1、实习一、整体及一般检查实习一、整体及一般检查孙孙 泉泉Tel:8391134483911344E-mail：比格犬（Beagle）医学应用实验外科：心血管外科、脑外科神经循环发达：动脉粥样硬化、心律失常药物代谢、毒理学、新药临床前安全评价消化系统慢性试验一、实验目的掌握整体状态的观察方法；掌握被毛与皮肤的检查方法及临床意义；掌握可视粘膜的检查方法及临床意义；掌握体表淋巴结的检查方法及临床意义；掌握体温、脉搏和呼吸数测定方法及其临床意义。一、犬的保定-徒手保定此法适用于小型犬、幼龄大中型犬听诊；皮下肌肉注射犬的保定-扎口保定适用于性情较凶或有攻击性的犬犬的保定-颈圈保定限制犬回头舔咬驱赶或四肢术
2、部二、全身状态检查精神状态：沉郁？兴奋？营养状况：肌肉丰满？骨骼外露？姿势：站立？行走？三、皮肤观察、触诊观察被毛状态：平顺？光泽？脱毛？观察皮肤颜色：黄染？苍白？感受皮肤温度、湿度：鼻端？耳根？检查皮肤弹性：2s？检查皮肤是否有肿胀、破损等：穿刺？检查皮肤弹性四、可视粘膜、体表淋巴结检查检查眼结合膜、鼻粘膜、口腔黏膜是否正常：湿润？颜色？分泌物？囊肿？破溃？检查下颌淋巴结检查耳朵：耳廓皮肤？外耳道？检查眼结合膜检查下颌淋巴结正常外耳炎五、体温测定动物站立保定。术者一手持体温计，将其水银柱甩至35摄氏度以下，用酒精棉球消毒，蘸上少许石蜡油。术者站在动物后方，一手抓住尾巴抬起，另一手持体温计旋转
3、插入直肠，约二分之一后固定。5分钟后，取出体温计，用一棉球擦去体温计上的粘液，然后读出度数。六、脉搏数测定动物站立保定。术者蹲于动物正后方，一手抓住尾巴，另一手的食指与中指于股内侧触诊股动脉。心脏听诊，看是否一致。（70-160次/分）七、呼吸数的测定术者用听诊器听取气管每分钟的呼吸数。用手背感觉鼻孔呼出气流数实习二、呼吸系统检查掌握呼吸运动检查内容、方法及临床意义上呼吸道检查内容、方法及临床意义胸部检查内容、方法及临床意义一、呼吸运动检查1.呼吸类型：胸式呼吸；腹式呼吸：提示胸部病变。2.呼吸节律：犬1:1.64 吸气延长：上呼吸道狭窄 呼气延长：支气管狭窄、肺弹性不足3.呼吸对称性：对称呼
4、吸 呼吸不对称：单侧性肺病二、上呼吸道检查1.鼻端检查：湿润凉爽、无鼻液 鼻端干燥热感：热性疾病2.喉气管触诊：人工诱咳 阳性：炎症喉气管检查三、胸部检查1.胸廓形状与对称性 触摸胸壁温度与敏感性2.肺叩诊区的变化 扩大：肺过度膨胀（肺气肿）、胸腔积气（气胸）缩小：肠臌气、腹腔积液上界距背中线2-3指宽与脊柱平行的线；前界为自肩胛骨后角并沿其后缘所引直线；后界由三点决定，上界与第12肋骨的交点，髋结节水平线与第11肋间交点，坐骨结节线与第10肋间交点，肩关节水平线与第8肋间交点，将这三点连起来止于第6肋间。1.浊音 2.水平浊音 3、4.清音3.肺扣诊音4.肺听诊音听诊时，不论大小动物，宜先从
5、中1/3开始，向前向后逐渐听取，其次上1/3，最后下1/3。每个部位听23次呼吸音，再变换位置，直至听完全肺。肺泡呼吸音增强：代偿性呼吸机能亢进；它标志着肺实质的病理变化，具有重要的诊断意义，常见于大叶性肺炎，小叶性肺炎和渗出性胸膜炎等等时的健康肺区。肺泡呼吸音减弱：肺组织的炎症、浸润、实变或其弹性减弱、丧失。进入肺泡的空气量减少呼吸音传导障碍。当胸腔积液，胸膜增厚，胸壁肿胀时，由于呼吸音传导不良，则肺泡呼吸音减弱。实习三、心血管系统检查掌握心搏动、心音形成原因，以及最佳听诊、叩诊的位置；熟悉心搏动、心音的病理变化和临床意义；掌握脉搏的频率、性质、节律的变化及临床意义一、心搏动的检查检查方法：
6、被检动物取站立姿势，使其左前肢向前伸出半步，以充分暴露心区。检查者位于动物左侧方。视诊时，仔细观察左侧肘后心区被毛及胸壁的振动情况；触诊时。检查者右手放于动物背部，左手紧贴左侧肘后心区，感知胸壁的振动，主要判定频率及强度。听诊心率及心音病理变化心搏动减弱：心脏衰竭引起心室收缩无力、胸壁增厚、胸腔积水。心搏动增强：心脏病代偿期（心肌炎、心包炎初期）、轻度贫血、疼痛性疾病。心搏动移位：心脏受到渗出液、肿瘤等的压迫。二、心脏叩诊检查方法：对犬等小动物用指指叩诊，举其左前肢，以充分暴露心区。心脏前部为肩胛肌肉掩盖，肌肉后方的部分接近心脏一半，直接与胸壁接触的只是心脏的一部分，这一区域绝对浊音区；心脏大
7、部分被肺部所掩盖，这部分半浊音，这一区域为心脏的相对浊音区，标志心脏大小。犬心绝对浊音区左侧第4-5肋间，上缘达肋骨与肋软骨结合部，大致与胸骨平行，下缘受肝浊音影响五明显界限。病理变化心区敏感：提示心区疼痛，常见于心包炎和心膜炎。心脏叩诊浊音区缩小：肺气肿。心脏叩诊浊音区扩大：可见心肥大、肺萎陷、心扩张及渗出性心包炎、心积水。三、心音的听诊正常心音：心搏动的地方可听到“咚-嗒”两个有节律不断交替出现的声音。第一心音：心室收缩音，主要是两个房室瓣关闭产生的振动。第二心音：主、肺动脉瓣关闭产生的振动。犬心音清亮、第一心音与第二心音音调、强度及持续时间大致相同。犬心音最佳听诊点第一心音：二尖瓣口：左
8、侧第5肋间，胸廓下1/3的中央水平线；三尖瓣口：右侧第4肋间，肋骨与肋软骨结合部稍下方；第二心音：主动脉瓣口：左侧第4肋间，肩关节水平线下方一、二指处；肺动脉瓣口：左侧第3肋间，靠胸骨的边缘处。心音听诊时主要注意心音的频率、强度、性质及有无分裂、杂音或心率不齐等变化。心音增强：热病初期、剧烈疼痛、轻度贫血或失血。心音减弱：心机能障碍后期、频死期及渗出性胸膜炎或心包炎。心杂音：拍水音、摩擦音。实习四 消化系统检查胃肠触诊、听诊的方法及其临床意义粪便样品采集处理方法粪便酸碱度测定粪便潜血试验粪便的显微镜检查肠胃触诊肠胃听诊（一）粪便酸碱度一般用pH试纸测定。酸碱度与饲料成分及肠内容物发酵或腐败过程
9、有关。取新鲜粪便（从粪内外层采取）2-3g，至于试管中，加蒸馏水8-10mL，混匀后用pH试纸测定。当肠管内糖类发酵旺盛时，酸度增加；蛋白质分解旺盛，碱度增加，见于胃肠炎。(正常弱碱)（二）潜血试验潜血是胃肠道有少量出血，红细胞破坏，一直粪便外观无异常改变，显微镜也不能证实。肉眼及显微镜均无法检测的微量血液称为潜血或隐血。粪便潜血对消化道出血的诊断有重要价值。常用的检验方法有联苯胺法和邻联甲苯胺法。两者原理和检验方法基本一致。原理：血红蛋白有氧化酶的作用，能分解过氧化氢而产生新生态氧，是联苯胺氧化为联苯胺蓝而呈现蓝色反应。试剂：联苯胺冰醋酸溶液：取联苯胺少许（约一刀尖）于小试管，加冰醋酸2mL
10、,震荡溶解；过氧化氢溶液检查方法：用镊子取绿豆大小粪块，与载玻片上涂成约1cm范围。然后将玻片在酒精灯上缓慢通过数次（破坏粪便中的酶类），待玻片冷却后滴加冰醋酸溶液约1mL及新鲜过氧化氢溶液1mL,用牙签搅动混合，在白纸上观察。结果判定：60s出现蓝色反应为痕迹反应，用表示30s出现蓝色反应为阳性反应，用表示15s出现蓝色反应为强阳性反应，用表示3s出现蓝色反应为最强阳性反应，用表示阳性提示出血性胃肠炎、犬钩虫病、溃疡性结肠炎等能引起胃肠道出血的疾病。（三）粪便显微镜检查生理盐水涂片法 用竹签挑取含粘液的脓血部分，成型便取多处，混悬于生理盐水中制成涂片，厚度以能透视纸上字迹为宜。生理盐水生理盐
11、水1 12 2滴滴 挑取少量粪便与盐水混挑取少量粪便与盐水混匀制成涂片。匀制成涂片。玻片玻片 低倍：全片观察有无虫卵、原虫与包囊高倍：仔细观察病理成分的形态和结构至少观察10个以上视野White Blood Cells,白细胞白细胞为圆形、有核、结构清晰的细胞，正常粪便中不见或偶见。脓球结构不清晰，常聚集在一起，甚至成堆存在。粪中发现多量白细胞及脓球表明肠道有炎症或溃疡。Red Blood Cells,红细胞正常粪便无红细胞。粪中大量的红细胞可能是后部肠道出血。有少量散在、形态正常的红细胞，同时有多量白细胞，说明肠道有炎症。巨噬细胞大单核细胞，核形多不规则，常吞有颗粒及细胞碎屑。上皮细胞正常粪
12、便很难见到，有多量上皮细胞同时有白细胞见于肠道炎症。寄生虫感染肠胃触诊听诊粪便收集处理、pH值测定潜血试验粪便显微镜检查实习五、泌尿系统检查（一）一、实习内容一、实习内容：掌握肾脏、膀胱的检查方法；掌握尿液的正常颜色、酸碱度、尿蛋白（硝酸法）、尿潜血（联苯胺法）的检查方法。二、动物及器材：二、动物及器材：尿液、PH试纸、试管、滴管、硝酸、联苯胺、冰醋酸、过氧化氢溶液 肾脏触诊膀胱触诊一、尿液采集保存一、尿液采集和保存采集原则：早晨。立即检验，超过30min，夏天可冷藏或加防腐剂。采集方法：自然、导尿、膀胱穿刺（不用于血检）。保存：防腐剂，3-4滴甲醛（100mL尿液）细菌学检查不可加。二、尿液
13、化学检验一、尿液酸碱度测定（pH）取决于饲料，植物为主的产生碱性尿；高蛋白谷物及动物性蛋白，通常产生酸性尿。哺乳幼龄动物均为酸性尿。犬pH:6-7pH降低（酸性尿）：热性病、长期饥饿、酸中毒（酮血病）pH增高（碱性尿）：尿道阻塞、膀胱炎。注意：新鲜。二氧化碳减少、细菌分泌尿素产生氨而使尿液变碱。二、尿蛋白定性检测原理：蛋白质遇酸发生凝固沉淀。试剂：35%硝酸溶液方法：取一小试管，先加35%硝酸1-2mL,后沿试管壁缓慢滴加尿液，使两液面重叠，静置3-5min观察结果，两液面产生白色环者为阳性反应。白色越宽，表示蛋白含量越高。三、尿潜血测定（联苯胺法）原理：血红蛋白的铁具有过氧化酶的作用，可分解
14、过氧化氢放出氧，使联苯胺氧化成蓝色。方法：取尿3-5mL置洁净试管中煮沸（破坏其他过氧化酶）。冷却后加联苯胺冰醋酸溶液数滴，再加3%过氧化氢数滴，混合，数秒钟现蓝色反应，表明尿蛋白阳性。肾脏、膀胱临床检查尿液收集、pH值检测尿蛋白检测尿潜血测定实习六、泌尿系统检查（二）尿糖的测定尿液酮体的测定尿液显微镜检查尿糖的测定（班氏试剂法）原理：在高热和强碱溶液中，葡萄糖或其他还原性糖能将溶液中蓝色的硫酸铜还原为黄色的氢氧化铜，进而形成红色的氧化亚铜沉淀。根据沉淀有无和色泽变化判断含量。班氏试剂+氢氧化钠 葡萄糖酸钠+氧化亚铜（红）试剂：班氏试剂：结晶硫酸铜17.3g，无水碳酸钠100.0g，柠檬酸钠1
15、73.0g及蒸馏水若干。先将无水碳酸钠和柠檬酸钠溶于700mL蒸馏水中，加热促其溶解，另将结晶硫酸铜溶于100mL蒸馏水中，待硫酸铜溶解后将其缓慢倾入前液中并加蒸馏水至1000mL，过滤后保存于橙色瓶中备用。方法：取班氏试剂5mL，加尿液0.5mL充分混合，加热煮沸1-2min，静置5min观察。管底出现黄色或红色沉淀者为阳性反应。沉淀越多表示尿葡萄糖含量越高。注意事项：1.尿中如有蛋白质，先把尿加热煮沸，过滤后再检。2.尿液与试剂必须按要求加入，否则会出现假阳性。酮体的测定（郎氏法）原理：丙酮或乙酰乙酸与亚硝基铁氰化钠作用后，再与氨液接触可产生紫红色化合物。冰醋酸可抑制肌酐产生类似的反应。试
16、剂：亚硝基铁氰化钠、冰醋酸、浓氨水（28%）检测方法：取尿液2mL于小试管内，加入亚硝基铁氰化钠结晶数小粒，震荡使其溶解，再加冰醋酸3-4滴，混匀后，将试管倾斜，沿管壁缓慢加入浓氨水0.5-1mL,观察。结果判定：在两液交界处呈现紫红色环即为阳性。根据颜色产生的时间，可做定量判定：立即出现深紫红色环（+）逐渐出现紫红色环（+）10min内出现淡紫色环（+）10min后不显色（）尿液显微镜检查（尿沉渣）尿沉渣标本的制备与检查方法：将尿液静置或低速（1500-200r/min）离心5-10min。倒去上清液，剩余少量尿液，然后混合，用吸管吸少量放在载玻片上，盖上盖玻片，在显微镜较暗视野下观察。观察
17、到大体印象后再转换高倍镜仔细观察。通常无需染色，即可进行尿沉渣检验。染细胞-瑞氏染液；脂肪-苏丹；细菌-革兰氏红细胞：小而圆，淡褐色，无细胞核。尿中出现红细胞，见于肾炎、膀胱炎、尿道炎、结石及泌尿器官出血。白细胞：比红细胞略大，有细胞核。尿中出现大量白细胞，见于肾及尿路炎症。肾上皮细胞：圆形或多角形，细胞核大而明显，核位于细胞中央。尿中出现，表明肾实质损伤，见于急性肾小球肾炎、肾病等。肾实质严重损伤尿液中盐类结晶的析出与否决定于该物质的饱和度及尿液的pH、温度和胶体物质的浓度。实习七、浆膜腔积液检查浆膜腔包括浆膜腔包括胸腔、腹腔、心包腔、关节腔胸腔、腹腔、心包腔、关节腔。这些腔在生理。这些腔在
18、生理情况下，其中只有情况下，其中只有少量的液体少量的液体，这些正常的少量液体在腔，这些正常的少量液体在腔内起润滑作用，以减少脏器活动的磨擦，内起润滑作用，以减少脏器活动的磨擦，一般采集不到一般采集不到。病理情况下，浆膜腔内有大量液体潴留而形成浆膜腔积液。病理情况下，浆膜腔内有大量液体潴留而形成浆膜腔积液。因积液因积液部位不同部位不同而分胸腔积液（胸水）、腹腔积液（腹而分胸腔积液（胸水）、腹腔积液（腹水）、心包腔积液和关节腔积液。根据水）、心包腔积液和关节腔积液。根据产生的原因及性质产生的原因及性质不同，浆膜腔积液分为不同，浆膜腔积液分为漏出液和渗出液漏出液和渗出液。（1 1）漏出液：）漏出液：
19、是通过毛细血管滤出，并在组织间隙或浆膜腔内积聚的是通过毛细血管滤出，并在组织间隙或浆膜腔内积聚的非炎症性组织液，多为双侧性非炎症性组织液，多为双侧性。常见原因和机制有：毛。常见原因和机制有：毛细血管流体静压增高：常见于静脉回流受阻、充血性心衰细血管流体静压增高：常见于静脉回流受阻、充血性心衰和晚期肝硬化；血浆胶体渗透压减低，见于血浆清蛋白和晚期肝硬化；血浆胶体渗透压减低，见于血浆清蛋白的浓度明显减低的各种疾病，如的浓度明显减低的各种疾病，如营养不良营养不良、肾病综合症、肾病综合症、严重贫血严重贫血；淋巴回流受阻，见于丝虫病、肿瘤压迫等；淋巴回流受阻，见于丝虫病、肿瘤压迫等；钠水潴留，见于充血性
20、心力衰竭，肝硬化和肾病综合症。钠水潴留，见于充血性心力衰竭，肝硬化和肾病综合症。（2 2）渗出液：）渗出液：多为炎性积液，多为单侧性多为炎性积液，多为单侧性，产生机制是由于微生物的，产生机制是由于微生物的毒素、缺氧以及炎性介质等作用，使毒素、缺氧以及炎性介质等作用，使血管内皮细胞损伤血管内皮细胞损伤，血管通透性增高，以致液体、血液大分子物质和细胞从血血管通透性增高，以致液体、血液大分子物质和细胞从血管内渗出至血管外，组织间隙及浆膜腔所形成的积液，常管内渗出至血管外，组织间隙及浆膜腔所形成的积液，常见原因见原因多为细菌感染所致多为细菌感染所致，也见于肿瘤、外伤、血液、胆，也见于肿瘤、外伤、血液、
21、胆汁、胰液和胃液等刺激的非感染性的原因，如结核性、细汁、胰液和胃液等刺激的非感染性的原因，如结核性、细菌性感染、淋巴瘤、间皮瘤、肺梗死、类风湿病、菌性感染、淋巴瘤、间皮瘤、肺梗死、类风湿病、SLESLE等。等。腹水的采集 抽取狗等大动物腹水，让狗按自然站立位固定，穿刺部位在耻骨前缘与脐之间，腹中线两侧。剪毛消毒，局部浸润麻醉。操作者左手拇指、食指紧绷穿刺部位的皮肤，右手控制穿刺深度做垂直穿刺。注意不可刺的太深，以免刺伤内脏。穿刺针进入腹腔后，腹水多时可见因腹压高而自动流出。腹水太少可轻轻回抽，并同时稍稍转动一下针头，一旦有腹水流出，立即固定好针头及注射器的位置连续抽取。抽取大鼠、小鼠的腹水方法
22、简单，用左手拇指及食指捏住动物颈部皮肤，无名指、小手指及手掌夹住其尾巴固定好动物，使其腹部略朝上，在腹股沟和腹中线之间，消毒皮肤,用8号针头刺入腹腔,如腹压高腹水自然流出，如腹水太少，可借助注射器抽取。抽腹水时注意不可速度太快，腹水多时不要一次大量抽出，以免因腹压突然下降导致动物出现循环功能障碍等问题。一般检查及临床意义（一）理学检验（一）理学检验 1 1、量量：该项目由临床医护人员测量或全部送检验科。积：该项目由临床医护人员测量或全部送检验科。积液量可随病情、部位和抽取目的不同而异，可由数毫升至上千液量可随病情、部位和抽取目的不同而异，可由数毫升至上千毫升。毫升。2 2、透明度透明度：可根据
23、标本不同的情况用：可根据标本不同的情况用“清清”“”“浑浊浑浊”报报告，积液的透明度常与其所含告，积液的透明度常与其所含细胞、细菌、蛋白质细胞、细菌、蛋白质等程度有关。等程度有关。漏出液因其含细胞、蛋白质少，且无细菌，常为清晰、透明液漏出液因其含细胞、蛋白质少，且无细菌，常为清晰、透明液体。渗出液因含大量细胞、细菌等呈不同程度的浑浊。体。渗出液因含大量细胞、细菌等呈不同程度的浑浊。3 3、凝固性：、凝固性：漏出液漏出液中含纤维蛋白原甚微，中含纤维蛋白原甚微，一般不凝固一般不凝固，而，而渗出液渗出液中含较多纤维蛋白原和细菌、细胞破坏后稀中含较多纤维蛋白原和细菌、细胞破坏后稀放的凝血活酶，放的凝血
24、活酶，易凝固易凝固，但如果渗出液中含有纤维，但如果渗出液中含有纤维蛋白溶解酶时，可分解纤维蛋白而不出现凝固。蛋白溶解酶时，可分解纤维蛋白而不出现凝固。粘粘稠样积液多见恶性间皮瘤稠样积液多见恶性间皮瘤，其黏稠度高主要是由于，其黏稠度高主要是由于其中透明质酸含量的增加。含有碎屑样物质的积液其中透明质酸含量的增加。含有碎屑样物质的积液多见于类风湿性疾病。多见于类风湿性疾病。4 4、颜色、颜色：红色：淡红色、暗红色或鲜红色。见于穿刺损伤、红色：淡红色、暗红色或鲜红色。见于穿刺损伤、结核、肿瘤、内脏损伤结核、肿瘤、内脏损伤、出血性疾病等。、出血性疾病等。浆膜液为棕色：常见于阿米巴肝脓肿穿入胸膜腔。浆膜液
25、为棕色：常见于阿米巴肝脓肿穿入胸膜腔。浆膜液为黑色：提示胸膜霉菌感染。浆膜液为黑色：提示胸膜霉菌感染。浆膜液为绿色：常见铜绿假单胞菌感染（浆膜液为绿色：常见铜绿假单胞菌感染（绿脓杆绿脓杆菌菌）。）。白色：脓性或乳白色，见于化脓性感染时大量白细胞和白色：脓性或乳白色，见于化脓性感染时大量白细胞和细菌，细菌，胸导管阻塞或破裂时胸导管阻塞或破裂时的炎性乳糜积液，积液含有大量的炎性乳糜积液，积液含有大量脂肪变性细胞时的假性乳糜积液所致。脂肪变性细胞时的假性乳糜积液所致。黄色或淡黄色：见于各种原因的黄色或淡黄色：见于各种原因的黄疸黄疸。（二）化学检查浆膜浆膜黏蛋白定性黏蛋白定性（RivaltaRival
26、ta试验试验）取100mL量筒一个，加100mL清水。然后滴入冰醋酸2滴，混匀。再加入标本l-2滴立即观察结果。如有明显白云雾状混浊，下降很快，沉淀能拖长20cm左右，为阳性反应。如混浊不明显，下降缓慢，中途消失者为阴性反应。漏出液为阴性反应，渗出液为阳性反应。（三）显微镜检查细胞分类计数取适量新鲜浆膜腔积液，离心沉淀，倾去上清液，将沉淀物涂成薄片（必要时沉淀物内加一滴血清，使沉淀物附在玻片上）。如穿刺液本身已甚混浊，可不离心，直接推制涂片。涂片干燥后，用瑞氏染液染色，做血细胞分类计数。漏出液内细胞较少，主要是间皮细胞，体积较大，常聚集成堆，有时可见少数淋巴细胞。渗出液中细胞较多。嗜中性白细胞
27、大量出现时，见于急性化脓性疾病。淋巴细胞大量出现时，见于慢性疾病，如慢性胸膜炎及肿瘤等。嗜酸性白细胞增多，见于过敏性疾病及寄生虫病。如见到形态不规则而体积较大的细胞，胞浆中有空泡，核仁或核分裂，可能为肿瘤细胞，必须慎重鉴定。瑞氏染色液原理与用途原理与用途适用于各种脱落细胞和血细胞的形态观察前的染色（涂片染色），为临床观察血细胞内部结构、识别血细胞及其异常变化、进行白细胞分类计数及检查血液内寄生虫和细菌等诊断提供帮助。细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆是由酸性物质组成，它与碱性染料美蓝结合，染成紫蓝色，而细胞浆则相反，因含有碱性物质而与酸性染料伊红结合，染成粉红色；经瑞氏染色后，细胞核和淋巴细胞胞浆被染成
28、紫蓝色，细胞浆染成粉红色。使用方法使用方法1.制作血液或脱落细胞涂片，自然干燥固定；2.用蜡笔在血膜两头划线，滴加瑞氏染液35滴以覆盖整个血膜，固定12分钟；滴加等量或稍多的缓冲液（未加缓冲液涂片上有染料颗粒残留），吸球吹匀或摇动玻片染色510分钟；3.用流动水从玻片的一侧冲去染液，自然干燥（或滤纸吸干）；4.镜检。注意事项注意事项1.制作血涂片应注意：玻片应干净，推片与载片保持3045角，血液推开后应立即在空气中挥动，使其迅速干燥，以免血细胞变形，固定后方可染色；2.血膜未干透,细胞尚未牢固附在玻片上,在染色过程中容易脱落,因此血膜必需充分干燥；3.染液的浓度、染色时间及实验室的温度要控制，
29、染液越淡，室温越低,所需染色时间越长，因此染色时间应视具体情况而定；所加染液以覆盖涂片为宜，不能过少，以免蒸发而染料沉淀；4.细胞染色对氢离子浓度十分敏感，稀释染液必须用缓冲液，冲洗用水应近中性,否则各种细胞染色反应异常，致使细胞的识别困难；5.冲洗时应用流水将染液冲去，不能先倒掉染液，以免染料沉着于血片上；6.染色液可重复使用，但不能无数次重复，若有沉淀物应过滤后使用；7.染色过深可用甲醇或酒精适当脱色,最好不复染。实习八 血液检查-白细胞分类计数白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比。器材与
30、试剂器材：载玻片、染色架、显微镜、香柏油、白细胞分类计数器、吸水纸等试剂：瑞氏染液犬采血采血时将动物固定，局部剪毛、消毒，在静脉向心端绑扎血带或由助手紧握，使血管充盈，将注射器刺入静脉，放松静脉近端压迫，以适当速度抽血，一次可抽血10-20mL。采血部位：前肢皮下头静脉或后肢小隐静脉采血2022-12-2091制备血涂片v1)1)推片：血膜推片：血膜厚薄适中，边缘整齐，厚薄适中，边缘整齐，外观呈舌形，头、体、尾分明外观呈舌形，头、体、尾分明。v2 2）干燥）干燥v3 3）标记）标记 染色v1 1）准备：血膜干透后，用蜡笔在两端划线，以防止染）准备：血膜干透后，用蜡笔在两端划线，以防止染色时染液
31、外溢。将血涂片放染色架上。色时染液外溢。将血涂片放染色架上。v2 2）加染液：在涂片上滴加瑞氏染液）加染液：在涂片上滴加瑞氏染液数滴数滴，以染液覆盖，以染液覆盖整个血膜为度，稍静置整个血膜为度，稍静置1min1min。v3 3）加缓冲液：滴加缓冲液等量或多些，与上述染液充）加缓冲液：滴加缓冲液等量或多些，与上述染液充分混匀。分混匀。v4 4）染色：染色）染色：染色10min.10min.v5 5）冲洗：不要先倒掉染液，平持血涂片用流水缓缓冲）冲洗：不要先倒掉染液，平持血涂片用流水缓缓冲洗干净。洗干净。v6 6）干燥：直立血涂片，使其自然干燥。）干燥：直立血涂片，使其自然干燥。2022-12-2
32、093良好血涂片外观良好血涂片外观羽（子弹头）状尾部羽（子弹头）状尾部周边有空白周边有空白无划痕无划痕羽羽状状尾尾部部2022-12-2094不良血涂片不良血涂片2022-12-2095 白细胞白细胞分类：分类：先用低倍镜选择厚薄适宜，染先用低倍镜选择厚薄适宜，染色良好，细胞分布均匀的体尾交色良好，细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，界处，滴加香柏油一滴，油镜油镜下下分类计数。分类时要有分类计数。分类时要有秩序秩序的连的连续进行，避免主观选择视野。通续进行，避免主观选择视野。通常分类计数常分类计数100100个白细胞，计算个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。并报告各种白细胞所占比例。
33、低倍镜下所见2022-12-2096体尾交界处体尾交界处理想区理想区域域 细胞重叠细胞重叠 细胞太稀细胞太稀理想区域理想区域2022-12-2097各类成熟白细胞的形态学：各类成熟白细胞的形态学：q中性粒细胞（中性粒细胞（NeNe）：在瑞氏染色血涂片上呈圆在瑞氏染色血涂片上呈圆形，直径形，直径101013m13m，胞浆染粉红色，核形一叶，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见，染成深（杆状核）至五叶不等，以三叶者多见，染成深紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。紫红色，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。2022-12-2098q嗜酸性粒细胞（嗜酸性粒细胞（EoEo）：较中性粒
34、细胞稍大，胞较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。2022-12-2099q嗜碱性粒细胞（嗜碱性粒细胞（BaBa）：胞浆中含有大小不等胞浆中含有大小不等的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显的嗜碱性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红溶于水或因功能活动而脱颗粒所
35、致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。色常看不清，呈杆状或分叶状。2022-12-20100q淋巴细胞（淋巴细胞（LyLy）：胞体呈圆形，直径介于胞体呈圆形，直径介于6 615m15m之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多之间，在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，直径见，直径6 69m9m，核大呈深紫色致密而浓染，核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。2022-12-20101q单核细胞
36、（单核细胞（MoMo）：在瑞氏染色涂片上为在瑞氏染色涂片上为121220m20m，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝多样，最重要的特点是染色质较细致疏松，呈丝网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含网状或条缕状，着色较淡胞浆较多，淡兰色，含大量细小尘土样颗粒大量细小尘土样颗粒。2022-12-20102正常犬外正常犬外周血白细胞分类参考值：周血白细胞分类参考值：Ne Ne 6060%70%70%Ly Ly 12%12%3030%Mo 3%Mo 3%10%10%EoEo 2%2%10%10%BaBa 0 0202
37、2-12-20103 1.1.血涂片制备要厚薄适宜、均匀、头体尾分血涂片制备要厚薄适宜、均匀、头体尾分明，无溶血、无空洞。明，无溶血、无空洞。2.2.很多因素影响涂片时血膜的厚度。很多因素影响涂片时血膜的厚度。血滴大、血滴大、血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。反之则血膜薄。3.3.按一定顺序，有秩序地连续进行，按一定顺序，有秩序地连续进行，避免重避免重复选择复选择视野。视野。4.4.分类计数时应同时报告分类计数时应同时报告RBCRBC和和WBCWBC的形态是的形态是否有异常。退化细胞不计数。否有异常。退化细胞不计数。2022-12-20104RBC异常2022-12-20105中性粒细胞中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞淋巴细胞淋巴细胞嗜碱性粒细胞（右）嗜碱性粒细胞（右）单核细胞单核细胞血小板血小板2022-12-20106实验实验报告报告1原理2方法3各类细胞百分比报告4讨论
