1、u流感病毒分离成功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节u多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织 采样对象：流感样病例（没有服用过抗病毒药物）、人禽流感待查病例 流感样病例流感样病例:发热（体温发热（体温3838），伴咳嗽或咽痛），伴咳嗽或咽痛之一者，而缺乏其它的实验室确定诊断依据之一者，而缺乏其它的实验室确定诊断依据 采集时间：病人发病后的头三天 常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性），PH 7.4-7.6的Hanks液，Eagels培养液或水解乳蛋白溶液 采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素 标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保
2、存 抗生素名称终浓度庆大霉素0.1mg/ml抗真菌素2Ug/ml 常用的标本种类：常用的标本种类：咽拭子 鼻拭子 漱口液 鼻咽吸取物 鼻洗液1 1、咽拭子、咽拭子 用灭菌棉签（最好用塑料柄、尼龙拭子，因为木头柄棉拭子会抑制PCR实验）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去鼻洗液标本:充分振荡标本管，将粘液打碎。应在4条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。五、临床标本的运送要求上清液可直接接种或低温保存对于病毒分离
3、阳性的标本70保存6个月然后，用平皿或烧杯收集洗液操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。新鲜的标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4保存，如未能接种应置-70或以下保存先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性），PH 7.九、禽流感标本采集的生物安全防护六、临床标本的
4、处理原则标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织采咽拭子的器材和容器采咽拭子的器材和容器2 2、鼻拭子、鼻拭子 将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去采鼻拭子的器材和容器采鼻拭子的器材和容器标本运输：异地运输可以采用邮寄或快递的方法病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织漱时让患者头部微后仰，发
5、“噢”声，让生理盐水在咽部转动。采样对象：流感样病例（没有服用过抗病毒药物）、人禽流感待查病例上清液可直接接种或低温保存用10 ml生理盐水漱喉。6的Hanks液，Eagels培养液或水解乳蛋白溶液冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4保存。标本采集后应迅速至于冰上或者4 以下保存，因为流感病毒对热很敏感六、临床标本的处理原则收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次八、临床标本的的处理原则操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。人禽流感标本的运送、接收和保藏应当符合我国病原微生物实验室生物安全管理
6、条例（国务院424号令）的有关要求。收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次鼻洗液标本:充分振荡标本管，将粘液打碎。患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本Eagels基础培养基 3 3、鼻咽吸取物、鼻咽吸取物 用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次 内有HEPA膜进风道鼻咽吸取装置鼻咽吸取装置出风道正确错误错误不要触摸病人的脸不要触摸病人的脸!4 4、漱口液、漱口液
7、 用10 ml生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。然后，用平皿或烧杯收集洗液5 5、鼻洗液、鼻洗液 患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔 操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护 采集标本要有一定力度 标本采集后应迅速至于冰上或者4 以下保存，因为流感病毒对热很敏感 标本管上写明：医院名称，标本号，患者姓名，性别，采样日期 标本采集后尽量在24小时内送到实验室进行病毒分离。24小时内未能进行病毒分离的标本应放-70 或以下 新鲜的
8、临床采集标本 应在4条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存 冻存的临床采集标本 应在冻存的条件下，低温送至实验室 新鲜的标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4保存，如未能接种应置-70或以下保存 冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4保存。如未能分离的标本应置-70或以下保存 含聚丙烯纤维的拭子的采集标本含聚丙烯纤维的拭子的采集标本:先将含聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出 鼻洗液标本鼻洗液标本:充分振荡标本管，将粘液打碎。置4待其自然沉淀510分钟，取上清5 ml。上
9、清液可直接接种或低温保存 含聚丙烯纤维的拭子的采集标本:先将含聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本然后，用平皿或烧杯收集洗液标本运输：异地运输可以采用邮寄或快递的方法应在4条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；七、临床标本的处理方法将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去采样液应包含有一定量的蛋白质和抗菌素肺组织材料：肺组织材料在无菌条件下，用高压灭菌的乳钵研磨后，用生理盐水配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入抗生素。鼻咽吸取液：用干净灭菌过的毛细吸
10、管，在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同样置4待其自然沉淀510分钟，取上清5 ml。上清液可直接接种或低温保存六、临床标本的处理原则六、临床标本的处理原则6的Hanks液，Eagels培养液或水解乳蛋白溶液七、临床标本的处理方法漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。五、临床标本的运送要求盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本Eagels基础培养基九、禽流感标本采集的生物安全防护 鼻咽吸取液：鼻咽吸取液：用干净灭菌过的毛细吸管，在无菌条件下反复吹打收
11、集的溶液，以便打碎粘液，同样置4待其自然沉淀510分钟，取上清5 ml。上清液可直接接种或低温保存 肺组织材料：肺组织材料：肺组织材料在无菌条件下，用高压灭菌的乳钵研磨后，用生理盐水配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入抗生素。接种细胞或鸡胚 临床标本处理后，将原始标本分为三份:一份（40）用于鸡胚接种，一份（30）用于MDCK细胞接种，一份（30）保存待复核用。对于病毒分离阳性的标本70保存6个月 寄送流感毒株标本的包装要求v病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本v直接在塑料管上用油性
12、记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里v将装标本的密封袋放入专用运输箱内（或疫苗冷藏包），放入冰排，然后以柔软物质填充，内衬具吸水和缓冲能力的材料v标本运输：异地运输可以采用邮寄或快递的方法1采集人禽流感临床样本时，采集人员需要做好个人防护，戴防护口罩、帽子、护目镜、手套、防护衣、鞋套。2.人禽流感标本的运送、接收和保藏应当符合我国病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院424号令）的有关要求。3人禽流感临床标本的处理、分装在生物安全二级的实验室里进行，采用生物安全三级防护。4人禽流感病毒分离、培养、纯化，微量中和试验等实
13、验必须在生物安全三级（BSL-3级）实验室里操作。5临床标本病毒核酸提取在生物安全二级（BSL-2级）实验室的二级生物安全柜里进行，采用生物安全三级防护。6用灭活的抗原进行红细胞凝集抑制（HI）实验、RT-PCR病毒核酸检测可以在生物安全二级（BSL-2级）实验室里操作。常用的标本种类：常用的标本种类：咽拭子 鼻拭子 漱口液 鼻咽吸取物 鼻洗液2 2、鼻拭子、鼻拭子 将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去 3 3、鼻咽吸取物、鼻咽吸取物 用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插入鼻腔，接
14、通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次 4 4、漱口液、漱口液 用10 ml生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。然后，用平皿或烧杯收集洗液 新鲜的标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4保存，如未能接种应置-70或以下保存 冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4保存。如未能分离的标本应置-70或以下保存鼻洗液标本:充分振荡标本管，将粘液打碎。六、临床标本的处理原则然后，用平皿或烧杯收集洗液收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次操作要细心，严防标本间
15、交叉污染，要做好自我保护用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4保存。收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。Eagels基础培养基Eagels基础培养基然后，用平皿或烧杯收集洗液鼻洗液标本:充分振荡标本管，将粘液打碎。患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4保存。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让
16、生理盐水在咽部转动。病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。上清液可直接接种或低温保存如未能分离的标本应置-70或以下保存漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织七、临床标本的处理方法将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去标本采集后应迅速至于冰上或者4 以下保存，因为流感病毒对热很敏感漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关
17、信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里鼻咽吸取液：用干净灭菌过的毛细吸管，在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同样置4待其自然沉淀510分钟，取上清5 ml。直接在塑料管上用油性记号笔写明病毒的名称，同时也将病毒标本有关信息填在“流感/人禽流感毒株送检单”内，送检单应单独放在防水的袋子里漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存上清液可直接接种或低温保存上清液可直接接种或低温保存流感病毒分离成
18、功与否很大程度上取决于临床标本的质量，及其保存运输等环节六、临床标本的处理原则用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。五、临床标本的运送要求病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护然后，用平皿或烧杯收集洗液未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存上清液可直接接种或低温保存多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织采样对象：流感样病例（没有服用过抗病毒药物）、人禽流感待查病例收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去流感病毒分离成功与否很大程度上取决于
19、临床标本的质量，及其保存运输等环节鼻咽吸取液：用干净灭菌过的毛细吸管，在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同样置4待其自然沉淀510分钟，取上清5 ml。收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次七、临床标本的处理方法上清液可直接接种或低温保存病毒标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4保存。标本管上写明：医院名称，标本号，患者姓名，性别，采样日期如未能分离的标本应置-70或以下保存未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存应在4条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；病毒标本必须放在大
20、小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料管里，拧紧。七、临床标本的处理方法患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。九、禽流感标本采集的生物安全防护将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。上清液可直接接种或低温保存冻存的标本送到实验室后，24小时内能进行病毒分离的，可以放置4保存。七、临床标本的处理方法漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。上清液可直接接种或低温保存上清液可直接接种或低温保存多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和
21、支气管分泌物及尸检组织漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次将灭过菌干净的棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出，以同一拭子擦拭两侧鼻孔。盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本应在4条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；含聚丙烯纤维的拭子的采集标本:先将含聚丙烯纤维的拭子在管壁反复挤压后取出未能24小时内送至实验室的，应置-70或以下保存操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护对于病毒分离阳性的标本70保存6个月
22、24小时内未能进行病毒分离的标本应放-70 或以下应在4条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；标本采集后应迅速至于冰上或者4 以下保存，因为流感病毒对热很敏感收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。Eagels基础培养基用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。新鲜的标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4保存，如未能接种应置-70或以下保存收集抽取的粘液，并用采样液5m
23、l涮洗收集器3次将棉签头部浸入3-4ml采集液中，尾部弃去七、临床标本的处理方法上清液可直接接种或低温保存6的Hanks液，Eagels培养液或水解乳蛋白溶液收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织标本运输：异地运输可以采用邮寄或快递的方法对于病毒分离阳性的标本70保存6个月应在4条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；新鲜的标本送至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，24小时内能进行接种的可置于4保存，如未能接种应置-70或以下保存盖上盖子后不应有泄漏，推荐使用螺口细胞保存管保存和运输流感病毒标本六、临床标
24、本的处理原则上清液可直接接种或低温保存肺组织材料：肺组织材料在无菌条件下，用高压灭菌的乳钵研磨后，用生理盐水配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入抗生素。上清液可直接接种或低温保存然后，用平皿或烧杯收集洗液常用的采样液有：普通肉汤（只用于鸡胚，对细胞有毒性），PH 7.六、临床标本的处理原则Eagels基础培养基对于病毒分离阳性的标本70保存6个月标本采集后应迅速至于冰上或者4 以下保存，因为流感病毒对热很敏感操作要细心，严防标本间交叉污染，要做好自我保护收集抽取的粘液，并用采样液5ml涮洗收集器3次6用灭活的抗原进行红细胞凝集抑制（HI）实验、RT-PCR病毒核酸检测可以在
25、生物安全二级（BSL-2级）实验室里操作。鼻咽吸取液：用干净灭菌过的毛细吸管，在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同样置4待其自然沉淀510分钟，取上清5 ml。然后，用平皿或烧杯收集洗液应在4条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；Eagels基础培养基七、临床标本的处理方法多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织6用灭活的抗原进行红细胞凝集抑制（HI）实验、RT-PCR病毒核酸检测可以在生物安全二级（BSL-2级）实验室里操作。用10 ml生理盐水漱喉。应在4条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；五、临床标本的运送要求应在4条件下，24小时内运送至全国流感监测网络实验室；上清液可直接接种或低温保存鼻洗液标本:充分振荡标本管，将粘液打碎。多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织 鼻咽吸取液：鼻咽吸取液：用干净灭菌过的毛细吸管，在无菌条件下反复吹打收集的溶液，以便打碎粘液，同样置4待其自然沉淀510分钟，取上清5 ml。上清液可直接接种或低温保存 肺组织材料：肺组织材料：肺组织材料在无菌条件下，用高压灭菌的乳钵研磨后，用生理盐水配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入抗生素。接种细胞或鸡胚
