1、基因工程的基本操作程序生物材料人工合成获取目的基因DNAcDNA一定大小范围的DNAPCRmRNA 基因组文库 cDNA文库基因文库包括限制酶切割逆转录导入受体菌中保存1.3.1 目的基因的获取启动子是开始转录的信号序列,那种酶与之结合呢?转录的”红色信号灯”是哪个?原核基因的编码区是连续的。真核基因的编码区是间隔的，不连续的。能够编码蛋白质的_被不能编码蛋白质的_分割开，成为一种断裂的形式。转录的时候，外显子和内含子都转录，但是_转录的部分会被剪切掉。外显子内含子内含子文库类型文库类型cDNA文库文库基因组文库基因组文库文库大小基因中启动子基因中内含子基因多少物种间基因交流小大无有无有某种生
2、物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以cDNA文库为什么也叫部分基因文库？为什么基因组文库中只有部分基因可以在物种间进行基因交流？9255753553Taq聚合酶引物引物1引物引物2原料原料模板模板DNA目的基因目的基因PCR技术扩增目的基因 925575变性变性3553925575退火退火925575延伸延伸925575变性变性925575退火退火925575延伸延伸925575变性变性925575退火退火925575延伸延伸 PCR反应需要在一定的_溶液中进行，需提供：_、_（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、_和_，同时控制温度使DNA复制在体外反复进行。PCR一般要经历
3、三十多次循环，每次循环可分为_、_和_。控制的温度分别是_、_和_。利用PCR技术扩增目的基因的过程中，在_（填“第一次”、“第二次”或“第三次”）循环结束后，才会出现两条链等长的目的基因片断。缓冲DNA模板4种脱氧核苷酸两种引物耐高温的DNA聚合酶变性复性延伸955572第三次dNTP既能为PCR提供原料,也能为形成磷酸二酯键提供能量。PCR技术与细胞内DNA复制的比较比较项目细胞内DNA复制PCR技术区别解旋方式解旋酶催化DNA在高温下变性解旋场所主要在细胞核内细胞外(主要在PCR扩增仪内)酶解旋酶、DNA聚合酶等热稳定的DNA聚合酶（Taq 酶）温度细胞内温和条件控制温度，需在不同温度下
4、进行结果合成整个DNA分子扩增特定的DNA片段或基因联系模板:均需要脱氧核苷酸双链作为模板原料:均为四种脱氧核苷酸（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）酶:均需DNA聚合酶引物:都需要引物，使DNA聚合酶从引物开始进行互补链的合成1.3.2基因表达载体的构建目的基因表达载体为何不直接把单独的目的基因导入受体细胞？你能解释这些必要结构的作用吗?如何构建如图所示的重组质粒？请用纸带模型简述过程。1.3.3 将目的基因（重组质粒）导入受体细胞为何要把重组质粒导入受体细胞？受体细胞可以分为那些类型？依据他们的结构与功能推测，导入方法相同吗?如何选择受体细胞，才能让转基因猴全身体细胞都带有目的基因？
5、培育抗虫棉时也必须选用这种细胞吗，为什么？农杆菌转化法能有效应用于单子叶植物吗？为什么？据图可知，目的基因发生了几次剪切和拼接？重组Ti质粒跨越了几层细胞膜？T-DNA的T是什么意思？为何要把目的基因接在T-DNA中？导入双子叶植物细胞最有效的方法-农杆菌转化法两次拼接：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上；第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上。两次导入：第一次导入是将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌；第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的T-DNA导入受体细胞。基因枪法花粉管通道法目的基因导入动物细胞显微注射法导入动物细胞可以用
6、基因枪法吗？目的基因导入微生物细胞（细菌转化）Ca2+感受态细胞吸收实例：利用转基因大肠杆菌生产药物 原核生物作为受体细胞产生的真核生物的蛋白质通常没有生物活性，需要在体外进行再加工。1.3.4 目的基因的检测与鉴定 某种特定性状生物大分子具有特异性 -分子水平的检测特定基因控制特定性状,如抗虫、抗旱等 -性状水平的检测DNA分子杂交基因探针待测DNA单链DNA或RNA片断，带有某种标记，能与目标DNA或RNA的一条链发生碱基互补配对。抗原抗体杂交分子杂交 结果大肠杆菌有的未被转化，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。目的基因的重组质粒的大肠杆菌。（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含环状目的基因的细胞不能区分的，其原因是_；并且_和_的细胞也是不能区分的，其原因是_。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，还需使用含有的固体培养基。更多教学用课件及动画视频，请关注鸣谢:本课件由汗水丑生原件改编!
