝炎病人也可呈阳性反应，炎病人也可呈阳性反应，75岁以上的老年人阳性率岁以上的老年人阳性率较高。据报导，在类风湿病活动期内，（多数报导较高。据报导，在类风湿病活动期内，（多数报导认为）此期的阳性率为认为）此期的阳性率为6080，非活动期的阳性，非活动期的阳性率为率为2050。风湿热的阳性率约为。风湿热的阳性率约为1040，风，风湿病以外的疾病仍有湿病以外的疾病仍有4 10 呈阳性。有呈阳性。有10的正的正常人也呈阳性，并随着年龄的增加而阳性率也升高。常人也呈阳性，并随着年龄的增加而阳性率也升高。尤其是尤其是60岁以上者增高较为常见。岁以上者增高较为常见。26
