1、医学微生物学-病毒学 病毒检测方法与防治原则 Diagnosis and Prevention of viral Infections,大连医科大学微生物学教研室 主讲人：张伟,教学目标： 熟悉病毒感染的检查方法：检测病毒（形态学检查、病毒的分离培养与鉴定）、检测病毒成分（检测病毒抗原、检测病毒的核酸、检测病毒酶类）、检测病毒抗体。 掌握病毒感染的预防措施：人工被动免疫天然被动免疫、人工被动免疫），人工主动免疫（疫苗接种：灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗、DNA疫苗、独特型疫苗）。 熟悉病毒感染的治疗原则。,执业医师考试大纲： 病毒感染的检查方法 标本的采集和送检；病
2、毒分离培养方法；病毒感染的血清学诊断方法。 病毒感染的防治原则 人工主动免疫和被动免疫及其常用制剂。,（一）标本的采集与送检 采集时间：发病初期或急性期。 采集部位：根据病毒感染部位，采取适宜标本。 标本送检：冷藏速送，组织块：置50%中性甘油盐水中送检。 污染标本：加抗生素抑制标本中细菌等生长。,第一节 病毒感染的检查方法,（二）病毒的分离与鉴定（金标准，但方法复杂）,鸡胚培养：培养流感病毒最敏感、特异的方法。,细胞培养：最常用。其中二倍体细胞培养可用于多种病毒的分离和疫苗的制备，而传代细胞系不能用于疫苗的生产。,动物接种：是最早的病毒分离方法。狂犬病病毒接种乳鼠脑内。,病毒在培养细胞中生长
3、繁殖的指征： 细胞病变效应（CPE）：有些病毒在细胞内增殖时可引起细胞发生特有的形态学变化（细胞病变），称为细胞病变效应。不同病毒的CPE特征不同，如腺病毒可引起细胞圆缩、团聚或呈葡萄串状；巨细胞病毒等可引起细胞融合，形成多核巨细胞或融合细胞等。 红细胞吸附：带有血凝素的病毒（如流感病毒）感染细胞后，细胞膜上可出现血凝素，能与鸡等红细胞结合，常用作检测正黏病毒和副黏病毒。 干扰现象：某些病毒感染细胞后不出现CPE，但是可以干扰其后感染同一细胞的另一种病毒的增殖，从而阻抑后者所特有的CPE。如风疹病毒感染猴肾细胞不产生CPE，可以阻止埃可病毒11型产生CPE效应。,（三）病毒感染的快速诊断 形态
4、学检查 电镜、免疫电镜：病毒含量107 copies/ml的样品，可直接电镜观察；对含量少的样品可用免疫电镜法检查。如轮状病毒的电镜学诊断（车幅轮状）。 光学显微镜：能观察病毒感染细胞内的病理变化，如包涵体等。内基小体（Negri body）可辅助诊断狂犬病。,（三）病毒感染的快速诊断 病毒成分检查 蛋白抗原检测：FIA、ELISA等，应用蛋白印迹技术（western blot）检测病毒蛋白，具有确诊意义 。如HIV的初筛 病毒核酸检测：Real -time PCR、RT- PCR、RFLP、核酸杂交技术、基因芯片技术和基因测序等。对未知基因序列的病毒或新病毒不能采取这些方法,一、人工主动免疫
5、常用生物制品 灭活疫苗：乙型脑炎、狂犬病、甲型肝炎、流感等灭活疫苗； 活疫苗：亦称减毒活疫苗，常用的有脊髓灰质炎、流感、麻疹、风疹、腮腺炎、乙型脑炎、甲型肝炎等减毒活疫苗； 亚单位疫苗、基因工程疫苗（HBsAg）、核酸疫苗,第二节 病毒感染的防治原则,世界卫生组织宣布，在1977年10月26日索马里发生的最后一例天花后的两年中，如再无天花发生，即可宣告天花绝迹。1979年10月25日终于被人们确立为“世界天花绝迹日”而载入史册。,最后一例 天花患者 阿里毛马林,美国CDC儿童（0-6岁）免疫接种程序,二、人工被动免疫常用生物制品 免疫球蛋白：血清丙种球蛋白用于某些病毒性疾病（如麻疹、甲型肝炎等
6、）的紧急预防。HBIg紧急预防乙肝。 细胞免疫制剂：临床上用于治疗的细胞因子包括IFN-、，白细胞介素，TNF，CSF和LAK细胞等，可用于某些病毒性疾病和肿瘤的治疗,一、抗病毒化学制剂 核苷类药物：阿昔洛韦（ACV）和丙氧鸟苷（GCV）是目前最有效的抗疱疹病毒药物之一；拉米夫定是目前治疗慢性乙肝最新最有前途的药物之一；利巴韦林主要用于RNA病毒感染的治疗，如流感病毒和呼吸道合胞病毒的治疗。 非核苷类反转录酶抑制剂：nevirapine、pyridone用于治疗HIV。 蛋白酶抑制剂：赛科瓦纳抑制HIV复制周期中的晚期蛋白酶活性。 其他抗病毒药物：金刚烷胺用于治疗流感；甲酸磷霉素用于治疗疱疹。
7、,第三节 病毒感染的治疗,二、干扰素和干扰素诱生剂 干扰素：广谱抗病毒作用，主要用于甲、乙、丙型肝炎，疱疹病毒，乳头瘤病毒等感染的治疗。IFN治疗丙型肝炎效果更好。,三、中草药防治病毒感染 黄芪、板蓝根、大青叶、甘草和大蒜提取物等均有抑制病毒的作用。,四、其他治疗方法 基因治疗包括反义寡核苷酸、干扰RNA和核酶等治疗性疫苗。,问 题,定义：CPE 直接电镜可做快速诊断的病毒是？ 内基小体用于诊断何种疾病？ 常用的病毒疫苗属于何种类型疫苗？,【七年制历年考试题汇总】,A1型题 1用电镜法可做出早期快速诊断的病毒是： A疱疹病毒 B轮状病毒 C流感病毒 D巨细胞病毒 E腺病毒 答案：B 考点：病毒的检测（2008,2010,2011） 2不能作为病毒在细胞内生长繁殖指标的是： A致细胞病变作用 B红细胞凝集 C干扰现象 D细胞培养液变浑浊 E包涵体 答案：D 考点：病毒在培养细胞中生长繁殖的指征（2010，2011） 名词解释及问答题 CPE（2009）,chance favors the prepared mind！,
