1、新冠肺炎实验室检测新冠肺炎实验室检测一、标本采集一、标本采集二、二、新型冠状的实验室检测新型冠状的实验室检测三、病原生物安全实验活动要求三、病原生物安全实验活动要求主要内容主要内容（一）采集对象（一）采集对象新型冠状观察病例及需要进行新型冠状诊断或鉴别新型冠状观察病例及需要进行新型冠状诊断或鉴别诊断者；其它需要进一步筛查检测的研究材料（如溯诊断者；其它需要进一步筛查检测的研究材料（如溯源分析）。源分析）。标本采集标本采集（二）标本采集要求。（二）标本采集要求。从事新型冠状检测标本采集的技术人员应经过生物安全培从事新型冠状检测标本采集的技术人员应经过生物安全培训（培训合格）。训（培训合格）。住院
2、病例的标本由所在医院医护人员在当地疾控机构专业住院病例的标本由所在医院医护人员在当地疾控机构专业人员指导下采集。人员指导下采集。密切接触者标本由当地疾控机构负责采集。密切接触者标本由当地疾控机构负责采集。根据实验室检测工作的需要，可结合病程及研究需求根据实验室检测工作的需要，可结合病程及研究需求多次采样。多次采样。标本采集标本采集 根据新型冠状病例特点根据新型冠状病例特点 实验室检查：实验室检查：发病早期白细胞总数正常或减低，淋巴细胞计发病早期白细胞总数正常或减低，淋巴细胞计数减少。数减少。部分患者出现肝酶、肌酶增高。部分患者出现肝酶、肌酶增高。多数患者多数患者C C反应蛋白和血沉升高，降钙素
3、原正常。反应蛋白和血沉升高，降钙素原正常。严重者严重者D-D-二聚体升高，血清淀粉样蛋白应该升高。二聚体升高，血清淀粉样蛋白应该升高。以上检测指标的血样护士采集后尽快送检验科。以上检测指标的血样护士采集后尽快送检验科。（三）（三）标本采集种类（针对新型冠状疑似病例）标本采集种类（针对新型冠状疑似病例）采集的临床标本种类虽然有咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽采集的临床标本种类虽然有咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、深咳痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等取物、深咳痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等 鉴于生物安全考虑鉴于生物安全考虑只采集病人的咽拭子和急性期血清，只采集病人的咽拭子和急性期血清，接诊医护人员在白银区疾控
4、中心专业人员指导下采集样接诊医护人员在白银区疾控中心专业人员指导下采集样本，并由区疾控工作人员直接带走送白银市疾控。本，并由区疾控工作人员直接带走送白银市疾控。（四）标本采集方法（限于咽拭子）（四）标本采集方法（限于咽拭子）咽拭子：咽拭子：用用2 2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将两根拭子头时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将两根拭子头浸入含浸入含3ml 3ml 采样液的管中，尾部弃去，旋紧管采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。盖。（五）标本包装（五）标本包装标本采集送达后应在生物安全柜内分装成三份（由市疾控完成）。一份送标本采集送达后应在生物安全
5、柜内分装成三份（由市疾控完成）。一份送省疾控中心检测用，一份送国家疾控中心病预防控制所检测，一份保存以备复省疾控中心检测用，一份送国家疾控中心病预防控制所检测，一份保存以备复核。核。所有标本应放在大小适合的带螺旋盖、耐冷冻的样本采集管里，拧紧。所有标本应放在大小适合的带螺旋盖、耐冷冻的样本采集管里，拧紧。容器外注明样本编号、种类、姓名及采样日期。容器外注明样本编号、种类、姓名及采样日期。将密闭后的标本放入大小合适的塑料袋内密封，每袋装一份标本。将密闭后的标本放入大小合适的塑料袋内密封，每袋装一份标本。（六）标本保存（六）标本保存 用于分离和核酸检测的标本应尽快进行检测，用于分离和核酸检测的标本
6、应尽快进行检测，1.241.24小时内能检测的标本可置于小时内能检测的标本可置于 4 4C C 保存；保存；2.242.24小小 时内无法检测的标本则应置于时内无法检测的标本则应置于 -70-70C C 或以下保存（或以下保存（如无如无-7070C C 保存条件，则于保存条件，则于-20-20C C 冰箱暂存）。冰箱暂存）。3.3.血清可在血清可在4 4C C 存放存放3 3天，可在天，可在 -20-20C C以下长期保存。以下长期保存。4.4.标本运送期间应避免反复冻融，并应设立专柜单独保存标本。标本运送期间应避免反复冻融，并应设立专柜单独保存标本。（七）标本送检（七）标本送检样本采集后应尽
7、快送往样本采集后应尽快送往市疾控进行核酸筛市疾控进行核酸筛查检测查检测当咽拭子或血清运往实验室的运输中出现当咽拭子或血清运往实验室的运输中出现耽搁时，适当的低温保存处理是非常重要耽搁时，适当的低温保存处理是非常重要的，建议在能获得干冰的地方采用干冰保的，建议在能获得干冰的地方采用干冰保藏运输样本藏运输样本二、二、新型冠状的实验室检测新型冠状的实验室检测目前监测方法主要有：目前监测方法主要有：1.1.新型冠状全基因测序鉴定新型冠状全基因测序鉴定2.2.实时荧光定量实时荧光定量RT-PCRRT-PCR监测技术监测技术3.3.的分离的分离市疾控：实时荧光定量市疾控：实时荧光定量RT-PCRRT-PC
8、R监测监测（收到标本后（收到标本后3 3小时完成）小时完成）在实验室要确认一个病例为阳性，满足其中一个在实验室要确认一个病例为阳性，满足其中一个条件即可：条件即可：（一）同一份标本中新型冠状（一）同一份标本中新型冠状（五）检测项目（五）检测项目5.I5.I、新型冠状核酸测定、新型冠状核酸测定 (r RT-PCR(r RT-PCR方法）方法）推荐选用针对新型冠状的推荐选用针对新型冠状的 ORFl abORFl ab、E E、N N 引物和探针，具体可参考上海引物和探针，具体可参考上海辉睿生物科技有限公司、上海捷诺生物科技有限公司、上海伯杰医疗科技辉睿生物科技有限公司、上海捷诺生物科技有限公司、上
9、海伯杰医疗科技有限公司的单通道、双通道或多通道检测试剂盒。有限公司的单通道、双通道或多通道检测试剂盒。5.25.2、结果判断：、结果判断：阴性：阴性：无无 Ct Ct 值或值或 Ct Ct 为为 4040。阳性：阳性：Ct Ct 值值(37,(37,可报告为阳性。可报告为阳性。可疑：可疑：Ct Ct 值在值在 37-40 37-40 之间，之间，建议重复实验建议重复实验 ，若重做结果若重做结果Ct Ct 值值 40,40,扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性。根据目前掌握的新型冠状的生物学性状、传播特性、致病性根据目前掌握的新型冠状
10、的生物学性状、传播特性、致病性、临床资料等信息，考虑到新型冠状聚集性发病且有重症病例、临床资料等信息，考虑到新型冠状聚集性发病且有重症病例，并有死亡病例的特点，实验活动暂时按照病原微生物危害程，并有死亡病例的特点，实验活动暂时按照病原微生物危害程度分类中第二类病原微生物进行管理，具体要求如下：度分类中第二类病原微生物进行管理，具体要求如下：三、病原生物安全实验活动要求三、病原生物安全实验活动要求（一）培养。（一）培养。指的分离、培养、鉴定、中和试验、活及其蛋白纯化、冻干以及指的分离、培养、鉴定、中和试验、活及其蛋白纯化、冻干以及产生活的重组试验等操作。产生活的重组试验等操作。利用活或其细胞（或
11、细胞提取物），不经灭活进行的生利用活或其细胞（或细胞提取物），不经灭活进行的生 化分析化分析、血清学检测、免疫学检测等操作视同培养。、血清学检测、免疫学检测等操作视同培养。上述操作应在上述操作应在 BSL-3 BSL-3 实验室进行。使用培养物提取核酸实验室进行。使用培养物提取核酸 ，裂裂解剂或灭活剂的加入必须在与培养等同级别的实验室和防护条件下解剂或灭活剂的加入必须在与培养等同级别的实验室和防护条件下进行，裂解剂或灭活剂加入后可比照未经培养的性材料的防护等级进行，裂解剂或灭活剂加入后可比照未经培养的性材料的防护等级进行操作。进行操作。BSL-3 BSL-3 实验室应具有开展相应活动的资质。实
12、验室应具有开展相应活动的资质。（二）动物实验（二）动物实验指以活动物的实验。应在指以活动物的实验。应在 ABSL-ABSL-3 3 实验室操作。实验室操作。ABSL-ABSL-3 3 实验室应具有开展相应活动的资质。实验室应具有开展相应活动的资质。（三）未经培养的性材料的操作（三）未经培养的性材料的操作指未经培养的性材料在采用可靠的方法灭活前进行的抗指未经培养的性材料在采用可靠的方法灭活前进行的抗原检测、血清学检测、核酸检浏、生化分析等操作，应原检测、血清学检测、核酸检浏、生化分析等操作，应在在 BSL-2 BSL-2 实验室操作。如果疫情发生变化实验室操作。如果疫情发生变化 ，出现死亡，出现
13、死亡病例，该项检测应在加强型病例，该项检测应在加强型BSL-2 BSL-2 实验室操作。未经可实验室操作。未经可靠灭活或固定的人和动物组织标本因含量较高，其操作靠灭活或固定的人和动物组织标本因含量较高，其操作的防护级别应比照培养。的防护级别应比照培养。（四）灭活材料的操作（四）灭活材料的操作指性材料或活在采用可靠的方法灭活后进行的抗指性材料或活在采用可靠的方法灭活后进行的抗原检测、血清学检测、核酸检测、原检测、血清学检测、核酸检测、生生化分析、分子化分析、分子 生物学实验等不含致病性活的操作，应在生物学实验等不含致病性活的操作，应在BSL-1 BSL-1 实实验室操作。验室操作。（五）无性材料的操作（五）无性材料的操作指针对确认无性的材料的各种操作，包括但不限指针对确认无性的材料的各种操作，包括但不限于无性的于无性的 DNA DNA 或或cDNA cDNA 操作，应在操作，应在 BSLBSL-1 1 实验室实验室进行。进行。
