1、 芳酸及其酯类药物的分析芳酸及其酯类药物的分析 典型药物 鉴别试验 含量测定 返回主目录 杂质检查 基本要求 基 本 要 求 一、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的鉴别和一、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。含量测定的基本原理与方法。二、熟悉其他方酸类药物鉴别和含量测定的二、熟悉其他方酸类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。基本原理与方法。三、了解本类药物的体内分析方法。三、了解本类药物的体内分析方法。返返 回回 一、水扬酸类一、水扬酸类 （一）典型药物结构（一）典型药物结构第一节第一节 典型药物分类与理化性质典型药物分类与理化性质OHCOOH水杨酸（水杨酸（salycyl
2、icsalycylic acidacid）COOHOCOCH3阿司匹林（阿司匹林（aspirin)aspirin)COONaOHNH2 对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠（sodium sodium aminosalicylateaminosalicylate)OCOCOOHOH双水杨酯（双水杨酯（salsalatesalsalate)COONHCOCH3OCOCH3贝诺酯（贝诺酯（benorilatebenorilate)1.1.酸性酸性 SA(PKa2.95)SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.49)ASA(PKa3.49)、双水杨酯均有酸性。双水杨酯均有酸性。2.溶解性溶解性:均为固体，
3、有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。3.UV和和IR光谱特性：光谱特性：分子结构中具有苯环分子结构中具有苯环,有有UV和和IR特征吸收。特征吸收。4.芳伯氨基和酚羟基特性：芳伯氨基和酚羟基特性：5.水解特性：水解特性：ASA、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸双水杨酯及其制剂应检查水杨酸,对氨基水对氨基水 杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。（二）主要理化性质（二）主要理化性质 （一）典型药物结构（一）典型药物结构苯甲酸及其钠盐苯甲酸及其钠盐(benzoic acid benzoic acid）二、苯甲酸类二、苯甲
4、酸类COOH(Na)COOC2H5OH羟苯乙酯羟苯乙酯(ethylparoben)SO2COOHN(CH2CH2CH3)2丙磺舒丙磺舒(probenecidprobenecid)NHCOOHCH3CH3甲芬那酸甲芬那酸(mefenamicmefenamic acid)acid)（二）主要理化性质（二）主要理化性质 1.溶解性溶解性:均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。2.UV和和IR光谱特性：光谱特性：分子结构中具有苯环分子结构中具有苯环,有有UV和和IR特征吸收。特征吸收。3.具有酚羟基特性：具有酚羟基特性：4.分解反应特性：分解反应特
5、性：苯甲酸钠分解为苯甲酸；丙磺舒分解为苯甲酸钠分解为苯甲酸；丙磺舒分解为SO2 5.酸性：酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基，可用，可用 NaOH直接滴定测定其含量。直接滴定测定其含量。三、其他芳酸类三、其他芳酸类(一一)典型药物结构典型药物结构ClOCCH3CH3COOC2H5氯贝丁酯（氯贝丁酯（clofibrateclofibrate）CHCH3COOHCHCH2CH3CH3布洛芬（布洛芬（ibuprofenibuprofen）(二二)主要理化性质主要理化性质 1.1.溶解性：溶解性：水中不溶，有机溶剂溶解，氯贝丁酯为液水中不溶，有机溶剂溶解，氯
6、贝丁酯为液 体；布洛芬为固体，有一定熔点。体；布洛芬为固体，有一定熔点。2.2.UVUV和和IRIR特征吸收光谱：特征吸收光谱：基于基于分子结构中具有苯环和分子结构中具有苯环和 特征基团。特征基团。返返 回回 一、与三氯化铁反应一、与三氯化铁反应 含有酚羟基药物可与含有酚羟基药物可与FeClFeCl3 3反应；能与反应；能与FeClFeCl3 3反应反应不不 一定一定含酚羟基含酚羟基.第二节第二节 鉴别试验鉴别试验OHRAr-OH+FeCl3紫堇色铁配位化合物紫堇色铁配位化合物pH461.直接反应直接反应 SA在中性或弱酸性条件下，与在中性或弱酸性条件下，与FeClFeCl3 3生成紫堇色配生
7、成紫堇色配位化合物位化合物赭色赭色苯甲酸（中性或碱性水溶液）苯甲酸（中性或碱性水溶液）+FeClFeCl3 3COOHCOOOHOFeFe+4FeCl3()2 3+12HCl6 丙磺舒与丙磺舒与NaOH成钠盐后，在成钠盐后，在pH 5.06.0中与中与FeCl3生成米黄色生成米黄色 布洛芬与高氯酸羟胺，布洛芬与高氯酸羟胺，N N，N-N-双环基己羧二亚胺及高氯酸铁反双环基己羧二亚胺及高氯酸铁反应，应，即显紫色即显紫色 JPJP（1414）方法方法。基于分子中。基于分子中-COOHCOOH的结构。的结构。2.水解或分解后与三氯化铁反应水解或分解后与三氯化铁反应ASAASA水解成水解成SASA后与
8、后与FeClFeCl3 3 反应，成紫堇色反应，成紫堇色 二、重氮化二、重氮化-偶合反应偶合反应 凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。Ar-NH2 Ar-NH-COCH3NaNO2+HClAr-N2ClH2OpH=7pH7pH7OHAr-N=N-Ar-N=N-Ar-N=N-SO3HSO3H-OH-OHNHCH2CH2NH2 1.1.直接反应直接反应 对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠 2.2.水解后反应水解后反应 贝诺酯具有潜在芳伯氨基贝诺酯具有潜在芳伯氨基 3.3.甲芬那酸甲芬那酸与与对对-硝基苯重氮盐硝基苯重氮盐在在Na
9、OHNaOH介质中介质中偶合偶合产产 生生橙红色橙红色。CH3CH3NHCOOHCOOHNHCH3CH3NaOHNNO2NN N+NO2 +K K2 2CrCr2 2O O7 7 深蓝色深蓝色 棕绿色棕绿色 甲芬那酸甲芬那酸+H H2 2SOSO4 4 黄色黄色 绿色绿色荧光荧光 JP(14)JP(14)三、氧化反应三、氧化反应 1.1.ASAASA酸水解生成酸水解生成SASA和和CHCH3 3COOHCOOH：SASA的的mpmp为为156156 161 161。2.2.双水杨酯水解生成双水杨酯水解生成SASA：SASA的的mpmp为为158158。3.3.氯贝丁酯碱水解后氯贝丁酯碱水解后与
10、盐酸羟胺生成异羟肟酸盐，与盐酸羟胺生成异羟肟酸盐，在弱酸条件下再与三氯化铁反应生成在弱酸条件下再与三氯化铁反应生成紫色紫色的异的异 羟肟酸铁。羟肟酸铁。四、水解反应四、水解反应 1.苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物，可用于鉴别。苯甲酸升华物，可用于鉴别。2.丙磺舒与丙磺舒与NaOH熔融分解成熔融分解成Na2SO3,经硝酸氧化成经硝酸氧化成 Na2SO4。3.丙磺舒加热分解丙磺舒加热分解，生成，生成SO2气体，有臭味气体，有臭味五、分解产物反应五、分解产物反应 1.测定测定max ；min。例如：布洛芬用例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备溶液制备0.25mg/ml；max
11、 ；265nm,273nm;min。245nm,271nm。2.在在max 处测定一定浓度供试液的吸收度处测定一定浓度供试液的吸收度A。例如：羟苯乙酯，例如：羟苯乙酯，5g/ml max =295nm;A =0.48 3.在在max 处测定供试液的百分吸收系数。处测定供试液的百分吸收系数。例如：贝诺酯在例如：贝诺酯在max =240nm;E1%1cm=730760 六、紫外吸收光谱法六、紫外吸收光谱法 4.在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度 比值法）比值法）例如：对氨基水杨酸钠例如：对氨基水杨酸钠10g/ml;A265/A299 =1.561.
12、56 再例如：甲芬那酸再例如：甲芬那酸14g/ml;A278280/A348352 =1.151.30 七、红外吸收光谱法七、红外吸收光谱法水杨酸的红外吸收图谱37002900cm-1N-H、O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H返返 回回37002900cm-1N-H、O-H1640cm-1N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱第三节第三节 特殊杂质检查特殊杂质检查一、一、ASAASA中特殊杂质的检查中特殊杂质的检查 1.1.溶液的澄清度溶液的澄清度 主要检查主
13、要检查NaNa2 2COCO3 3中不溶物，有苯酚；醋酸中不溶物，有苯酚；醋酸苯酯；水杨酸苯酯；乙酰水杨酸苯酯。苯酯；水杨酸苯酯；乙酰水杨酸苯酯。ASAASA溶解因此溶解因此ASAASA溶溶液应澄清。液应澄清。2.游离水杨酸检查游离水杨酸检查 利用利用SA 可与可与FeCl3呈色，用比色法检查。呈色，用比色法检查。3.易炭化物检查易炭化物检查 主要检查主要检查ASA中能被硫酸炭化显色的低分中能被硫酸炭化显色的低分子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚。间氨基主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚。间氨基 酚易氧
14、化呈色，而且有酚易氧化呈色，而且有毒性毒性，因此要严格控制。，因此要严格控制。双向滴定法：利用间氨基酚溶于乙醚，取双向滴定法：利用间氨基酚溶于乙醚，取3.0g 样品用乙醚提取样品用乙醚提取0.02mol/LHCl测定方法测定方法 滴定滴定V0.3ml。HPLC法：采用内标法，以磺胺作内标（法：采用内标法，以磺胺作内标（USP）二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查三、羟苯乙酯中有关物质的检查三、羟苯乙酯中有关物质的检查BPBP收载的方法，由于杂质的结构不清，故采用收载的方法，由于杂质的结构不清，故采用TLCTLC法法中的中的供试品供试品自身对照法自身对照法：固定相
15、：固定相：GFGF254254C C1818化学键合硅胶化学键合硅胶展开剂：甲醇展开剂：甲醇-水水-冰醋酸冰醋酸反相反相TLCTLC法法 甲芬那酸是以邻甲芬那酸是以邻-氯苯甲酸和氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在二甲基苯胺在Cu的催化下的催化下 缩合而成，因此成品药物中要检查缩合而成，因此成品药物中要检查铜盐铜盐及及有关物质有关物质。分光光度法：利用分光光度法：利用Cu 2+与与Na-DDC呈色后测定呈色后测定A 1.铜盐检查法铜盐检查法 原子吸收分光光度法：原子吸收分光光度法：BP（2000）2.有关物质的检查有关物质的检查 主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯苯甲主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻
16、氯苯甲 酸各国药典均采用酸各国药典均采用TLC法中的法中的自身高低浓度对照自身高低浓度对照法。法。四、甲芬那酸中特殊杂质的检查四、甲芬那酸中特殊杂质的检查五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查n主要检查成品药物中残留的主要检查成品药物中残留的对氯酚对氯酚原料和原料和挥发性挥发性杂质杂质GC-FID法法HPLC法：以对法：以对-羟乙基酚作内标，用正羟乙基酚作内标，用正相相HPLC2.挥发性杂质的检查方法挥发性杂质的检查方法 GC法法1.对氯酚检查对氯酚检查返返 回回 一、酸碱滴定法一、酸碱滴定法（一）直接滴定法（一）直接滴定法 基于本类药物基于本类药物-COOH；可用碱直接滴定
17、，如可用碱直接滴定，如 ASA的含量测定，其原理如下：的含量测定，其原理如下：第四节第四节 含量测定含量测定1.原理：原理：2.条件：条件：在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为1:1。3.应用：应用：多国药典用于双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测多国药典用于双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测定；定；USP和和BP还用于甲芬那酸的测定。还用于甲芬那酸的测定。COOHOCOCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2O（二）水解后剩余滴定法（二）水解后剩余滴定法 1.ASA含量测定含量测定原理：原理：条件：条件：水溶液水溶液2NaOH+H2SO4Na2SO4
18、 +2H2OCOOHOCOCH3+2NaOHCOONaOH+CH3COONa 具体试验：具体试验：I 份份NaOHI 份份NaOHVVOVo-V相当于相当于ASA消耗消耗 硫酸的硫酸的ml数数ASA%=(Vo V)FT/W 100%2.羟苯乙酯的含量测定羟苯乙酯的含量测定2NaOH+H2SO4Na2SO4 +2H2OCOOC2H5HO+NaOHCOONaHO+C2H5OH（三）两步滴定法（三）两步滴定法1.ASA片的含量测定片的含量测定第一步为中和第一步为中和ASA +NaOHASA-Na +H2O水解产物水解产物SA+NaOHSA-Na+H2O酸性稳定剂酸性稳定剂+NaOH中性盐中性盐第二步
19、为水第二步为水 解与测定解与测定 2.2.氯贝丁酯含量测定氯贝丁酯含量测定 第一步：第一步：中和酸性杂质中和酸性杂质 第二步：第二步：水解与测定水解与测定ClOCH3CCOOC2H5CH3+NaOHClOCH3CCOONaCH3+C2H5OHNaOH +HClNaCl +H2O 二、亚硝酸钠滴定法二、亚硝酸钠滴定法 对氨基水杨酸钠有芳伯氨基对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在在HCl中与中与NaNO2发生重氮化反应发生重氮化反应Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+NaCl+2H2O 因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，此因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，此法在下章重点讨论。法在下章重点讨论
20、。三、双相滴定法三、双相滴定法 是指在水相和有机相中的滴定。如苯甲酸钠是指在水相和有机相中的滴定。如苯甲酸钠的含量测定：的含量测定：生成的苯甲酸不溶于水，终点生成的苯甲酸不溶于水，终点pH突跃不明显，不易观察。突跃不明显，不易观察。苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚将滴定中产生苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚将滴定中产生的苯甲酸萃取入醚层。因此用双相滴定可使反应完全终点明的苯甲酸萃取入醚层。因此用双相滴定可使反应完全终点明显。显。COONa+HClCOOH+NaCl （一）直接紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法 丙磺舒片的测定：丙磺舒片的测定：Ch.P(2000)在在HCl中，采用百
21、分吸收系数法。中，采用百分吸收系数法。BP(1998)再盐酸再盐酸-乙醇乙醇,采用百分吸收系数法采用百分吸收系数法.USP(24)用氯仿提取后，采用对照品比较法。用氯仿提取后，采用对照品比较法。四、紫外分光光度法四、紫外分光光度法（二）离子交换（二）离子交换-紫外分光光度法紫外分光光度法 氯贝丁酯及其制剂氯贝丁酯及其制剂 Ch.P(2000)Ch.P(2000)采用酸碱滴定法；当采用酸碱滴定法；当含有酸性杂质含有酸性杂质对氯酚对氯酚时，可采用时，可采用强碱性阴离子强碱性阴离子交换树脂交换树脂吸附酸性杂质后，吸附酸性杂质后，在甲醇溶液中，在甲醇溶液中，226226nmnm波长处，波长处，采用对照
22、品比较法。采用对照品比较法。具体计算：具体计算：W1000 1/100 1/100=Cu(g/ml)Au/As=Cu/C Cu=C(Au/As)W(mg)=10 Cu=10 C(Au/As)（三）柱分配色谱三）柱分配色谱-紫外分光光度法紫外分光光度法 USP(24)采用此法同时测定采用此法同时测定ASA胶囊中胶囊中 ASA和和SA。1.SA的限量测定的限量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试 品溶液的制备。品溶液的制备。供试品液：CHCl3液洗脱液1：CHCl3洗脱液2：HAC-乙醚硅藻土，FeCl3-尿素 玻璃棉硅藻土，Na2CO3供试品液：CHCl
23、3-HCl液洗脱液1：HAC-CHCl3 (1:10)10ml洗脱液2：HAC-CHCl3 (1:100)85ml 1-杂质先洗脱2-SA后洗脱max=306nm AuAs1-杂质先洗脱2-ASA后洗脱 max=280nmASA(mg)=C(Au/As)2.2.ASAASA的含量测定的含量测定 色谱柱的制备；对照品溶液的制备；色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。供试品溶液的制备。Ch.P(2000)ASACh.P(2000)ASA的胶囊剂的含量测定采用此法。的胶囊剂的含量测定采用此法。USPUSP（2424）ASAASA片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、
24、布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。五、五、HPLCHPLC法法（一）（一）ASAASA栓剂的含量测定栓剂的含量测定色谱条件：色谱条件：色谱柱色谱柱ODSCODSC1818；流动相为甲醇：流动相为甲醇：0.1%0.1%二乙胺：二乙胺：HACHAC (40:60:4);(40:60:4);检测波长检测波长280280nmnm；内标物为咖啡因。内标物为咖啡因。系统适用性试验：系统适用性试验：n n 2000;ASA2000;ASA与与SASA与内标物的与内标物的R R 1.5 1.5具体计算：具体计算：CxCx=Rx/R=Rx/RR RC CR R W(g)W(
25、g)1/50 1/50 2/50=2/50=CxCx W W测测=1250 =1250 CxCx标示量标示量%=%=W W测测/W W W W平平/标示量标示量100%100%=CxCx 1250 1250 W W平平/W W 标示量标示量100%100%色谱条件：色谱条件：色谱柱苯基硅胶柱色谱柱苯基硅胶柱；流动相为流动相为NaHNaH2 2POPO3 3 0.1%0.1%HAC HAC液液-0.1%0.1%HAC HAC乙腈液乙腈液(50:50);(50:50);检测波长检测波长254254nmnm。系统适用性试验：系统适用性试验：n n 3900;T 3900;T 2.3;2.3;重复性重复性 RSDRSD1.5%1.5%具体计算：具体计算：（二（二）丙磺舒原料的含量测定丙磺舒原料的含量测定W W 1/100=Cu(mg/ml);Cu=Au/As 1/100=Cu(mg/ml);Cu=Au/As C C 供试品中丙磺舒供试品中丙磺舒(Mg)=100C(Au/As)Mg)=100C(Au/As)返返 回回
