1、中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学1中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用理论验证性实验理论验证性实验2中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用大纲要求：大纲要求：【教学目标教学目标】通过实验使学生加深对延胡索功通过实验使学生加深对延胡索功效的认识，加深对中药材功能的理解和记忆效的认识，加深对中药材功能的理解和记忆,并并验证延胡索镇痛的药理作用。验证延胡索镇痛的药理作用。3中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【实验考
2、核实验考核】实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用n实验考勤实验考勤n实验态度实验态度n操作过程操作过程n实验报告实验报告n实验分析实验分析n实验关键技术实验关键技术4中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学延胡索（第九节理血药延胡索（第九节理血药2）【基源】本品为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang 的干燥块茎。【相关理论相关理论】实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用5中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学延胡索延胡索【产地分布产地分布】主产主产于浙江、江苏、湖于浙江、江苏、湖北、湖
3、南、辽宁、北、湖南、辽宁、山东等地。山东等地。【相关理论相关理论】实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用6中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学延胡索延胡索【性状性状】本品呈不规则的本品呈不规则的扁球形，直径扁球形，直径0.5 1.5cm。表面黄色或黄褐色，有不表面黄色或黄褐色，有不规则网状皱纹。顶端有略规则网状皱纹。顶端有略凹陷的茎痕，底部常有疙凹陷的茎痕，底部常有疙瘩状凸起。质硬而脆，断瘩状凸起。质硬而脆，断面黄色，角质样，有蜡样面黄色，角质样，有蜡样光泽。气微，味苦。光泽。气微，味苦。【相关理论相关理论】实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索
4、对小白鼠的镇痛作用7中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学延胡索延胡索【炮制炮制】n延胡索延胡索 除去杂质，洗净，干燥，切厚片或用时捣碎。n醋延胡索醋延胡索 取净延胡索，照醋炙法（参照兽药典附录）炒干，或照醋煮法（参照兽药典附录）煮至醋吸尽，切厚片或用时捣碎。【相关理论相关理论】实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用延胡索延胡索醋延胡索醋延胡索炙炙醋炙：引药归肝经，醋炙：引药归肝经，加强镇痛效果。加强镇痛效果。8中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学延胡索延胡索【性味归经性味归经】辛、苦，温。归肝、脾经。辛、苦，温。归肝、脾经。【功能功能】活血
5、散瘀，行气止痛。活血散瘀，行气止痛。【主治主治】“诸痛诸痛”气滞血瘀，跌打损伤，产气滞血瘀，跌打损伤，产后瘀阻，风湿痹痛。后瘀阻，风湿痹痛。【相关理论相关理论】实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用9中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学延胡索延胡索【化学成分化学成分】本品主要含生物碱，其主要成分为延胡索甲素、延胡索乙索、延胡索丙素(原阿片碱)、延胡索丁素等。尚含淀粉、挥发油、树脂、去氢紫堇碱等。【相关理论相关理论】延胡索素延胡索素实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用延胡索乙素延胡索乙素10中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验
6、教学实验教学延胡索延胡索【现代研究现代研究】（1）有明显的镇痛作用。）有明显的镇痛作用。（2）有镇静、催眠作用。）有镇静、催眠作用。（3）减少胃液分泌。）减少胃液分泌。（4）扩张冠状血管。）扩张冠状血管。【相关理论相关理论】实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用11中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【实验原理实验原理】热板法热板法 延胡索能活血行气止痛，延胡索能活血行气止痛，是止痛的良药。热板法是是止痛的良药。热板法是筛选镇痛药的经典方法：筛选镇痛药的经典方法：小鼠的足部受热板刺激而小鼠的足部受热板刺激而产生疼痛时，就发生产生疼痛时，就发生舔足舔足的特
7、殊反应。以接触热板的特殊反应。以接触热板到舔后足所需的时间作为到舔后足所需的时间作为痛阈值，以此为观测指标。痛阈值，以此为观测指标。舔足舔足t 30550.5第一组：第一组：延胡索液延胡索液第二组：第二组：哌替啶注射液哌替啶注射液第三组：第三组：生理盐水生理盐水 实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用舔足舔足12中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【实验原理实验原理】热板法热板法 延胡索能活血行气止痛，延胡索能活血行气止痛，是止痛的良药。热板法是是止痛的良药。热板法是筛选镇痛药的经典方法：筛选镇痛药的经典方法：小鼠的足部受热板刺激而小鼠的足部受热板刺激而
8、产生疼痛时，就发生产生疼痛时，就发生舔足舔足的特殊反应。以接触热板的特殊反应。以接触热板到舔后足所需的时间作为到舔后足所需的时间作为痛阈值，以此为观测指标。痛阈值，以此为观测指标。550.5第二组：第二组：哌替啶注射液哌替啶注射液第三组：第三组：生理盐水生理盐水 实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用舔足舔足杜冷丁杜冷丁13中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【实验原理实验原理】热板法热板法 延胡索能活血行气止痛，延胡索能活血行气止痛，是止痛的良药。热板法是是止痛的良药。热板法是筛选镇痛药的经典方法：筛选镇痛药的经典方法：小鼠的足部受热板刺激而小鼠的足部
9、受热板刺激而产生疼痛时，就发生产生疼痛时，就发生舔足舔足的特殊反应。以接触热板的特殊反应。以接触热板到舔后足所需的时间作为到舔后足所需的时间作为痛阈值，以此为观测指标。痛阈值，以此为观测指标。舔足舔足t 30550.5第一组：第一组：延胡索液延胡索液第二组：第二组：哌替啶注射液哌替啶注射液第三组：第三组：生理盐水生理盐水 实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用舔足舔足14中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【实验组织】n 班级进行分组，每组名学生；n 每组用15只预选合格实验动物；n 每组有一名专业教师或实验教师（兼职教师）进行指导。实验五、延胡索对小白
10、鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用15中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学n 实验动物实验动物 小白鼠小白鼠（合格（合格15/组）。组）。1【实验准备实验准备】实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用雌性雌性为什么？为什么？16中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学n 实验器材实验器材 鼠笼、水浴锅、烧杯（500ml）、天平、注射器、秒表、钳子、镊子、棉棒等。2【实验准备实验准备】实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用17中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学n实验药品实验药品 p哌替啶注射液哌替
11、啶注射液lmgmlp延胡索水煎醇沉延胡索水煎醇沉液液4gml。p生理盐水生理盐水p苦味酸（标记用）苦味酸（标记用）3【实验准备实验准备】实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用18中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【课程组织过程课程组织过程】n 教师演示关键步骤和技术。教师演示关键步骤和技术。n 学生在教师的指导下亲自操作各种按摩手法。学生在教师的指导下亲自操作各种按摩手法。n 结果统计和讨论以及分析总结。结果统计和讨论以及分析总结。实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用19中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【方
12、法与步骤方法与步骤】要求：要求：n 浓度：浓度：2；n 温度：室温（温度：室温（0）醇沉醇沉（一）延胡索的煎制（一）延胡索的煎制水煎醇沉（提前准备）水煎醇沉（提前准备）实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用水煎水煎醇沉：水煎剂经浓缩到一定浓度醇沉：水煎剂经浓缩到一定浓度（12g/ml）后，加入）后，加入23倍量倍量95%乙醇（使含乙醇量达到乙醇（使含乙醇量达到6070%），边加边搅拌，即有），边加边搅拌，即有沉淀析出，置冰箱内沉淀析出，置冰箱内24小时使小时使沉淀完全。过滤，滤液回收乙醇沉淀完全。过滤，滤液回收乙醇后以蒸馏水溶解。过滤后稀释成后以蒸馏水溶解。过滤后稀释
13、成规定浓度即可，必要时可以重复规定浓度即可，必要时可以重复此乙醇沉淀此乙醇沉淀23次。次。20中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【方法与步骤方法与步骤】n调节水浴锅，使温度恒定在550.5，每次取小鼠1只，放入烧杯内。记录自放入烧杯至出现舔后足舔后足所需时间(s)，作为该鼠的痛阈值。（二）预选实验动物（二）预选实验动物结合给药前第一次痛阈值结合给药前第一次痛阈值测定测定550.5t 30第第1次次实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用21中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【方法与步骤方法与步骤】n t30为合格动物为合格动物n 预选合格
14、小鼠预选合格小鼠15只只/每每实验小组。实验小组。（三）预选实验动物（三）预选实验动物结合给药前痛阈值测定结合给药前痛阈值测定t 30550.5第第1次次实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用22中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【方法与步骤方法与步骤】n 分分3组组n 每组每组5只。只。（四）实验动物分组（四）实验动物分组（15只）只）第第2次测定给药前痛阈值次测定给药前痛阈值t 30550.5第第2次次第一组：实验组第一组：实验组 a第二组：阳性对照组第二组：阳性对照组 b第三组：阴性对照组第三组：阴性对照组 c再次测定痛阈值，计算平均数，再次测定
15、痛阈值，计算平均数，作为该鼠给药前的痛阈值作为该鼠给药前的痛阈值 a1_ a15;b1_ b15;c1-c15.实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用23中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【方法与步骤方法与步骤】（五）用药（五）用药 第一组：实验组第一组：实验组 a第二组：阳性对照组第二组：阳性对照组 b第三组：阴性对照组第三组：阴性对照组 c第一组：第一组：延胡索液延胡索液 0.2ml10 g第二组：第二组：哌替啶注射液哌替啶注射液0.2ml10g第三组：第三组：生理盐水生理盐水 0.2ml10g腹腔注射腹腔注射0.2ml10 g体重体重实验五、延胡
16、索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用 腹腔注射（ip）左手固定小鼠，使腹部在上，头部下倾，右手持注射器，取45角刺入一侧下腹部向头端刺入腹腔（图）。进针部位不宜太高，刺入不能太深，以免伤及内脏。注射量一般为0.10.2 ml/10g体重。24中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【方法与步骤方法与步骤】（五）测定给药后小鼠痛阈值（五）测定给药后小鼠痛阈值 给药后的15、30、60、90min测定各鼠痛阈值。若小鼠在热板上若小鼠在热板上60s仍无痛觉反应，应取出，按仍无痛觉反应，应取出，按60s计。计。abc 15 15 30 30 60 60 90 90实验五、延胡
17、索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用25中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【方法与步骤方法与步骤】（五）数据记录（五）数据记录 给药前给药前给药后给药后组别组别第第1次次第第2次次平均平均15 15 30 30 45 45 60 60 90 90 延胡索注射液延胡索注射液a1a5哌替啶注射液哌替啶注射液b1b5生理盐水生理盐水c1c5实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用26中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【方法与步骤方法与步骤】（六）数据处理（六）数据处理（1）组内处理）组内处理 分组动物数给药前平均值（s）给药后痛
18、阈值（s）痛阈提高百分率%1530609015306090延胡索液5哌替啶5生理盐水5实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用27中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【方法与步骤方法与步骤】（六）数据处理（六）数据处理（2）班级）班级12小组数据汇总小组数据汇总分组动物数给药前平均值（s）给药后痛阈值（s）痛阈提高百分率%1530609015306090延胡索液60哌替啶60生理盐水60实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用28中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【方法与步骤方法与步骤】（六）数据处理（六）数据处理（
19、2）痛阈提高百分率痛阈提高百分率用药后平均痛阈值用药后平均痛阈值用药前平均痛阈值用药前平均痛阈值用药前平均痛阈值用药前平均痛阈值100%实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用29中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【方法与步骤方法与步骤】数据参考数据参考 实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用30中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【注意事项注意事项】n室温以室温以15152020为宜，过低则小鼠反应迟钝，过高则过为宜，过低则小鼠反应迟钝，过高则过于敏感，而引起跳跃，影响实验的准确性。于敏感，而引起跳跃，影响实验的
20、准确性。n正常小鼠一般放入烧杯后正常小鼠一般放入烧杯后101015s15s内出现不安，举前肢，内出现不安，举前肢，舔后足，踢后肢，跳跃等现象。这些动作均不作为疼痛指舔后足，踢后肢，跳跃等现象。这些动作均不作为疼痛指标，只有标，只有舔后足舔后足才作为疼痛的指标。才作为疼痛的指标。n一般不选用雄性小鼠，因雄性小鼠阴囊可触及烧杯底部，一般不选用雄性小鼠，因雄性小鼠阴囊可触及烧杯底部，易呈现敏感反应，影响实验结果。易呈现敏感反应，影响实验结果。实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用31中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【开始演示开始演示】t 30550.5n教
21、师演示实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用32中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学n学生操作【指导操作指导操作】n捉小鼠n称重n选择实验动物（给药前第一次痛阈值测定）n实验动物分组（第2次痛阈值测定）n测定给药后15、30、60、90的痛阈值n数据记录n数据处理n实验动物处理实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用33中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学【实验总结实验总结】n数据收集n发现问题n布置作业n实验报告n实验考核【问题讨论问题讨论】试述延胡索镇痛的有效成分试述延胡索镇痛的有效成分及机理。及机理。实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用34中兽医基础与临床中兽医基础与临床 实验教学实验教学本次实验结束！实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用实验五、延胡索对小白鼠的镇痛作用35
