1、刘云洪刘云洪4v正确的标本采集、运送、保存和处理对于提高培养结正确的标本采集、运送、保存和处理对于提高培养结果的阳性率以及保证微生物室的工作质量至关重要。果的阳性率以及保证微生物室的工作质量至关重要。正确的标本采集和运送是准确的病原学诊断的前提！正确的标本采集和运送是准确的病原学诊断的前提！不规范的标本采集、保存和运送是导致细菌培养阳性不规范的标本采集、保存和运送是导致细菌培养阳性率低、临床符合率差的重要原因。率低、临床符合率差的重要原因。规范的标本采集和运送是细菌培养成功的关键！规范的标本采集和运送是细菌培养成功的关键！51.1.及时采集微生物标本作病原学检查。及时采集微生物标本作病原学检查
2、。2.尽量在抗菌药物使用前或停药一周后采集标本，如不能停用抗菌药物，应于下次抗菌药物应用前采集。应在感染的急性期或伤口局部治疗前采集标本。3.选择正确的解剖部位，并以适当的技术、方法与容器收集足量的标本。4.采样时严格执行无菌操作采样时严格执行无菌操作，将污染情形降至最低。5.收集真正感染病灶处的标本，且避免邻近区域微生物的污染。6.采用无菌卫材收集标本，并装于坚固且密合性佳的无菌容器中。容器须灭菌处理，防止渗漏，但不得使用消毒剂。标标本中不可添加防腐剂。7.采样后立即送检，最好在采样后立即送检，最好在2h2h内。内。如不能及时送检，应将标本置于适当的储存环境待送，但存放一般不能超过24h。6
3、8.尽量不要以棉花拭子收集标本。以棉拭子采集的标本如咽拭子、伤口拭子等宜插入恰当的运送培养基送检。淋球菌培养等标本应使用专用的纤维拭子，不得使用一般棉拭子。9.混有正常菌群的标本如痰、尿液等，不可置肉汤培养基内送检。10.每份标本都应贴上标签并标明必要信息，在检验申请单上填写足够的有关临床资料。包括病人情况（病区、病人姓名、住院号）和标本情况（标本类型、检验目的、采集部位、采集方法、采集时间等）11.同一天同一检测目的的标本（血液标本除外）一般只需检测一次（份）。涂片检查最好和细菌培养同时做！8v采集程序:皮肤消毒程序：推荐三步法（酒精碘伏酒精）培养瓶消毒程序：75%酒精消毒静脉穿刺和培养瓶接
4、种程序v采血量：成人8-10ml，儿童1-3ml。骨髓采集量1-2mlv采血时间和数量:采血时间:在寒战或体温高峰到来之前0.5-1h，或于寒战或发烧后1h内采血。采血数量：尽量在使用抗菌药之前（感染性心内膜炎除外），在24h内采集2-3份血培养。采血间隔：在采集血培养后的2-5天内不需要再重复采血（除外心内膜炎和导管相关性败血症）v标本运送：立即送检，室温保存，切勿冷藏。9v皮肤消毒程序（三步法）:70酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上用一根蘸有碘酊或碘伏的棉签消毒皮肤（1-2碘酊作用30s或10碘伏60s），从穿刺点向外以1.5cm-2cm直径画圈消毒。70酒精脱碘：用70酒精涂去碘液，待酒
5、精干燥后采血。v培养瓶消毒程序：打开塑料瓶盖用70%酒精（不能用碘酒）消毒血培养瓶橡皮塞，作用60s，注入血液之前用无菌纱布或棉签擦干表面残余酒精。v静脉穿刺和培养瓶接种程序：可戴乳胶手套固定静脉（不可接触穿刺点），用注射器无菌穿刺取血后，直接注入血培养瓶中（勿换针头），并轻轻颠倒混匀数次以防血液凝固。立即送检，切勿冷藏！v注意：从静脉取血；不要与血气和血沉标本一起采血；不推荐血入瓶前换针头；不推荐静脉血直接入瓶；不宜在静脉导管或静脉留置口采血（除非怀疑导管相关性血流感染）。10v成人采血量5-10ml（最好8-10ml），儿童采血量1-3ml（不超过总血量的1）。血液和肉汤之比为1：51：1
6、0。骨髓采集量1-2ml。成人菌血症血液含菌量很低（通常1CFU/ml）,因此增加送检血液可以提升检出;而儿童菌血症血液含菌量常超过100CFU/ml，是成人10-100倍，因此采集血少于成人不会影响培养阳性率。1CFU=1百万个细菌。11v采集时间：据研究表明：细菌通常在病人寒战和发烧前1小时进入血流，因此规范规定在病人发热高峰前1小时抽血。考虑到方便操作，建议常规血培养应尽量在使用抗菌药物前，于病人寒战或发热开始时30-60分钟内，同时于不同部位采集2-3份血培养，除非怀疑有感染性心内膜炎或其他静脉内感染，才可分开时段采集。v采集数量：在24h内采集23份血培养(一次静脉采血注入到多个培养
7、瓶中应视为单份血培养)。入院前两周内接受抗菌药物治疗的患者,连续3d,每天采集2份。v 采血间隔：采血培养后的2至5天内，不需要重复采血培养（因为治疗后的2至5天内血液中的感染细菌不会马上消失）。12可疑急性原发性菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎,应在不同部位采集23份血标本。不明原因发热,如隐性脓肿,伤寒热和波浪热,先采集23份血标本,2436h后估计体温升高之前(通常在下午)再采集2份以上。可疑菌血症或真菌菌血症,但血培养持续阴性,应改变血培养方法,以获得罕见的或苛养的微生物。可疑细菌性心内膜炎,在12h内采集3份血标本,如果24h后阴性,再采集3份以上的血标本。13v采集
8、时间：最好在抗菌药物使用前采集。v采集方法：通常用腰穿的方法采集脑脊液，整个过程需以最严格的无菌操作技术进行。采集量应2ml。v标本运送：抽取出的脑脊髓液分置于无菌试管内，迅速送至细微生物室。如不能立即送检，将标本保存于35温箱或室温，不可放置于冰箱。14v无菌采集是培养成功的首要因素。v标本采集后应立即送检（脑膜炎球菌有自溶酶，离体后回迅速自溶。肺炎链球菌和流感嗜血杆菌离体后极易死亡。）。延迟送检时一定不能放冰箱，肺炎链球菌和流感嗜血杆菌等对温度敏感的细菌在冰箱会很快死亡。v各种无菌体液标本，如胸腹水、浆膜腔积液及各种穿刺液等亦可注入血培养瓶以提高培养的阳性率。15v采集时间：尽量在抗菌药物
9、使用前（多数药物从尿道排泄）。v采集方法：清洁中段尿法。采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的外阴和男性的外生殖器包括包皮内，然后用清水冲洗。把开始的尿液弃掉，然后取中段的尿液。v标本运送：留取尿液后2h内送达实验室，不能立即送检者，可暂存4冰箱（不超过6h）。v注意事项：长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取尿标本。导尿留取尿液时，集尿袋内的尿液和导尿管末端的尿液不能用于培养。16v采集时间：尽量在使用抗菌药物之前v采集方法：自然咳痰：以晨痰为佳。咳痰前应清洁口腔如刷牙和漱口，然后用力咳出呼吸道深部痰，直接吐入于无菌容器中。痰少或无痰者可用3-5%NaCl水溶液5ml雾化吸入5min导痰（气道高反
10、应如哮喘病人不宜采用此法）。对于难于自然咳痰者可用微生物室提供的一次性无菌吸痰杯抽取气管深部分泌物。小儿取痰法最好用微生物实验室提供的一次性无菌吸痰杯抽取气管深部分泌物。采集数量：对于细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续23天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现改变。标本运送：标本应尽快送检（1-2h内），如不能及时送检，室温保存2h，4冰箱保存24h。17v应由临床医师采集，用无菌棉拭子采集。淋球菌检查时，不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈3cm深取样送检，要避免受阴道分泌物污染。v若怀疑年幼女童有淋病性阴道炎时，则标本由阴道外围部位取得。v男性怀疑有急性淋病时，则由尿
11、道取分泌物标本作涂片及培养，若怀疑有慢性淋病、前列腺炎、精囊炎，标本可由医师采集前列腺或精囊液。v标本采集后立即送检，禁止冷藏！18v采集时间：腹泻患者应在用药前、急性期采集；沙门菌感染、肠热症应在第2周或第3周采集。v采集方法：自然排便者可用小木棒挑取有脓血和黏液的部位的粪便2-3克，（如液状粪便取絮状物1-3ml）盛于无菌的、密封的、不吸水的容器内送检；对不易获得粪便患者及幼儿，可用直肠拭子采集。v标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存2h v怀疑沙门菌、志贺菌以外的细菌引起腹泻时如大肠埃希菌0157:H7的病例，送检前临床医生须通知实验室，并于检验单上特别注明，以便提高此菌的分离率
12、。19v眼、耳、鼻、喉标本采集后应立即送检，防止干燥，禁止冷藏。v应注明具体标本来源如眼标本注明是眼睑、结膜还是角膜，并注明左眼还是右眼。20v采集方法：闭锁脓肿：一般用穿刺或手术引流的方法采集，不能用拭子。消毒覆于脓肿表面的皮肤，用注射器将脓肿内容物吸出。然后切开脓肿、引流，取部分脓肿壁送检。开放病灶和脓肿：用无菌盐水擦去表面渗出物，用蘸有无菌生理盐水的拭子采集溃疡基底部或边缘部的标本，置于无菌管中送检。烧伤伤口：清创，出现渗出物后用拭子用力采集病灶基底部或边缘的标本。也可送组织标本。脓疱或水疱：酒精消毒使之干燥，对于患儿用23号针头挑破脓疱，拭子采集脓疱液和基底部标本。21v注意事项注意事
13、项迅速送往实验室，1小时内不能培养应将标本冷藏。皮肤消毒对培养结果至关重要。不要仅送检脓液。脓液不能代表伤口特点，应在病灶活动区域或基底部采集标本。除非有渗出物，干燥、结痂伤口一般不做培养标记：不要只写“伤口”标记标本，应有专门的描述和解剖来源。注明渗出液来自开放伤口还是闭合伤口。小儿要求：小儿感染常出现皮疹如水泡等，应在这些地方仔细采集标本培养以发现病原体。创伤标本如没有炎性细胞说明可能只是采集了表皮正常菌群，与疾病过程无关，应重新采集。22 标本在尚未进行检验或未能立即送检时，必须储存在适当的环境下，以防止病原菌死亡，或因共生菌滋生过多，使得病原菌分离不出来，下表简介各类标本储存的环境：储
14、存环境 标本来源 4冰箱 痰、尿液、粪便、气管冲洗物、导尿管、静脉导管、脓液和伤口分泌物细菌或真菌培养；无菌体液（胸腹水、心包液、关节液、鞘膜积液、胆汁）真菌培养；支原体培养；衣原体检查；血清学检查（包括ASO、RF、肥达反应）室温（25）脑脊液、生殖道、眼、耳、鼻、喉、血培养、血管导管尖、活检组织细菌或真菌培养；无菌体液（胸腹水、心包液、关节液、鞘膜积液、胆汁）细菌培养；厌氧菌培养；淋球菌培养标本 23v总的拒收标准总的拒收标准申请错误：如粪便、咳出痰液、尿液、下生殖道标本要求做厌氧培养，阴道分泌物要求做淋球菌涂片标识错误：无标签或标签不完整，或标本标识与申请单标识不一致；没有标出标本采集时
15、间及部位；没有在申请单上注明标本来源和送检目的等 送检错误：送检延误。容器错误：没有用无菌容器，容器破裂或渗漏标本不符合要求双份标本（同一天两份相同检测的标本，血液标本除外）24拒收标准 处理方式 申请单注明的标本种类与送检标本不符 与原送检部门联系，退回申请单，要求审核并重送符合要求的标本。申请单上填写项目不全或与标本的标签不符或容器上未贴标签与原送检部门联系，要求补充完整申请单或重贴标签或重送标本。检验单上未注明样本来源和培养项目或仅注明身体部位者（如胸、腿）查询申请医师，补足标本信息。仅有申请单无标本或无菌容器内无标本与原送检部门联系，退回申请单，要求重送标本标本外漏及明显受污染（如开塞
16、）与原送检部门联系，退回申请单，建议重送标本。标本收集不符合采集要求 退回申请单，及时通知临床，告知正确收集方法，要求重送标本样本混入消毒液 或防腐剂退回申请单，及时通知临床，建议重送标本。送检延误，超过要求送检时限联系送检部门，退回申请单，要求重送标本。25拒绝标准处理方式标本量过少或已明显干燥与原送检部门联系，退回申请单，要求重送标本。申请项目不适合如血液培养同时要求涂片革兰氏染色，肛门或直肠标本请求做革兰染色，以检查淋球菌。联系申请医师，建议删去请求革兰染色项目 送检容器不当或破损渗漏与原送检部门联系，退回申请单，要求重送标本。穿刺液标本严重凝固，无菌部位标本（如脑脊液、脓、穿刺液、尿液
17、等）为非无菌管采集。退回申请单，并注明标本不当，要求重送标本。一支拭子同时做细菌、支原体、衣原体及真菌培养 询问医师并补送标本，如不能补送，则按医师要求优先次序处理 同一天同一病人重复送多次同一检测目的的相同样本（血液标本除外）一般只检查一次即可，可与临床医生进行协商。26序号 检验项目 标本送达时限 标本接收至进行检验时间 检验的周期（标本接收至报告发出时间）1肥达氏反应 无无上午送检下午出下午送检第二天下午出2普通细菌培养+药敏（包括尿、脓液、分泌物、生殖道、等）2小时 1小时 阴性结果2天阳性结果随时与医生联系，3天后出正式报告3普通细菌培养+药敏（包括痰、粪便、鼻咽喉拭子等）2小时 1
18、小时 阴性结果1天阳性结果随时与医生联系，2天后出正式报告4血培养立即 1小时 阳性结果随时电话与临床医生联系，正式报告3天以上，阴性结果7天 5浆膜腔积液、胆汁、眼部标本、脑脊液细菌培养15分钟 30分钟 阴性结果2天阳性结果随时与医生联系，3天后出正式报告6真菌培养 1小时 2小时 阳性结果随时报告阴性结果7天7涂片找真菌、淋球菌等1小时 2小时 当天下午8涂片找抗酸杆菌 1小时 2小时 当天下午27v1.我院对病原菌的药物敏感试验我院对病原菌的药物敏感试验，是用纸片琼脂扩散法（又称Kirby-Bauer试验）测定抑菌圈的大小，再根据CLSI标准得出“敏感”“耐药”“中介”的判断，在化验单
19、上，分别标注“S”“R”“I”。28v2.为什么细菌药敏的抗生素和别的医院不一样，为什么细菌药敏的抗生素和别的医院不一样，而且还有很多其它抗生素没有做药敏试验？而且还有很多其它抗生素没有做药敏试验？v答：答：(1)细菌药敏的抗生素如何选择：主要是根据本医院拥有的抗生素情况、临床使用抗生素的特点（比如儿童和成人的区别）以及CLSI标准等选择，尽量选择符合我们医院实际情况的抗生素组合。(2)在整套药敏试验中，已经包含了本医院临床上常见抗生素类别。每一类抗生素里所选择的是具有标志性的抗生素，它的结果可以“预报”同类其它抗生素。(3)我们尽量在每张报告单的评语栏里注明抗生素的“预报”情况以供参考。29
20、v3.为什么有时出现细菌培养的结果与临床感染情况不符？为什么有时出现细菌培养的结果与临床感染情况不符？v答：答：主要有五种可能：(1)用药后，细菌受到抑制，或假死，或死亡，或在抗生素作用下形成L型细菌，培养结果无细菌生长，造成假阴性。(2)标本在采样时未按规范操作导致“标本不合格”，以致检出的病原菌，非患者感染的真正病原菌。(3)采样或送检或培养时，标本受到污染，以致把污染菌当成病原菌。(4)一些厌氧菌感染，我们做普通培养无细菌生长，但实际感染仍存在。(5)一些生长非常缓慢的细菌（如分枝杆菌）感染，我们做普通细菌培养，在两天内尚未形成肉眼可见菌落以致漏检。30v4.为什么有时药敏结果与临床用药的疗效不符？为什么有时药敏结果与临床用药的疗效不符？v答：答：主要有三种可能：(1)体外药敏试验和体内药物疗效确实有差异，因为体外与体内的环境不同，有的细菌可以利用体内的一些物质生成抵抗抗生素的成分，能使抗生素失效，故存在一些体外敏感的抗生素，体内却耐药。(2)由于采样不当或污染等等原因，使检出的病原菌不正确，故药敏结果全不对。具体说明见上。(3)用药剂量不同：药敏实验的药敏浓度与实际剂量有较大差异。31 如对细菌培养及相关检验有任何疑问，如对细菌培养及相关检验有任何疑问，欢迎与微生物实验室联系、交流，并请多欢迎与微生物实验室联系、交流，并请多提宝贵意见！提宝贵意见！32
