1、厦门大学厦门大学 仪器分析课件仪器分析课件-仪分实验仪分实验-实验实验 19-高效高效液相色谱法液相色谱法编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月实验讲解要点实验讲解要点 一一、色谱分离原理色谱分离原理 二二、色谱分析技术色谱分析技术 三三、HPLC仪器和使用方法仪器和使用方法 四四、HPLC和和GC的比较的比较 五五、RP-HPLC测定烷基苯化合物原理测定烷基苯化合物原理 编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月一、色谱分离原理
2、一、色谱分离原理色谱法是一类高效分离方法。色谱法是一类高效分离方法。色谱分离原理是什么？色谱分离原理是什么？HPLCHPLC和和GCGC仪器的分离部件是什么？仪器的分离部件是什么？它们有什么不同？它们有什么不同？HPLCHPLC和和GCGC的主要差别？的主要差别？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月二、色谱分析技术二、色谱分析技术 色谱分析是一类重要的仪器分析方法，其色谱分析是一类重要的仪器分析方法，其特点是分离能力强、定量准确，适合于复杂特点是分离能力强、定量准确，适合于复杂样品或多组分样品分析。样品或多组分样品分析。常见的色谱定性方法？常见的色
3、谱定性方法？色谱定量分析的依据？色谱定量分析的依据？气相色谱实验采用那种定量分析方法？有气相色谱实验采用那种定量分析方法？有何特点？何特点？HPLCHPLC和和GCGC的应用特点的应用特点 编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月三、三、HPLC仪器和实验技术仪器和实验技术 HPLC HPLC仪器的基本组分？仪器的基本组分？主要部件的工作原理？主要部件的工作原理？HPLCHPLC和和GCGC仪器的比较仪器的比较 HPLCHPLC和和GCGC实验技术的比较实验技术的比较 有人认为色谱分析实验很简单，就是打一有人认为色谱分析实验很简单，就是打一针样品而已，
4、你是怎么认为的？你是否给病针样品而已，你是怎么认为的？你是否给病人打过针？为什么没有？人打过针？为什么没有？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月四、高效液相色谱仪的基本组成四、高效液相色谱仪的基本组成分几个系统？分几个系统？和和GCGC有何不同？有何不同？高压泵工作原理？高压泵工作原理？GCGC是如何进样的？是如何进样的？记录系统和记录系统和GCGC一样一样吗？吗？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月高压泵工作原理（单向阀）高压泵工作原理（单向阀）高压液体有危险吗？高压液体有危险吗？高压泵如何改变流速？
5、高压泵如何改变流速？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月高压泵工作原理（单向阀）高压泵工作原理（单向阀）HPLC HPLC进样针与进样针与GCGC有何不同？有何不同？为什么为什么HPLCHPLC与与GCGC进样要求不同？进样要求不同？六通阀工作原理（流路切换）六通阀工作原理（流路切换）编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月五、五、RP-HPLC测定烷基苯化合物原理测定烷基苯化合物原理 什么是正相色谱？什么是反相色谱？什么是正相色谱？什么是反相色谱？什么是键合固定相？什么是键合固定相？预测一下苯和甲苯在预测
6、一下苯和甲苯在C18C18反相柱上的保留反相柱上的保留顺序？顺序？什么是反相色谱疏水机理？什么是反相色谱疏水机理？本实验的主要色谱分析条件有那些？本实验的主要色谱分析条件有那些？流动相组成对保留时间有何影响？举例说流动相组成对保留时间有何影响？举例说明？明？改变检测波长对色谱图有何影响？改变检测波长对色谱图有何影响？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月HPLC的溶剂选择的溶剂选择 本实验采用什么流动相？本实验采用什么流动相？什么是什么是HPLCHPLC级甲醇、乙腈溶剂？级甲醇、乙腈溶剂？如何获得超纯水？如何获得超纯水？本实验所用的流动相如何配制？本
7、实验所用的流动相如何配制？流动相为什么要除气？如何除气？流动相为什么要除气？如何除气？编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月六、实验部分六、实验部分 一、溶液配制一、溶液配制1 1 配制标准系列溶液配制标准系列溶液 三组分混标液：每三组分混标液：每mLmL溶液分别含溶液分别含1.00mg1.00mg苯、甲苯和苯、甲苯和乙苯。乙苯。分别准确移取分别准确移取0.400.40、0.800.80、1.201.20、1.601.60和和2.00mL2.00mL三三组分混标液于组分混标液于10mL10mL容量瓶中，用流动相溶剂定容。容量瓶中，用流动相溶剂定容。2
8、 2 流动相的配制、过滤和除气。流动相的配制、过滤和除气。五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。苯。标准苯测试液。标准苯测试液。未知样品未知样品1 1号、号、2 2号和号和3 3号。号。编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月二、色谱实验条件二、色谱实验条件 A A组：组：Waters HPLCWaters HPLC仪仪色谱柱：色谱柱：Nova Pak C18(3.9Nova Pak C18(3.9150mm,4m)150mm,4m)流动相：流动相：CH3OH-H2O(70/30,v/v)CH3OH
9、-H2O(70/30,v/v)流速：流速：0.8 mL/min0.8 mL/min检测波长：检测波长：254nm254nm进样体积：进样体积：20L20LB B组：组：TSP HPLCTSP HPLC仪仪色谱柱：色谱柱：Hypersil BDS C18(4.0Hypersil BDS C18(4.0200mm,5m)200mm,5m)流动相：流动相：CH3OH-H2O(80/20,v/v)CH3OH-H2O(80/20,v/v)流速：流速：0.8 mL/min0.8 mL/min检测波长：检测波长：254nm254nm进样体积：进样体积：20L20L 编写教师：阮源萍编写教师：阮源萍 教教 授授编写日期：编写日期：2006年年9月月三、实验内容与主要步骤三、实验内容与主要步骤1 1 更换流动相。更换流动相。2 2 开动仪器，让色谱柱平衡。开动仪器，让色谱柱平衡。3 3 设置色谱工作站参数。设置色谱工作站参数。4 4 进样、采集色谱图。进样、采集色谱图。1 1）五组分混标液）五组分混标液2 2）标准溶液系列）标准溶液系列3 3）未知样品）未知样品5 5 色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。6 6 更换甲醇流动相，清洗色谱柱。更换甲醇流动相，清洗色谱柱。7 7 关闭仪器。关闭仪器。
