1、12/4/2022临床检验基础临床检验基础第二章 血细胞分析仪检验本章目录1第一节第一节 血细胞分析仪检测原理血细胞分析仪检测原理2第二节第二节 仪器分析临床应用仪器分析临床应用3第三节第三节 仪器安装、使用、保养仪器安装、使用、保养4第四节第四节 校准、性能评价及比对校准、性能评价及比对第五节第五节 检验结果的质量保证检验结果的质量保证5 血液分析仪（血液分析仪（hematology analyzer,HA）：）：临床血液一般检查最常用仪器。临床血液一般检查最常用仪器。1953年美国年美国Coulter申请了申请了“粒子计数法粒子计数法”的技术专利，并成功研发了世界上第一台电的技术专利，并成
2、功研发了世界上第一台电阻抗式血细胞计数仪。阻抗式血细胞计数仪。血细胞血细胞计数功能计数功能两大功能两大功能白细胞白细胞分类功能分类功能第一节第一节 血细胞分析仪检测原理血细胞分析仪检测原理 血细胞具有相对非导电性质，悬浮在电血细胞具有相对非导电性质，悬浮在电解质溶液中的血细胞通过计数小孔时，可引解质溶液中的血细胞通过计数小孔时，可引起小孔内、外电流或电压的变化，形成与血起小孔内、外电流或电压的变化，形成与血细胞数量相当、体积大小相应的脉冲信号，细胞数量相当、体积大小相应的脉冲信号，从而对血细胞进行计数，并根据体积大小间从而对血细胞进行计数，并根据体积大小间接区分出细胞群。此原理又称为库尔特原理
3、接区分出细胞群。此原理又称为库尔特原理（Coulter principle）。一、电阻抗检测原理一、电阻抗检测原理 细胞计数池中，小孔内外两个电极和稀释液构成一个电流回路，细胞计数池中，小孔内外两个电极和稀释液构成一个电流回路，在负压作用下，细胞通过小孔，电极能感应到一个瞬间的电阻变化，在负压作用下，细胞通过小孔，电极能感应到一个瞬间的电阻变化，并将其转换成脉冲，并将其转换成脉冲，脉冲的数量代表细胞数量，脉冲大小反映细胞脉冲的数量代表细胞数量，脉冲大小反映细胞体积大小。体积大小。一、电阻抗检测原理一、电阻抗检测原理(一一)血细胞计数原理血细胞计数原理一、电阻抗检测原理一、电阻抗检测原理 （二）
4、血红蛋白测定原理（二）血红蛋白测定原理一、电阻抗检测原理一、电阻抗检测原理 在被稀释的血液中加入溶血剂后，使红细在被稀释的血液中加入溶血剂后，使红细胞释放出血红蛋白，后者与溶血剂结合形成血胞释放出血红蛋白，后者与溶血剂结合形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统，在特红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统，在特定波长（一般在定波长（一般在530nm530nm550nm550nm）下比色，根据）下比色，根据吸光度的变化吸光度的变化仪器便可显示血红蛋白浓度。仪器便可显示血红蛋白浓度。一、电阻抗检测原理一、电阻抗检测原理 稀释后的血液经溶血素处理后，红细胞稀释后的血液经溶血素处理后，红细胞迅速溶解，白细
5、胞膜通透性改变使胞质经细迅速溶解，白细胞膜通透性改变使胞质经细胞膜渗出、脱水，胞膜紧裹在细胞核或颗粒胞膜渗出、脱水，胞膜紧裹在细胞核或颗粒周围。脱水后的白细胞体积与其自然体积无周围。脱水后的白细胞体积与其自然体积无关，取决于脱水后白细胞内有形物质的多少。关，取决于脱水后白细胞内有形物质的多少。（三）白细胞分群原理（三）白细胞分群原理一、电阻抗检测原理一、电阻抗检测原理 根据电阻抗原理，不同体积的白细胞通过根据电阻抗原理，不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显的差异。依据脉小孔时产生的脉冲大小有明显的差异。依据脉冲的大小，电阻抗法血细胞分析仪可对白细胞冲的大小，电阻抗法血细胞分析仪可对白
6、细胞进行分群。进行分群。（三）白细胞分群原理（三）白细胞分群原理一、电阻抗检测原理一、电阻抗检测原理 三分群法的第一群为小细胞区，体积为三分群法的第一群为小细胞区，体积为35fl35fl90fl90fl，主要为淋巴细胞；第二群为中间，主要为淋巴细胞；第二群为中间细胞区也称单个核细胞区，体积细胞区也称单个核细胞区，体积90fl90fl160fl160fl，包括幼稚细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱包括幼稚细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞；第三群为大细胞区，体积性细胞；第三群为大细胞区，体积160fl160fl以上，以上，主要为中性粒细胞。主要为中性粒细胞。（三）白细胞分群原理（三）白细胞分群
7、原理一、电阻抗检测原理一、电阻抗检测原理 （三）白细胞分群原理（三）白细胞分群原理电阻抗法白细胞三分群示意图电阻抗法白细胞三分群示意图 （一）激光散射法（一）激光散射法 将细胞悬液注入鞘液流中央，单个细胞沿将细胞悬液注入鞘液流中央，单个细胞沿着悬液和鞘液流两股液流整齐排列，以恒定流着悬液和鞘液流两股液流整齐排列，以恒定流速定向通过石英毛细管。当细胞通过激光束被速定向通过石英毛细管。当细胞通过激光束被照射时，可阻挡或改变激光束的方向，产生与照射时，可阻挡或改变激光束的方向，产生与其特征相应的各种角度的散射光。放置在石英其特征相应的各种角度的散射光。放置在石英毛细管周围不同角度的信号检测器可接收特
8、征毛细管周围不同角度的信号检测器可接收特征各异的散射光。各异的散射光。二、光（化）学检测原理二、光（化）学检测原理 （一）激光散射法（一）激光散射法二、光（化）学检测原理二、光（化）学检测原理 （二）分光光度法（二）分光光度法 主要用于血红蛋白测定。主要用于血红蛋白测定。红细胞经溶血剂溶解释放出血红蛋白红细胞经溶血剂溶解释放出血红蛋白,并并与溶血剂有关成分形成血红蛋白衍生物，在与溶血剂有关成分形成血红蛋白衍生物，在540nm540nm特定波长下比色，吸光度与血红蛋白含特定波长下比色，吸光度与血红蛋白含量成正比，可直接反映血红蛋白浓度。量成正比，可直接反映血红蛋白浓度。二、光（化）学检测原理二、
9、光（化）学检测原理 现代血液分析仪主要综合应用了现代血液分析仪主要综合应用了电学电学和和光学光学两大原理，用以测定血液有形成分（细两大原理，用以测定血液有形成分（细胞）和无形成分（血红蛋白）。胞）和无形成分（血红蛋白）。三、联合检测原理三、联合检测原理体积体积(volume,V)电导电导(conductivity,C)光散射光散射(scatter,S)应用电阻抗应用电阻抗原理测量原理测量细胞体积细胞体积采用高频电磁采用高频电磁探针测量细胞探针测量细胞内部结构，如内部结构，如细胞核、细胞细胞核、细胞内颗粒内颗粒采用激光源单色光直采用激光源单色光直接扫描细胞，产生不接扫描细胞，产生不同角度散射光，
10、提供同角度散射光，提供细胞形态及胞核结构细胞形态及胞核结构等光散射信息，以此等光散射信息，以此鉴别粒细胞。鉴别粒细胞。（一）体积、电导和光散射（一）体积、电导和光散射（VCSVCS）法）法三、联合检测原理三、联合检测原理 （一）体积、电导和光散射（一）体积、电导和光散射（VCSVCS）法）法三、联合检测原理三、联合检测原理 （二）光散射与细胞化学法（二）光散射与细胞化学法 当细胞被激光束照射时，细胞因体积大小、当细胞被激光束照射时，细胞因体积大小、细胞成分、细胞核形状、染色情况等各种特性细胞成分、细胞核形状、染色情况等各种特性的不同，可阻挡或改变激光束的方向，产生与的不同，可阻挡或改变激光束的
11、方向，产生与细胞特征相应的各种角度的散射光。检测不同细胞特征相应的各种角度的散射光。检测不同角度的散射光信号，可分辨出各类细胞。角度的散射光信号，可分辨出各类细胞。三、联合检测原理三、联合检测原理 （二）光散射与细胞化学法（二）光散射与细胞化学法1 1过氧化物酶染色通过氧化物酶染色通道道2 2嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞/核分叶通道核分叶通道 三、联合检测原理三、联合检测原理 （三）多角度偏振光散射法（三）多角度偏振光散射法 应用固体激光流式细胞荧光技术，多角度检测应用固体激光流式细胞荧光技术，多角度检测白细胞和分类。白细胞和分类。三、联合检测原理三、联合检测原理 （四）电阻抗、射频、流式细胞术与
12、核酸荧光染色法（四）电阻抗、射频、流式细胞术与核酸荧光染色法 1 1白细胞分类通道（白细胞分类通道（DIFFDIFF通道）通道）2 2白细胞白细胞/嗜碱性粒细胞（嗜碱性粒细胞（WBC/BASOWBC/BASO）通道）通道3 3未成熟髓细胞信息（未成熟髓细胞信息（IMIIMI）通道）通道 采用半导体激光流式细胞技术结合核酸荧光采用半导体激光流式细胞技术结合核酸荧光染色技术进行白细胞计数和分类。染色技术进行白细胞计数和分类。三、联合检测原理三、联合检测原理 （四）电阻抗、射频、流式细胞术与核酸荧光染色法（四）电阻抗、射频、流式细胞术与核酸荧光染色法三、联合检测原理三、联合检测原理 （五）双鞘流技术
13、和细胞化学染色法（五）双鞘流技术和细胞化学染色法 在流式通道中有在流式通道中有2 2个鞘流装置，细胞经第个鞘流装置，细胞经第1 1束鞘流后通过阻抗微孔测定细胞的真实体积，束鞘流后通过阻抗微孔测定细胞的真实体积，然后经第然后经第2 2束鞘流后到达光窗，测定细胞的光束鞘流后到达光窗，测定细胞的光吸收，分析细胞内部结构。吸收，分析细胞内部结构。三、联合检测原理三、联合检测原理血细胞分析仪各项检测参数及临床应用血细胞分析仪各项检测参数及临床应用一一血细胞分析仪细胞分布图及临床应用血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二二血细胞分析仪常见报警和干扰因素血细胞分析仪常见报警和干扰因素三三血细胞分析仪检测结果显微
14、镜复查规则血细胞分析仪检测结果显微镜复查规则四四第二节第二节 血细胞分析仪分析临床应用血细胞分析仪分析临床应用 （一）红细胞参数及临床应用（一）红细胞参数及临床应用一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用血细胞分析仪红细胞系列检测参数 （一）红细胞参数及临床应用（一）红细胞参数及临床应用一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用 RDWRDW是反映红细胞体积大小异质性的参数，是反映红细胞体积大小异质性的参数，以标准差或变异系数来表示（以标准差或变异系数来表示（CV%CV%），有助于贫），有助于贫血的诊断与鉴别诊断。血的诊断与
15、鉴别诊断。红细胞体积分布宽度（红细胞体积分布宽度（RDWRDW）MCVRDW分类意义减低正常小细胞均一性轻型-珠蛋白生成障碍性贫血增高小细胞不均一性缺铁性贫血正常正常正细胞均一性慢性病性贫血、再生障碍性贫血、白血病增高正细胞不均一性骨髓纤维化增高正常大细胞均一性MDS、再生障碍性贫血增高大细胞不均一性巨幼细胞贫血贫血的贫血的RDW和和MCV分类分类 （一）红细胞参数及临床应用（一）红细胞参数及临床应用一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用 HDWHDW是反映红细胞内是反映红细胞内HbHb含量异质性的参数，含量异质性的参数，用单个红细胞用单个红细胞HbHb含
16、量的标准差表示。含量的标准差表示。（2 2）红细胞血红蛋白分布宽度（）红细胞血红蛋白分布宽度（HDWHDW）（二二）白白细胞参数细胞参数一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用血细胞分析仪白细胞系列检测参数 （三三）血小板血小板参数参数一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用 血细胞分析仪血小板系列检测参数血细胞直方图血细胞直方图二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用 以测定的细胞体积（大小）为横坐标，以测定的细胞体积（大小）为横坐标，细胞出现的相对频率（数量）为纵坐标，可细胞出现的相对频
17、率（数量）为纵坐标，可绘制的血细胞直方图，主要包括白细胞、红绘制的血细胞直方图，主要包括白细胞、红细胞和血小板三种直方图。细胞和血小板三种直方图。（一）红细胞直方图的临床应用（一）红细胞直方图的临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用 正常红细胞直方图几乎为两侧对称、较正常红细胞直方图几乎为两侧对称、较狭窄的正态分布曲线，主要分布在狭窄的正态分布曲线，主要分布在50fl50fl200fl200fl区域。区域。（一）红细胞直方图的临床应用（一）红细胞直方图的临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用%100 200 3
18、00 400(fl)正态分布正态分布,峰顶在峰顶在82fl96fl （一）红细胞直方图的临床应用（一）红细胞直方图的临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用不同类型贫血红细胞直方图的变化和常见原因不同类型贫血红细胞直方图的变化和常见原因 （二）白细胞直方图的临床应用（二）白细胞直方图的临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用 电阻抗型血细胞分析仪白细胞直方图为具电阻抗型血细胞分析仪白细胞直方图为具有有3 3个峰的光滑曲线，从左至右分别为：为淋个峰的光滑曲线，从左至右分别为：为淋巴细胞（小细胞群）、单个核细胞（中间细
19、胞巴细胞（小细胞群）、单个核细胞（中间细胞群）和中性粒细胞（大细胞群）或相当大小的群）和中性粒细胞（大细胞群）或相当大小的细胞。细胞。（二）白细胞直方图的临床应用（二）白细胞直方图的临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用35f190f1160fl以上90f1160f1 （二）白细胞直方图的临床应用（二）白细胞直方图的临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用 （三）血小板直方图的临床应用（三）血小板直方图的临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用 正常血小板直方图呈左偏态分布
20、，主要正常血小板直方图呈左偏态分布，主要集中在集中在2fl2fl30fl30fl范围内，主峰在范围内，主峰在7.6fl7.6fl13.1fl13.1fl之间。之间。（三）血小板直方图的临床应用（三）血小板直方图的临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用 10 20 30(fl)10 20 30(fl)%呈偏态，峰顶呈偏态，峰顶5fl10fl （四）散点图的临床应用（四）散点图的临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用 不同的检测原理，坐标上的散点所在象限不同的检测原理，坐标上的散点所在象限平面图上的位置，如上下（高
21、低）、左右、前平面图上的位置，如上下（高低）、左右、前后（可重叠）或散点群的疏密，均与相应类别后（可重叠）或散点群的疏密，均与相应类别的细胞形态、体积、内部结构、胞核、胞质及的细胞形态、体积、内部结构、胞核、胞质及胞质颗粒数量等特性密切相关。胞质颗粒数量等特性密切相关。（四）散点图的临床应用（四）散点图的临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用 1.1.白细胞散点图白细胞散点图 （四）散点图的临床应用（四）散点图的临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用 2.2.红细胞散点图红细胞散点图三种形式三种形式图形图形符号
22、符号文字文字标本自身标本自身检测环境检测环境报警报警Text常见的干扰因素常见的干扰因素Text三、血细胞分析仪常见报警和干扰因素三、血细胞分析仪常见报警和干扰因素四、血细胞分析仪检测结果显微镜复查规则四、血细胞分析仪检测结果显微镜复查规则 2005 2005年，国际实验室血液学学会提出了显年，国际实验室血液学学会提出了显微镜复查的微镜复查的4141条建议性标准。但由于各临床检条建议性标准。但由于各临床检验室使用的仪器不同，服务的患者人群也有差验室使用的仪器不同，服务的患者人群也有差异，异，“41“41条建议性标准条建议性标准”尚处于实践检验中，尚处于实践检验中，目前还没有被公认的复查标准。各
23、实验室可根目前还没有被公认的复查标准。各实验室可根据据ISLHISLH建议的建议的4141条复检规则，并结合具体情况条复检规则，并结合具体情况来制订切合实际、可操作的复查标准。来制订切合实际、可操作的复查标准。四、血细胞分析仪检测结果显微镜复查规则四、血细胞分析仪检测结果显微镜复查规则血细胞分析仪检测结果手工涂片复查真阳性标准血细胞分析仪检测结果手工涂片复查真阳性标准血涂片显微镜检查阳性:发现异常形态细胞血涂片显微镜检查阳性:发现异常类型细胞红细胞形态异常:2+/中等量或更多；或发现疟原虫原始细胞:1个血小板形态异常（巨大血小板）:2+/中等量或更多晚幼粒细胞:2个血小板凝块:偶见或时而可见中
24、幼粒/早幼粒细胞:1个Dhle小体:2+/中等量或更多非典型淋巴细胞:5个中毒颗粒:2+/中等量或更多有核红细胞:1个空泡:2+/中等量或更多浆细胞:1个工作环境工作环境工作电压工作电压仪器安装仪器安装仪器摆放仪器摆放检测原理检测原理操作程序操作程序日保养日保养周保养周保养月保养月保养检测器维护检测器维护液路维护液路维护机械传动机械传动 部分维护部分维护第三节第三节 血细胞分析仪安装、使用、保养和维护血细胞分析仪安装、使用、保养和维护安装安装 使用使用 保养保养 维护维护 总体评价总体评价 性能评价性能评价1 1校准条件校准条件2 2校准品定值校准品定值 3 3建立仪器校准建立仪器校准和校准验
25、证程序和校准验证程序4 4保证试剂质量保证试剂质量应对同一实验室应对同一实验室不同血液分析仪不同血液分析仪测定结果进行比测定结果进行比对，相关性良好对，相关性良好后，定期校准一后，定期校准一台性能较好的血台性能较好的血细胞分析仪，将细胞分析仪，将它作为参比仪器它作为参比仪器校准校准性能性能评价评价比对比对第四节第四节 血细胞分析仪校准、性能评价及比对血细胞分析仪校准、性能评价及比对分析前分析前分析中分析中分析后分析后第五节第五节 血细胞分析仪检验结果的质量保证血细胞分析仪检验结果的质量保证1.检验人员的要求检验人员的要求2.合适的检测环境合适的检测环境3.合格的血液分析仪合格的血液分析仪4.配
26、套试剂配套试剂5.合格的检测标本合格的检测标本1.仪器启动仪器启动2.室内质控室内质控3.标本检测标本检测4.仪器清洁仪器清洁1.检验结果审核检验结果审核2.检验结果解释检验结果解释3.建立危急值通知建立危急值通知4.标本的保存标本的保存5.仪器维护和保养仪器维护和保养6.定期征求意见定期征求意见合适的检测环境合适的检测环境合格的血液分析仪合格的血液分析仪检验人员的要求检验人员的要求合格的检测标本合格的检测标本配套试剂配套试剂分析前质量控制分析前质量控制第五节第五节 血细胞分析仪检验结果的质量保证血细胞分析仪检验结果的质量保证-仪器启动仪器启动分析中分析中质量控制质量控制-标本检测标本检测-仪器清洁仪器清洁-室内质控室内质控第五节第五节 血细胞分析仪检验结果的质量保证血细胞分析仪检验结果的质量保证分析后分析后质量控制质量控制检验结果解释检验结果解释检验结果审核检验结果审核建立危急值通知程序建立危急值通知程序仪器维护和保养仪器维护和保养标本的保存标本的保存定期征求意见定期征求意见第五节第五节 血细胞分析仪检验结果的质量保证血细胞分析仪检验结果的质量保证谢 谢！
