1、第第12章章 吸光光度法吸光光度法12.1 概述概述12.2 吸光光度法基本原理吸光光度法基本原理12.3 分光光度计分光光度计12.4 显色反应及影响因素显色反应及影响因素12.5 光度分析法的设计光度分析法的设计12.6 吸光光度法的误差吸光光度法的误差12.7 常用的吸光光度法常用的吸光光度法12.8 吸光光度法的应用吸光光度法的应用吸光光度法：分子光谱分析法的一种，又称分光光吸光光度法：分子光谱分析法的一种，又称分光光度法度法(spectrophotometry(spectrophotometry)，属于分子，属于分子吸收光谱分析方法吸收光谱分析方法 基于外层电子跃迁基于外层电子跃迁1
2、2.1 概述概述n吸收光谱吸收光谱n发射光谱发射光谱n散射光谱散射光谱n分子光谱分子光谱n原子光谱原子光谱12.2 吸光光度法基本原理吸光光度法基本原理1 吸收光谱产生的原因吸收光谱产生的原因 光光:一种电磁波一种电磁波,波粒二象性波粒二象性 光谱名称波长范围X射线0.110nm远紫外光10200nm近紫外光200400nm可见光400750nm近红外光0.752.5um中红外光2.55.0um远红外光5.01000um微波0.1100cm无线电波11000m当光子的能量与分子的当光子的能量与分子的 E匹配时，匹配时，就会吸收光子就会吸收光子 E=hu u=hc/l la 跃迁类型跃迁类型 价
3、电子跃迁价电子跃迁：*,*;n*,n*E(h)顺序:n*n*104)c.产物的化学组成稳定产物的化学组成稳定d.化学性质稳定化学性质稳定e.反应和产物有明显的颜色差别反应和产物有明显的颜色差别(l l60nm)没有颜色的化合物，需要通过适当的反应定量没有颜色的化合物，需要通过适当的反应定量生成有色化合物再测定生成有色化合物再测定 显色反应显色反应1 显色反应显色反应NNN NSO3HHO3SOHH O As32AsOOOHMO络合反应络合反应氧化还原反应氧化还原反应2 显色反应类型显色反应类型NNFe2+3NHHOOCCOOH+VO3-+H+NNCOOHCOOHHOOCHOOC+VO2+H O
4、2离子缔合反应离子缔合反应CCOOHNN(C H )22 5(C H )22 5H+O-AuCl4.成盐反应成盐反应(CH3)2NCHSCOCCHNS(CH3)2NCCOCCHNS+AgAgS褪色反应褪色反应 Zr(IV)-偶氮胂偶氮胂III络合物测定草酸络合物测定草酸吸附显色反应吸附显色反应 达旦黄测定达旦黄测定Mg(II),Mg(OH)2吸附达旦黄呈红色吸附达旦黄呈红色 3 显色剂显色剂无机显色剂无机显色剂:过氧化氢，硫氰酸铵，碘化钾过氧化氢，硫氰酸铵，碘化钾NNNNSO3HHO3SOHOHAsO H32H O As32有机显色剂：有机显色剂：偶氮类：偶氮胂偶氮类：偶氮胂III三苯甲烷类三
5、苯甲烷类 三苯甲烷酸性染料三苯甲烷酸性染料 铬天菁铬天菁S S OCH3COOHHOCClClSO3HCH3COOH 三苯甲烷碱性染料三苯甲烷碱性染料 结晶紫结晶紫 CN(CH3)2(H3C)2NN(CH3)2邻菲罗啉类：新亚铜灵邻菲罗啉类：新亚铜灵 NNCH3CH3肟类：丁二肟肟类：丁二肟 CCCH3NNOHHOCH34 多元络合物多元络合物混配化合物混配化合物 Nb-5-Br-PADAP-酒石酸 V-PAR-H2O 离子缔合物离子缔合物 AuCl4-罗丹明B金属离子金属离子-配体配体-表面活性剂体系表面活性剂体系 Mo-水杨基荧光酮-CTMAB 5 影响因素影响因素a 溶液酸度（溶液酸度（
6、pH值及缓冲溶液）值及缓冲溶液）u 影响显色剂的平衡浓度及颜色，改变lu 影响待测离子的存在状态，防止沉淀u 影响络合物组成形式形式 pH max(nm)形式形式 pH max(nm)H4L+1.2 462-465 Sn4+1.0 530H3L 4.8-5.2 462,490 Ga3+5.0 550H2L-8.4-9.0 512HL2-11.4-12.0 532-538pH对苯芴酮及其络合物的颜色影响对苯芴酮及其络合物的颜色影响 b 显色剂的用量显色剂的用量稍过量，处于平台区稍过量，处于平台区 c 显色反应时间显色反应时间针对不同显色反应确定显示时间 显色反应快且稳定；显色反应快但不稳定；显色
7、反应慢，稳定需时间；显色反应慢但不稳定d 显色反应温度显色反应温度加热可加热可加快反应速度，导致显色剂或产物分解e 溶剂溶剂f 干扰离子干扰离子 有机溶剂，提高灵敏度、显色反应速率有机溶剂，提高灵敏度、显色反应速率消除办法：消除办法：提高酸度，加入隐蔽剂，改变价态提高酸度，加入隐蔽剂，改变价态 选择合适参比选择合适参比 褪色空白褪色空白(铬天菁铬天菁S测测Al，氟化铵褪色，消除锆、镍、钴干扰，氟化铵褪色，消除锆、镍、钴干扰)选择适当波长选择适当波长 12.5 光度分析法的设计光度分析法的设计1.选择显色反应选择显色反应2.选择显色剂选择显色剂3.优化显色反应条件优化显色反应条件4.选择检测波长
8、选择检测波长5.选择合适的浓度选择合适的浓度6.选择参比溶液选择参比溶液7.建立标准曲线建立标准曲线测量条件选择测量条件选择1 测定波长选择测定波长选择选择原则：选择原则：“吸收最大，干扰最小吸收最大，干扰最小”灵敏度选择性2 测定浓度控制测定浓度控制控制浓度控制浓度 吸光度吸光度A：0.20.8减少测量误差减少测量误差3 参比溶液选择参比溶液选择仪器调零仪器调零消除吸收池壁和溶液对入射光的反射消除吸收池壁和溶液对入射光的反射 扣除干扰扣除干扰试剂空白试剂空白试样空白试样空白褪色空白褪色空白 4 标准曲线制作标准曲线制作0123456780.000.050.100.150.200.250.30
9、0.35Aconcentration理论基础：朗伯理论基础：朗伯-比尔定律比尔定律 相同条件下相同条件下测定不同浓度标准测定不同浓度标准溶液的吸光度溶液的吸光度AAc 作图作图12.6 吸光光度法的误差吸光光度法的误差非单色光引起的偏移非单色光引起的偏移物理化学因素：非均匀介质及化学反应物理化学因素：非均匀介质及化学反应吸光度测量的误差吸光度测量的误差 对朗伯对朗伯-比尔定律的偏移比尔定律的偏移显色反应体系中的副反应影响M+nL=MLn 显色反应*其它离子可能与显色剂反应：M+nL=MLn,消耗显色剂；*L受酸效应影响，有L-、HL+等形态存在；被测离子有络合效应。表观稳定常数：通常被测离子有
10、99以上络合时，可以认为反应完全，此时这个式子可以判断不同条件下显色反应的完全程度1 非单色光引起的偏移非单色光引起的偏移复合光由复合光由l l1和和l l2组成，对于浓度不同的溶液组成，对于浓度不同的溶液a和和b,引起的吸光度的偏差不一样，浓度大，复合光引引起的吸光度的偏差不一样，浓度大，复合光引起的误差大，故在高浓度时线性关系向下弯曲。起的误差大，故在高浓度时线性关系向下弯曲。*其它光学方面的干扰 杂散光 散射光 反射光 非平行光*被测物质溶液本身的化学、物理性质引起偏离朗伯比尔定律介质不均匀（胶体，悬浮、乳浊）；物质在溶液中发生化学反应（离解、缔合、异构等），重铬酸钾铬酸钾，Cr2O72
11、-+H2O-=2HCrO4-=2H+2CrO42-；再如PAR的偶氮醌腙式次甲基兰的单体 max 660nm,二聚体max 610nm非均匀介质非均匀介质 胶体，悬浮、乳浊等对光产生散射，使实测胶体，悬浮、乳浊等对光产生散射，使实测吸光度增加，导致线性关系上弯吸光度增加，导致线性关系上弯2 物理化学因素物理化学因素离解、缔合、异构等离解、缔合、异构等如：如：Cr2O72-+H2O-=2HCrO4-=2H+2CrO42-PAR的偶氮醌腙式的偶氮醌腙式 化学反应化学反应吸光度标尺刻度不均匀吸光度标尺刻度不均匀3 吸光度测量的误差吸光度测量的误差A0.434，T36.8%时，测量的相对误差最小时，测
12、量的相对误差最小A=0.20.8,T=1565%，相对误差，相对误差4%dc/c=dA/A=dT/TlnT Er=dc/c100=dA/A100=dT/TlnT100令令ST=0.01,计算计算T不同值时的不同值时的Sc/c，当，当TlnT对对T进行进行微分时，其值为零时，微分时，其值为零时，Sc/c最小，此时最小，此时T=0.368。1.示差吸光光度法示差吸光光度法目的：提高光度分析的准确度和精密度目的：提高光度分析的准确度和精密度 解决高解决高(低低)浓度组分浓度组分(i.e.A在在0.20.8以外以外)问题问题分类：高吸光度差示法、低吸光度差示法、分类：高吸光度差示法、低吸光度差示法、精
13、密差示吸光度法精密差示吸光度法特点：特点：以标准溶液作空白以标准溶液作空白原理：原理：A相对相对=A=e ebcx-e ebc0=e eb c准确度：读数标尺扩展准确度：读数标尺扩展,相对误差减少相对误差减少,c0愈接近愈接近cx,准确度提高愈显著准确度提高愈显著12.7 常用的吸光光度法常用的吸光光度法例：硫脲还原硫氰酸盐比色法测定钢铁中的钼。酸例：硫脲还原硫氰酸盐比色法测定钢铁中的钼。酸溶，硫酸高氯酸介质中，硫脲还原铁（溶，硫酸高氯酸介质中，硫脲还原铁（III）为铁）为铁(II),除干扰，还原钼（除干扰，还原钼（VI）为五价，）为五价，2.00mg/100ml的的钼标准溶液为参比溶液，用钼
14、标准溶液为参比溶液，用2.00-2.30mg/100ml的钼标的钼标准溶液，绘制工作曲线和测定样品溶液的吸光准溶液，绘制工作曲线和测定样品溶液的吸光度度,480nm测定测定A。2.双波长分光光度法(计算分光光度法）*光度加和性，溶液的总吸光度应等于各吸光物质的吸光度之和。A总=A1+A2+A3+An.对多组分混合物的分别测定须解联立方程,有联立方程法A1=1bc1+1bc2A2=2bc2+2bc1定量分析例如测定呋喃唑酮和小檗碱复方片剂中这两种物质的含量1cm池，分别在365、342nm波长处测定吸光度（A1和A2),按下式计算两组分：Cx=A1/1(b-m)/(b-a)Cy=A2/2b(m-
15、a)/m(b-a)Cx和Cy分别为呋喃唑酮和小檗碱的浓度；1和 2分别为呋喃唑酮在365和342nm波长处的吸收系数（E）；1和 2分别为硫酸小檗碱在365和342nm波长处的吸收系数（E）.m=A2/A1,a=2/1;b=2/1根据吸光度加和性得：A1=1 Cx+1 Cy (1);A2=2 Cx+2 Cy (2)m=A2/A1,a=2/1;b=2/1 代入（2）得：ma1=a 1 Cx+b 1 Cy (3)(1)代入（3）得Cx=A1/1(b-m)/(b-a)同理得到Cy=A2/2b(m-a)/m(b-a)2.双波长吸光光度法双波长吸光光度法 目的：解决浑浊样品光度分析目的：解决浑浊样品光度
16、分析 消除背景吸收的干扰消除背景吸收的干扰 多组分同时检测多组分同时检测 原理：原理：A=Al l1-Al l2=（e el l1-e el l2）b c 波长对的选择：波长对的选择：a.等吸光度点法，等吸光度点法，b.系数倍率法系数倍率法3.导数吸光光度法导数吸光光度法选选l l1为参比波长为参比波长,l l2为测量波长为测量波长得得 Al l1=e e xl l1bcx+e e yl l1bcy Al l2=e e xl l2bcx+e e yl l2bcy A=Al l2-Al l1=(e e x2bcx+e e yl l2bcy)-(e e xl l1bcx+e e yl l1bcy)
17、在等吸光度的位置在等吸光度的位置(G,F),e e yl l2 e e yl l1，则上式成为，则上式成为 A=(e e xl l2-e e xl l1）bcx A与与cx成正比成正比,可用于测定可用于测定例例,苯酚与苯酚与2,4,6-三氯苯酚三氯苯酚(y)混合物中混合物中苯酚苯酚(x)的双波长分光光度法测定。的双波长分光光度法测定。3.导数吸光光度法导数吸光光度法 目的：提高分辨率目的：提高分辨率 去除背景干扰去除背景干扰 原理：原理：dnA/dl ln l l 12.8 吸光光度法的应用吸光光度法的应用1 测定弱酸和弱碱的离解常数测定弱酸和弱碱的离解常数 AHB和AB-分别为有机弱酸HB在
18、强酸和强碱性时的吸光度，它们此时分别全部以HB或B-形式存在。HB H+B-H+B-Ka=HBpKa=pH+lg HBB-A=AHB+AB-pKa=pH+lg AB-AA-AHBlg AB-AA-AHB对对pH作图即可求得作图即可求得pKa 2 络合物组成确定络合物组成确定 饱和法（摩尔比法）饱和法（摩尔比法）制备一系列含钌制备一系列含钌3.010-5 mol/L(固定不变固定不变)和不和不同浓度（小于同浓度（小于12.010-5 mol/L）的）的PDT溶液，按溶液，按实验条件，实验条件，485nm测定吸光度测定吸光度,作图。作图。PDT:Ru=2:1等摩尔连续变化法等摩尔连续变化法固定固定
19、M+L,改变改变M,获得一系列吸光度值，吸获得一系列吸光度值，吸光度最大的值所对应的光度最大的值所对应的M与与L的比值，即获得的比值，即获得M:L比值。比值。Co(III)与与3，5二氯二氯PADAT的比值为的比值为1:2平衡移动法平衡移动法固定固定M,不断改变不断改变L，以，以lgMLn/M为纵坐标，为纵坐标，lgL为横坐标，作图，斜率为横坐标，作图，斜率n即是络合物中即是络合物中L:M的的比值；纵轴上的截距比值；纵轴上的截距lgK是络合物的稳定常数。是络合物的稳定常数。lgK+nlgL=lg(MLn/M)MLn K=MLnlgK+nlgL=lgA/(Amax-A)c.平衡移动法（对数作图法
20、）M+nLMLn 固定M,不断改变L，并以lgMLn/M为纵坐标，lgL为横坐标，（10）式为一直线方程，斜率n即是络合物中L:M的比值；纵轴上的截距lgK是络合物的稳定常数。上式中，M,L和MLn为平衡时各组分的摩尔浓度，L浓度由实验可知，由加入的L的总浓度减去形成络合物消耗的L浓度之差计算，一般形成络合物消耗的L与L总浓度相比不大，可忽略。MLn可由测得吸光度Ax计算，M可由Amax-Ax求得，上式变为：Vx是由试剂L溶液某次所取的体积。Lo是试剂原始浓度，VMK是实验时的容量瓶体积，故q为一常数。可以看出，由每次加入的试剂体积，并以lgMLn/M为纵坐标，lgVx为横坐标作图，斜率n表达
21、了络合物的组成。3 分析应用分析应用 痕量金属分析痕量金属分析临床分析临床分析食品分析食品分析1.血清总蛋白、清蛋白、及球蛋白测定盐析双缩脲法 540nm检测 蛋白质肽链540nm检测血清中清蛋白几乎由肝细胞合成，含量变化反映肝脏和免疫系统疾病 正常：总蛋白6-8g/dL；清蛋白：3.5-5g/dL;球蛋白1.5-3.0/dL。总蛋白高 严重腹泻，呕吐，发烧；总蛋白低 营养不良 球蛋白增加：炎征；结核病；麻风；疟疾；多发生骨髓瘤 清蛋白减低：肝、肾疾病；肝炎，肝功能衰竭、肾炎2.血清转氨酶测定 HCCOOHCH3NH2+COOHCOCH2CH2COOHGPTCOOHCOCH3+COOHHCCH
22、2CH2COOHNH2丙氨酸 酮戊二酸 丙酮酸 谷氨酸 3.血清转氨酶测定COOHCOCH3+NO2NO2HNH2NNaOH-H20COOHCCH3NNHNO2NO2 丙酮酸2，4-二硝基苯腙（红棕色，500nm）正常：40单位以下谷丙氨转氨酶以肝细胞中最多，心肌细胞中也较多，只有少量进入血液中，若血清中该酶含量高，肝有病或不正常4.血清乳酸脱氢酶(LDH)测定 COOHCOCH3COOHCHOHCH3+NAD+LDHpH8.8-9.8+NADH+H+COOHCOCH3+NO2NO2HNH2NNaOH-H20COOHCCH3NNHNO2NO2 乳酸 辅酶I 丙酮酸 还原性辅酶440nm检测正常
23、：血清，225-540单位；脑脊液，20-55单位 乳酸脱氢酶广泛存在，肝、心肌、肾脏、胰腺、肺和骨骼肌最多。如果这些组织有病，血液中该酶偏高5.血清碱性磷酸酶（AKP）测定 OPOONaONa+H2OAKPpH10OH+Na2HPO4AKP在碱性环境下，作用于磷酸苯二钠，使之水解释出酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化成红色与标准酚比较，测定AKP CCCCHNOH3CH3CC6H5+OHK3Fe(CN)6-4H,碱 性NH2CCCCHNOH3CH3CC6H5NOAKP存在各组织，肾脏、肝脏、牙齿和骨骼中较多，血液中如果该酶增高，说明肝胆系统有问题，如骨炎肝炎、肝癌
24、；减低，肾炎贫血 有色化合物在520nm测定6.邻甲苯胺法测定血糖在热乙酸溶液中，葡萄糖与邻甲苯胺缩合生成蓝色(620nm)的schiff碱 CH3NH2+CH2OH(CH2OH)4CHOCH3NCH(CH2OH)4CH2OH正常：70-100mg/dl降低：肿瘤，腺垂体机能减退7.血清-谷氨酰转肽酶（-GTP）测定 OCCH2CH2HCCOOHNH2HNOCCH2CH2HCCOOHNH2HN+-GTPOCCH2CH2HCCOOHHNHN+OCCH2CH2HCCOOHNH2NH2-L-谷氨酰-萘胺 -L-谷氨酰-L-谷氨酰-萘胺肽 NH2SO3HNaNO2HClN+SO3HNH2NNCl-+N
25、SO3H正常：40单位以下。临床意义：此酶主要来自肝脏，肝胆系统疾病酶活力高，明显增高见于肝癌、阻塞性黄疸、胰头癌、胰腺炎、传染性肝炎、胆道癌等，食酒和长期服用苯巴比妥等 520nm8.血脂（甘油三酯）测定 H2COCORHCH2COOCORCOR+3KOHCH2OHCHOHCH2OH+3RCOOK1.甘油三酯皂化 CH2OHCHOHCH2OH+2HIO42HCHO+HCOOH+2HIO3+H2O2.甘油氧化 3.甲醛、乙酰丙酮和氨水缩合反应生成3，5-二乙酰-2，6-二甲基吡啶（棕色，420nm）正常：30-150mg/dL.在在510nm波长处，波长处，2cm比色皿，测定比色皿，测定0.0
26、010（w/vw/v）某一有色络合物溶液，测得透）某一有色络合物溶液，测得透光率光率T为为0.420，已知，已知2.50103 Lmol-1cm-1，试求该有色络合物的摩尔质量。，试求该有色络合物的摩尔质量。例题例题解：解：已知已知T为为0.420，根据，根据A=lgT计算吸光度计算吸光度 A=lg0.420=0.377 根据根据A=bc计算有色络合物溶液浓度计算有色络合物溶液浓度c=A/b=0.377/(2.51032)7.5410-5(mol/L)根据有色络合物溶液根据有色络合物溶液0.0010浓度，一升该有色络合物溶液中有色络合物质量浓度，一升该有色络合物溶液中有色络合物质量为为1000
27、0.00101.0010-2（g）有色络合物摩尔质量为有色络合物摩尔质量为Mm/c=(1.00-2)/(7.5410-5)132.6（g/mol）1.1.用双环己酮测定浓度为用双环己酮测定浓度为25.025.0微克微克/25ml/25ml的的CuCu2+2+溶液，波长溶液，波长600nm,600nm,吸收池吸收池2cm,2cm,测得测得T%=50.1T%=50.1，求摩尔吸光系数，求摩尔吸光系数和桑德尔灵敏度和桑德尔灵敏度S S。例题例题解：用百分透光率计算溶液吸光度解：用百分透光率计算溶液吸光度 A-lgT=-lg 0.5010.300 求求Cu2+溶液浓度，溶液浓度，c=(25.010-6
28、103)/251.0010-3（gL-1）根据公式根据公式A=bc 求求，A/bc =0.300/(21.0010-3/63.55)=9600（Lmol-1cm-1）S=M/=63.55/9600 6.6210-3（gcm-2）2.某钢含镍约某钢含镍约0.12，用丁二酮肟光度法测定。试样溶液，用丁二酮肟光度法测定。试样溶液转入转入100ml容量瓶中，在适宜条件下显色，定容，容量瓶中，在适宜条件下显色，定容，1cm比色比色皿，在皿，在470nm测定，要求测量误差最小，应该称取试样多少测定，要求测量误差最小，应该称取试样多少克？克？1.3104（Lmol-1cm-1），），MNi=58.69解：根
29、据光度测量误差公式可知：当吸光度解：根据光度测量误差公式可知：当吸光度A0.434时，时，误差最小，误差最小，已知已知b=1,1.3104，根据，根据A=bc c=A/b0.434/（1.31041）3.3410-5(mol/L)100ml有色溶液中有色溶液中Ni的含量为的含量为 m=cVM 3.3410-510010-358.69 1.9610-4(g)已知某钢含镍约已知某钢含镍约0.12，则应称取试样质量为：，则应称取试样质量为：(1.9610-4/ms)100=0.12 ms=0.16g 3.用卟啉类显色剂光度法测定用卟啉类显色剂光度法测定Cu2+，2.00105Lmol-1cm-1。试
30、液中试液中Cu2+浓度在浓度在5.010-75.010-6mol/L范围内，使用范围内，使用1cm比色皿进行测定，吸光度和透光率的范围如何？若光度计的透光率读比色皿进行测定，吸光度和透光率的范围如何？若光度计的透光率读数误差数误差T为为0.005，可能引起的浓度测量相对误差为多少？，可能引起的浓度测量相对误差为多少？解：已知解：已知2.00105 Lmol-1cm-1,b=1cm 根据根据A=bc计算吸光度范围，计算吸光度范围，A1=2.0010515.010-70.100 A2=2.0010515.010-61.00 根据公式根据公式A=-lgT计算透光率计算透光率 T1=10-0.100=
31、0.794 T2=10-1.00=0.100由以上计算获得吸光度由以上计算获得吸光度A范围范围0.1001.00，相应透光率范围为，相应透光率范围为0.7940.100。因。因T为为0.005，根据光度测量误差公式，根据光度测量误差公式 c/c=(0.434T)/TlgT，可得，可得c/c=(0.4340.005)/(0.794lg0.794)=0.0273=-2.73%c/c=(0.4340.005)/(0.100lg0.100)=0.0217=-2.17%4.某有色溶液在1cm比色池中测得吸光度0.30，问入射光强度减弱了多少？如果用3cm比色皿测吸光度，入射光强度又减弱多少？解：首先了解
32、吸光度A、吸收光强度Ia、入射光 强度I0、透过光强度I和透光率T的关系，I0=I+Ia,T=I/I0,A=-lgT，则有：IaI0I,Ia/I0=（I0I）/I0=1I/I0=1T ，T=10-AIa/I0=（I0I）/I0=1I/I0=1T110-A 当1cm，A=0.30时，Ia/I0=110-0.301-0.500.5050当3cm时，根据AKbc，A=0.303=0.90,则 ：Ia/I0=110-0.901-0.1260.87487.45.用试剂空白调节光度计透光率为100%，测得某试液的吸光度为1.301，如果透光率读数误差T0.003，光度测量相对误差为多少？若以T10的标准溶
33、液为参比溶液，该试液的透光率为多少？此时测量相对误差又为多少？根据A=lgT式计算普通光度法的透光率T=10-A 10-1.301=0.050=5.0%普通光度法测量相对误差为根据公式c/c=(0.434T)/TlgT计算c/c=(0.434T)/TlgT（0.4340.003）、（0.05lg0.05）=2%用示差法时，10的标准溶液为参比溶液，试液的透光率为T相对5.0/10%=50%示差法测量时，其相对误差为c/c=(0.434T相对)/T相对（lgT相对+lgTs）已知T相 对0.003，T相 对50，Ts=10%，c/c（0.4340.003）/0.50（lg0.50+lg0.10）0.2 说明示差法的相对误差为普通法的1/10。课后练习nP.474n12;13;14;16;17n 谢谢注意！谢谢注意！
