1、11/26/20221实验五白细胞分类计数实验二实验二11/26/20222实验五白细胞分类计数实验五白细胞分类计数q白细胞分类计数是将血液制备成涂片，白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类态特征进行分类计数。通常分类100100个白细胞，计算得出各种白细胞所占个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比。百分比。11/26/20223 瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰美兰（M+）和带负电的酸性和带负电的酸性伊红（伊红（E-）离子。细胞的离子。细胞的染色既有染色既有物理
2、的吸附作用物理的吸附作用，又有，又有化学的亲和作用化学的亲和作用。各种细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力各种细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力也不一样，故可呈不同的着色特点。也不一样，故可呈不同的着色特点。瑞氏染色原理：瑞氏染色原理：11/26/20224 血红蛋白、嗜酸性颗粒均为碱性物质，故与酸血红蛋白、嗜酸性颗粒均为碱性物质，故与酸性染料伊红结合而染成红色，呈性染料伊红结合而染成红色，呈嗜酸性嗜酸性。细胞核的核蛋白为酸性物质，故与碱性染料美细胞核的核蛋白为酸性物质，故与碱性染料美兰结合，染成深蓝色或深紫红色，呈兰结合，染成深蓝色或深紫红色，呈嗜碱性嗜碱性。中性颗粒与美兰和伊红同时结
3、合而染为淡紫红中性颗粒与美兰和伊红同时结合而染为淡紫红色，呈色，呈嗜中性嗜中性。染色原理：染色原理：11/26/20225器材器材 光学显微镜光学显微镜 推片，载玻片推片，载玻片试剂试剂 Wright染液染液 Wright 1.0g 甲醇甲醇 600ml 磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（PH6.46.8）香柏油香柏油标本来源标本来源 EDTA-K2抗凝全血抗凝全血 11/26/20226实验五白细胞分类计数实验五白细胞分类计数v1)1)推片：血膜推片：血膜厚薄适中，边缘整齐，厚薄适中，边缘整齐，外观呈舌形，头、体、尾分明外观呈舌形，头、体、尾分明。v2）干燥）干燥v3）标记）标记 1.1.制备血涂
4、片制备血涂片 11/26/202272 2染色染色 1 1）准备：血膜干透后，用蜡笔在两端划线，以防）准备：血膜干透后，用蜡笔在两端划线，以防止染色时染液外溢。将血涂片放染色架上。止染色时染液外溢。将血涂片放染色架上。2 2）加染液：在涂片上滴加瑞氏染液）加染液：在涂片上滴加瑞氏染液数滴数滴，以染液，以染液覆盖整个血膜为度，稍静置覆盖整个血膜为度，稍静置1min1min。3 3）加缓冲液：滴加缓冲液等量或多些，与上述染）加缓冲液：滴加缓冲液等量或多些，与上述染液充分混匀。液充分混匀。4 4）染色：染色）染色：染色10min.10min.5 5）冲洗：不要先倒掉染液，平持血涂片用流水缓）冲洗：不
5、要先倒掉染液，平持血涂片用流水缓缓冲洗干净。缓冲洗干净。6 6）干燥：直立血涂片，使其自然干燥。）干燥：直立血涂片，使其自然干燥。11/26/20228血涂片制作血涂片制作11/26/20229良好血涂片外观良好血涂片外观羽（子弹头）状尾部羽（子弹头）状尾部周边有空白周边有空白无划痕无划痕羽羽状状尾尾部部11/26/202210不良血涂片不良血涂片11/26/2022112瑞氏染色操作瑞氏染色操作11/26/2022123 3白细胞分类：白细胞分类：先用低倍镜选择厚薄适宜，染色先用低倍镜选择厚薄适宜，染色良好，细胞分布均匀的体尾交界良好，细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，处，滴加香柏油
6、一滴，油镜油镜下分下分类计数。分类时要有类计数。分类时要有秩序秩序的连续的连续进行，避免主观选择视野。通常进行，避免主观选择视野。通常分类计数分类计数100100个白细胞，计算并个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。报告各种白细胞所占比例。低倍镜下所见11/26/202213体尾交界处体尾交界处理想区理想区域域 细胞重叠细胞重叠 细胞太稀细胞太稀理想区域理想区域11/26/202214实验五白细胞分类计数实验五白细胞分类计数q中性粒细胞（中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圆在瑞氏染色血涂片上呈圆形，直径形，直径1013m，胞浆染粉红色，核形一叶，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不
7、等，以三叶者多见，染成深（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。11/26/202215q嗜酸性粒细胞（嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。11/26/202216q嗜碱性粒细胞（嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈
8、兰黑色。于光学显的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。色常看不清，呈杆状或分叶状。11/26/202217q淋巴细胞（淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，直径介于胞体呈圆形，直径介于615m之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，直径为多见，直径69m，核大呈深紫色致密而浓，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈染，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，
9、呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。11/26/202218q单核细胞（单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒大量细小尘土样颗粒。11/26/202219正常成人外周血白细胞分类参考值：正常成人
10、外周血白细胞分类参考值：Ne 50%70%Ly 20%40%Mo 3%8%Eo 0.5%5%Ba 0%1%11/26/202220 1.血涂片制备要厚薄适宜、均匀、头体尾分血涂片制备要厚薄适宜、均匀、头体尾分明，无溶血、无空洞。明，无溶血、无空洞。2.很多因素影响涂片时血膜的厚度。很多因素影响涂片时血膜的厚度。血滴大、血滴大、血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。反之则血膜薄。3.按一定顺序，有秩序地连续进行，避免选按一定顺序，有秩序地连续进行，避免选择视野。择视野。4.分类计数时应同时报告分类计数时应同时报告RBC和和WBC的形态的形态是否有异常。退化细胞不计数。是否有异常。退化细胞不计数。11/26/202221实验五白细胞分类计数RBC异常11/26/202222中性粒细胞中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞淋巴细胞淋巴细胞嗜碱性粒细胞（右）嗜碱性粒细胞（右）单核细胞单核细胞血小板血小板
