胃癌化疗多药耐药研究进展课件.ppt

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1、医学课件ppt1胃癌化疗多药耐药研究进展 上海交通大学附属第六人民医院消化科 陈金联医学课件ppt2 胃癌是我国常见的恶性肿瘤,且中晚期癌(进展期癌)占很大的比例。化疗是其治疗的重要手段之一。由于肿瘤细胞的耐药性,化疗疗效常欠理想。20世纪60年代末,Biedler和Riehm在中国仓鼠肺细胞上成功地筛选出对放线菌素D耐药的细胞株,这种细胞株对结构与作用机制不同的多种药物,如长春新碱、柔红霉素和丝裂霉素等产生耐药性,此种现象称多药耐药性(multidrug resistance,MDR)。医学课件ppt3 MDR包括原发性或继发性耐药。原发性耐药指化疗开始时已经存在,继发性耐药指在化疗过程中产

2、生的耐药性。MDR是导致肿瘤化疗失败的原因之一,目前较为明确的机制包括:多药耐药基因mdr1及其编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,Pgp)过度表达;多药耐药相关蛋白(MDR-related protein,MRP)基因及其家族MRP26的过度表达;肺耐药相关蛋白(lung resistance-related protein,LRP)的过度表达;谷胱甘肽S转移酶(GST)的活性增加,DNA拓扑异构酶(topoisomerase,ToPo)量和质的改变。医学课件ppt4 Pgp、MRP和LRP同属细胞膜ATP结合蛋白大家族(ATP-binding cassette superfam

3、ily)的成员,是导致肿瘤细胞多药耐药的重要原因。目前已发现该基因家族有五十多个成员。医学课件ppt5一、胃癌的化疗医学课件ppt6(一)胃癌化疗药物 常用药物有5-氟尿嘧啶(5-FU)、丝裂霉素、阿霉素、表阿霉素、顺铂(Cisplatin,CDDP)和卡铂等,其化疗疗效约20%。Paclitaxel(taxol)是从太平洋红豆杉树皮分离出来,阻碍形成微小管的主要蛋白质tubulin而发挥抗癌作用;taxotere系从欧洲红杉叶来源的半合成taxol 类似物,已用于胃癌联合化疗中。喜树碱(camptothein,CPT)为中国喜树碱提出的植 物 生 物 碱,系 拓 扑 异 构 酶(topois

4、omerase)型阻断剂。其衍生物CPT-11 在临床期试验中,对进展期胃癌有效率约20%。医学课件ppt7(二)联合化疗 胃癌化疗常用的是5-FU、FT-207、UFT、氟铁龙(furtulon,5DFUR)等氟尿嘧啶类与丝裂霉素、顺铂、卡铂、阿霉素和表阿霉素(epirubicin,THP)等12种药物联合应用。CPT-11与CDDP有协同作用,临床二期试验中,疗程的第1天用CDDP 80mg/m2,第1天和第15天用CPT-11 70mg/m2,每4周重复,50%存活期为10个月。EAP(Etoposide+Adriamycin+CDDP)是强力化疗,主要适用于身体状况及一般情况较好的病人

5、,因其副作用较大。医学课件ppt8(三)新辅助化疗 胃癌确诊时多数已属晚期,单纯根治术5年生存率仅为40%左右,即使采用扩大根治术亦未能显著提高术后生存率。因为肿瘤存在亚临床转移,即使肿瘤在早期阶段亦可出现亚临床转移,单纯手术切除难以清除微小亚临床转移灶,因而导致术后转移、复发,近年对胃癌患者应用围手术期辅助化疗,包括术前辅助化疗,又称新辅助化疗。医学课件ppt9 胃癌术前辅助化疗,对于不能手术的胃癌有效,而且对手术后有肝转移和淋巴结转移者有作用。它能延长患者的生存期。此外,胃癌术前化疗可使胃癌TNM分期减低的作用,如原有肝转移的第期不能手术的胃癌患者,术前化疗后可能使手术成为可能。常用的药物

6、为5-FU、CDDP、阿霉素、表阿霉素、丝裂霉素、拓扑异物酶抑制剂,CPT-11及VP-16、MTX、Taxol、Taxotere等。一般主张联合应用化疗药物。医学课件ppt10二、胃癌多药耐药机制医学课件ppt11(一)ATP结合蛋白与胃癌耐药 (1)Pgp、MRP和LRP的基因定位及其蛋白结构 Juliano 和Ling 首先观察到具有MDR表型的中国仓鼠细胞株的细胞膜上,相对分子质量为170KD的糖蛋白过度表达,此糖蛋白能调节细胞渗透性,取名为P-糖蛋白(Pgp)。人 Pgp家族由mdr 基因家族编码,又分为Pgp(Pgp)与Pgp,分别由mdr1和mdr3基因编码。一般Pgp过度表达与

7、MDR有关。人类mdr1基因由4 500个碱基对组成,位于7号染色体q21上,其mRNA为4.1kb。医学课件ppt12 Pgp是由1280个氨基酸构成,并组成2个同源部分,每一部分包含6个跨膜功能区和1个ATP结合点。跨膜功能区具有疏水性,ATP结合点则为药物的泵出提供能量。如果2个ATP结合点的任何一个失活,则导致细胞的MDR功能丧失。Pgp和己知的许多转运蛋白,如溶血素B、白细胞毒素等的结构和功能相似。抗癌药物通过被动扩散到细胞内,然后与细胞膜糖白结合依靠ATP水解供能而主动泵出细胞外,从而导致肿瘤细胞多种耐药性。医学课件ppt13 1992年,Cole等在两种非Pgp MDR细胞株上首

8、先发现一种膜转运蛋白基因过度表达并命名为mrp,其编码蛋白质为MRP,基因定位于16p13.1。mrp与mdr1基因有14%的同源序列。mrp mRNA全长6.5kb,编码1531个氨基酸组成的分子量为190KD的蛋白质。MRP结构与Pgp相似。MRP和Pgp有19%同源性。MRP碳末端核酸结合位点上末位12个氨基酸为特征性标志,MRP和Pgp在第5、8两个氨甚酸位点上不一致。医学课件ppt14 MRP家族其他5个成员,分别命名为MRP2、MRP3、MRP4、MRP5和MRP6。MRP6与MRP基因均定位于染色体16P13,外显子均为31个。编码MRP 35的基因与MRP基因不在同一染色体上。

9、MRP基因家族分为两组,一组包括MRP1、MRP2、MRP3和MRP6,氨基酸序列同源性45%48%,特征为氮末端延伸200个氨基酸与5个胯膜片段结合;另一组包括MRP4和MRP5,与MRP1同源性34%39%,与Pgp相似,氮来源无上述延伸结构。医学课件ppt15 1993年Scheper等在肺癌细胞株上发现相对分子质量为110 000的蛋白(LRP)过度表达,并认为是导致该细胞MDR的主要原因。通过荧光原位杂交技术发现LRP基因定位于16号染色体短臂16p13.116 p 11.2,与MRP的基因位置相近。LRP基因长2.8kb。LRP基因测序表明,氨基酸序列有87.7%与褐鼠的穹窿体主蛋

10、白(major vault protein,MVP)具有同源性,因此LRP可能是人的MVP。医学课件ppt16(2)Pgp、MRP及LRP的组织分布与生理功能 Pgp在大多数正常组织中含量较少,但在肾上腺、胰腺、肝、肾、空肠和结肠中有较高水平的表达。Pgp在肝和胰腺主要分布于小胆管、小胰管腔面,肾脏为近曲小管腔面,空肠和结肠为黏膜上皮的肠腔面。Pgp在上述组织中的这种极性分布可能与胰液分泌以及体内毒物从尿液、胆汁和肠腔中排出。此外,大脑和睾丸血管内皮亦高度表达Pgp,而在其他血管中末见Pgp表达。医学课件ppt17 MRP主要分布在肺、肌肉组织、睾丸和外周血单个核细胞内,而在肝脏、大肠、十二指

11、肠、肾脏、卵巢、胎盘和脑组织等表达较低。MRP主要定位于细胞膜上,内质网、高尔基复合体亦有少量分布。MRP的底物是与谷胱甘肽的亲脂性复合物以及阴离子残基,包括白细胞三烯C4、D4、E4,以及S-(2,4-二硝基苯酚)谷胱甘肽。此外,某些两性阴离子化合物,尤其是谷胱甘肽、葡萄糖酸酯及硫酸盐等的偶合物是MRP的底物。医学课件ppt18 在剔除MRP基因(Knock-out)模型研究中发现,MRP对于谷胱甘肽结合物的转运具有重要作用。MRP2主要表达在肝细胞的毛细胆管膜上,正常肾脏小管细胞的管腔膜以及空肠、十二指肠上亦存在。突变小鼠(TR-/GY或EHBR)肝细胞小管膜上缺乏MRP2蛋白表达,则表现

12、为Dubin-Johnson综合征。MRP3主要分布在肝、结肠、小肠和肾上腺,而胰腺、肾脏和前列腺中有少量分布。MRP3在肝脏中定位于肝内胆管上皮细胞膜以及门脉周围的肝细胞膜。MRP6主要分布在肝和肾脏。目前有关MRP25的生理功能仍不甚清楚。医学课件ppt19 LRP在人体多种组织中表达,如肾上腺皮质、支气管内皮细胞、肠黏膜细胞、近曲小管、复层上皮等组织,肝胆小管末见LRP。LRP在上述组织的分泌或排泄功能中可能具有重要作用。医学课件ppt20(3)Pgp、MRP和LRP与MDR机制 Pgp是能量依赖的外排泵,能将细胞多种亲脂性药物(如长春新碱、柔红霉素、多柔比星、丝裂霉素、VP-16等)从

13、肿瘤细胞内泵出细胞外,从而导致肿瘤细胞多种耐药性。Pgp作用的底物为非结合形式的药物。Cole报道,MRP亦是能量依赖的外排泵。MRP主要转运以谷胱甘肽、葡萄糖酸酯或硫酸酯的结合物形成的抗癌药物,亦可以药物原型形式转运。医学课件ppt21 Kool等在胃癌细胞株上发现MRP2 mRNA水平增高。MRP2可致肿瘤细胞对某些化疗药物(如顺铂、长春新碱)产生耐药性。Kool发现MRP3可引起转染细胞对甲氨蝶呤、依托泊苷的耐药性。由于MRP3对GSH的亲和力小于MRP1和MRP2,所以MRP3转运某些有机分子的能力相对低,致MRP3的耐药谱比MRP1和MRP2窄。MRP4、MRP5和MRP6与MDR无

14、关。医学课件ppt22 LRP与MDR:使那些以细胞核为靶点的药物不能通过核孔进入细胞核,有些药物即使进入了核内亦被转运到胞质中;使细胞质中的药物进入运输囊泡,并通过胞吐机制排出细胞外。LRP介导以DNA为靶点的抗癌药物耐受,如顺铂、卡铂和烷化剂等,这些药物耐受性不能由Pgp和MRP介导。应用逆转录PCR和双酶标免疫组化技术发现,在MDR同一细胞株上同时存在mdr1、mrp基因及Pgp和MRP表达,说明多药耐药机制的复杂性和多样性。医学课件ppt23(4)Pgp、MRP和LRP的临床意义 Pgp、MRP和LRP蛋白及其基因表达水平与人类肿瘤原发性和获得性耐药有关。Yeh研究了Pgp在胃癌中表达

15、与化疗疗效(含柔红霉素或依托泊苷的方案)之间的关系,发现30例患者中3例Pgp阳性,其中无一例化疗有效,但27例阴性中19例化疗有效(P=0.041),说明Pgp与胃癌化疗反应相关。Ichiyshi 等研究发现胃癌中MRP表达者则对阿霉素和Etoposide等耐药。医学课件ppt24 Endo 在4种胃癌细胞株、43例胃癌组织及17例癌旁正常组织中,RT-PCR、Southern杂交及免疫组化结果表明,MRP在胃癌组织中阳性表达为53.5%,在正常胃组织中为88%,在胃癌细胞株中为75%(3/4株)。MTT法测定了标本对顺铂、柔红霉素和VP-16的敏感性。结果表明,不表达MRP的对柔红霉素、顺

16、铂和VP-16较敏感。4种胃癌细胞株中MRP表达阴性者对顺铂、柔红霉素和VP-16较敏感。最近的研究发现MRP2、MRP3与柔红霉素、顺铂、长春新碱等耐药性有关。医学课件ppt25(二)p53与胃癌耐药 P53是目前与化疗敏感关联较高的基因,不仅与凋亡和DNA修复有关,而且在恶性肿瘤中突变率最高。医学课件ppt26(1)p53与细胞周期阻滞 p53可引起G0/G1期和G2/M期阻滞:(1)由野生型p53激活片段(WAF1)基因产物p21介导G0/G1期阻滞。p21为周期素依赖性蛋白激酶抑制剂,p21水平增高,导致Rb蛋白磷酸化不足,阻止转录因子E2F活性,因此细胞周期阻滞于S期前。(2)调节增

17、殖细胞核抗原(PCNA)。p21作用于DNA聚合酶和的辅助因子PCNA,使PCNA受抑,G1和G2期阻滞。另一受p53调控并影响细胞周期动力学的基因是GADD45(growth arrest DNA damage),其通过结合PCNA抑制DNA合成,并有DNA修复的作用。近期还发现p53还有p21非依赖性G0/G1期阻滞,涉及一个“Siab”的蛋白家族。(3)p53及其效应因子p21尚参与细胞周期第二检测点G2/M过度期协调,主要发生于pRb阴性细胞,否则,p21仍以介导G1期阻滞为主。(4)p53调控的14-3-3蛋白是DNA损伤制剂诱导的强表达蛋白,其功能是导致G2期阻滞。G2/M阻滞的细

18、胞更易导致凋亡。在正常细胞和肿瘤细胞都存在药物诱导p53表达所致细胞周期阻止现象。医学课件ppt27(2)p53对细胞凋亡的调控 p53激活凋亡途径,一是p53依赖的序列特异性反式激活(SST)途径,诱导表达p53下游的凋亡相关基因,p53诱导凋亡的主要途径;另一途径是非SST性凋亡,p53与涉及DNA合成、修复及凋亡的蛋白结合成蛋白复合体调节凋亡的发生。正常情况下bax、bcl-2构成异二聚体维持细胞稳定,当p53接受刺激信号后可诱生bax使bax、bcl-2失去平衡,触发凋亡途径。p53还通过bcl-2基因p53依赖性负应答抑制bcl-2表达,bcl-2可在细胞周期的多环节上防止p53诱导

19、的凋亡和细胞周期阻滞;p53能诱导肿瘤细胞表面的CD95表达,p53的激活还促使胞浆内的死亡受体重新分布至胞膜。p53的促凋亡作用使得肿瘤细胞可能对抗癌剂更敏感;而其细胞周期阻滞作用又有益于DNA的修复,增加对DNA损伤化疗制剂的抗性,显示出p53对化疗敏感性调节的两面性。医学课件ppt28(3)p53对化疗药物敏感性的影响 Cascinu 等对局部进展期不能被切除的30例胃癌进行化疗,化疗方案为每周顺铂40mg/m2,表阿霉素35 mg/m2,5-FU 500 mg/m2,6S-Leucovorin 250 mg/m2,及谷胱甘肽1500 mg/m2共8次。以CT和内镜评价治疗效果,作者发现

20、P53阴性者化疗的反应率显著高于P53阳性者(71%与12%,P=0.004)。作者认为术前P53状态与胃癌病人化疗反应有关。P53可结合DNA断端,进行错配修复;可结合DNA的特定序列,阻止DNA复制;激活抗增殖基因的表达,使细胞停止于G1期,限制细胞的分裂。P53基因发生突变,则肿瘤细胞对抗癌药物的敏感性差。医学课件ppt29(4)p53调控肿瘤细胞药物敏感性分子机制 MDR1基因 组织蛋白酶D(CD)在卵巢癌、肺癌和白血病等肿瘤细胞系发现暴露于阿霉素后,CD mRNA水平改变与p53状态有关,普遍存在野生型p53肿瘤CD mRNA表达水平增高,而在突变p53表达水平降低,并且在CD启动子

21、区域发现2个与p53蛋白特异性结合的DNA位点,用组织蛋白酶抑制剂抑胃酶肽A1可抑制p53依赖性凋亡。医学课件ppt30(4)p53调控肿瘤细胞药物敏感性分子机制 微管相关蛋白4(MAP4)PAG608(p53激活基因608)GML基因 糖基磷脂酰肌醇锚定分子样蛋白基因,该基因启动子区域内含子包括p53结合位点,介导p53的细胞生长抑制作用,在体外参与p53诱导的细胞周期控制和DNA损伤制剂引起的凋亡发生。在NSCLC病人GML基因表达率为30%,普遍表达于免疫组化染色p53阳性患者,并与CDDP敏感性密切相关。医学课件ppt31(三)谷胱甘肽S转移酶 谷胱甘肽S转移酶(GST)是一组具有解毒

22、和结合蛋白功能的同工酶。根据其结构、生化和免疫学的特点不同,GST分为碱性(类)、中性(类)和酸性(类,大鼠为P)三大类,均为二聚体,三类之间无交叉免疫作用。前两类在人体主要分布于肝脏,后一类分布于胎盘中,亦称GST-,为胎盘型 GST。GST-与消化系肿瘤的癌变及抗癌药的耐受相关。GST-是首先从胎盘中分离纯化,肺、红细胞、胆管及胆囊上皮均含有大量的GST-。GST-活性部位具有一个 GSH的结合位点和一个亲电子物质的结合位点。GST-通过酶促和非酶促反应,保护细胞免受促癌剂、脂质和DNA氢过氧化物的毒性。已发现GST-P与胃癌等肿瘤MDR相关。医学课件ppt32(四)DNA拓朴异构酶 DN

23、A拓朴异构酶(ToPo)定位于细胞核,它的含量和活性的改变与某些肿瘤的耐药性有关。以ToPo为靶点的药物,通过冻结DNA裂开酶复合物产生DNA断裂,最终导致细胞死亡。这些药物包括依托泊苷、替尼泊苷和多柔比星等。医学课件ppt33 Son等用多柔比星浓度逐步递增法筛选人胃癌细胞株(MKN45),结果耐药细胞株(MKN/ADR)对以ToPo为靶点的药物(如依托泊苷、米托蒽醌)产生交叉耐药性,但对顺铂、卡铂、氟尿嘧啶或丝裂霉素无交叉耐药性。经测定,MKN/ADR细胞株中无Pgp表达,但ToPo酶活性较MKN45中低3倍,ToPo在MKN/ADR耐药细胞中含量较MKN45中低20倍,而ToPo无变化,

24、表明ToPo在多柔比星、依托泊苷等抗癌药物耐药中起重要作用。医学课件ppt34(五)细胞凋亡与胃癌耐药 Bcl-2为抗凋亡基因,在肿瘤细胞中Bcl-2过度表达可降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。在淋巴瘤、小细胞肺癌中,Bcl-2的高表达与化疗耐药有关,以反义Bcl-2寡核昔酸转染细胞以封闭Bcl-2的蛋白质表达后,转染细胞对化疗药物诱导的凋亡的敏感性大大增加。Bax有促凋亡作用,在耐药的白血病细胞和卵巢癌细胞中Bax的表达明显减少,慢性淋巴细胞白血病病人其Bcl-2/Bax的比值与化疗敏感性成反比。Bax 低表达的乳腺癌细胞MCF-7转入Bax基因后,显著地增加了肿瘤细胞对表阿霉素诱导的凋亡的敏

25、感性。医学课件ppt35 Ikeguchi等研究发现顺铂可诱导胃癌细胞凋亡,经顺铂处理后,野生型P53(+)、bcl-2(-)的胃癌细胞株MKN-45和MKN-74细胞凋亡指数显著高于突变型P53(+)或P53(-)、bcl-2(+)的胃癌细胞株HSC-39、MKN-28和KATO-胃癌细胞凋亡指数。结果表明,P53、bcl-2表达状态可作为胃癌病人化疗敏感性的预测指标。Takahashi等研究发现,低浓度顺铂(CDDP)不仅可以抑制胃癌细胞株STKM-1胃癌细胞增殖,而且可以诱导其凋亡,咖啡因与CDDP联合应用组胃癌细胞凋亡指数显著高于CDDP组。Inda等研究发现,术前注射5-FU可显著增

26、加胃癌细胞凋亡指数(10.46%与6.56%),而bcl-2表达可以抑制5-FU诱导的细胞凋亡。医学课件ppt36 Fas为跨膜糖蛋白受体,与肿瘤坏死因子受体(TNFR)属同一超家族。Fas抗原表达阳性的卵巢癌细胞,体外培养获得耐药性后,则Fas抗原表达下降。Hayashi等研究发现,Fas抗原在6株胃癌细胞株MKN-45、MKN-1、MKN-7、KATO-、MKN-28、MKN-74胃癌细胞中均有不同程度的表达,抗Fas单克隆抗体可诱导胃癌细胞凋亡,其诱导凋亡的敏感性与Fas抗原表达水平呈正相关。Yamamoto等发现,TGF-1诱导胃癌细胞凋亡,通过非P53途径。Yanagihara等研究

27、发现,经射线 照 射 后,胃 癌 细 胞 凋 亡 指 数 明 显 增 加。Hibasami等发现绿茶素(green tea catechins)可诱导胃癌细胞株KATO-胃癌细胞凋亡。医学课件ppt37(六)TS、TP与胃癌耐药 胸苷酸合成酶(TS)表达增强的细胞对5-FU具有耐药性。而胸苷磷酸化酶(TP)表达增强的细胞对5DFUR表现出敏感性。对胃癌化疗前的组织标本研究表明,TS mRNA或者TS蛋白的表达与5-FU化疗的敏感性有关。活检标本定量RT-PCR表明,TA/-actin 之比可以作为评价5-FU化疗敏感性的指标,TS过量表达的病例对化疗几乎无效。CPT-11对TS过量表达的病例有

28、效,可望成为二线化疗药物。医学课件ppt38(七)线粒体基因组与肿瘤耐药 (1)线粒体基因组(mtDNA)的结构 人mtDNA是一个环状16569碱基的分子,编码氧化磷酸化所必需的成分,还包括线粒体蛋白合成所需的12S、16SrRNA基因及22tRNA基因。MtDNA的密码子不同于nDNA,线粒体特异性核糖体、tRNA及其它成分参与线粒体转录。mtDNA编码的13种肽对呼吸链上4种复合物是特异性的,7种是NADH脱氢酶成分(ND1-ND6),1种参与构成CoQ-细胞色素C还原酶即细胞色素B,还有3种是细胞色素C氧化酶、亚单位成分,剩余2种构成ATP合成酶(FoF1、F1是ATP合成酶的催化蛋白

29、,Fo是ATP合成酶离子诱导部分)。mtDNA转录的一条mDNA,链上同时含有13种肽和tRNA和mRNA并可同时翻译,因此它们的表达不需其它特异性因子协调。线粒体基因编码的蛋白均参与线粒体的氧化过程。医学课件ppt39(2)mtDNA与肿瘤耐药 MtDNA缺失可增加细胞对顺铂的敏感性,这种作用可经转化正常血小板线粒体逆转,但bax、bcl-2、多药耐药基因(MDR)及多药耐药性相关蛋白(MRP)的mRNA表达无改变。mtDNA与耐药和P-gp基因表达有关。医学课件ppt40三、胃癌多药耐药性逆转医学课件ppt41Pgp或MRP相关MDR的药物逆转剂分 类逆 转 剂作 用 机 制钙通道阻滞剂维

30、拉帕米、caroverine抑制mdrl、MRP mRNA和蛋白表达钙调素抑制剂吩噻嗪、三氟吡拉嗪Pgp或MRP竟争性抑制剂奎尼丁类奎尼丁、奎啉MS-209同上咪唑噻唑类N276-12、N276-14、276-17同上利尿酸类丙磺舒同上免疫抑制剂环孢素A及类似物PSC833同上tripranol及类似物他莫昔芬、氯米芬同上合成异戊二烯样药物N-(P-甲苯基)双苯丙胺同上抗疟药氯喹同上去污剂吐温80同上单克隆抗体MRK16免疫抑制作用反义寡核苷酸mdrl-AS MRP-AS抑制Mdrl/Pgp和MRP蛋白表达医学课件ppt42 目前已应用于临床作MDR逆转治疗的药物主要包括钙通道阻滞剂和环孢素及

31、类似物PSC833等。Litchman等用PSC833联合化疗治疗难治性和复发性白血病,总有效率为44%,其中完全缓解率为32%,部分缓解率为11%。医学课件ppt43 钙拮抗剂异搏定、环孢菌素A、利血平、奎尼丁以及蒽环类等对实体瘤的效果不理想,而且毒性大,限制了其临床应用。槲皮素(quercetin)及其衍生物是植物界分布最广的黄酮类化合物,近期研究发现槲皮素是强有力的MDR逆转剂,并且由于它是天然黄酮类物质,广泛存在于水果、蔬菜及多种中草药中,毒副作用低,在肿瘤的化学治疗中具有十分良好的应用前景。槲皮素可抑制其MDR1基因的转录活性,减少P-gp的表达。槲皮素可逆转MRP介导的MDR。医学

32、课件ppt44四、多药耐药基因的检测医学课件ppt45(一)多药耐药基因的检测 体外MDR株有耐药基因扩增,但人体内肿瘤耐药细胸内常无耐药基因扩增,因此临床标本一般不检测基因扩增。检测基因扩增的方法有聚合酶链反应(PCR)和Southern blot分子杂交技术。医学课件ppt46(二)多药耐药基因mRNA表达程度检测 mRNA检测方法有Northern blot、RNA酶保护法、mRNA原位杂交及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等,其中以mRNA原位杂交及RT-PCR法常用,因其可分析少量活检组织。医学课件ppt47(三)多药耐药基因蛋白表达程度和功能的检测 检测耐药基因蛋白表达程度包括免

33、疫印迹分析(Western blot)及免疫组织化学。检测耐药基因蛋白功能主要使用流式细胞仪(FCM)。FCM可同时检测蛋白表达和分析耐药蛋白功能,并可在有MDR逆转剂(如维拉帕米、环孢素A)或无逆转剂下分别检测药物(如柔红霉素)或染料(罗丹明123)的排出,为临床应用逆转剂克服MDR提供依据。FCM不足之处在于不能定量检测,且FCM临床上尚未普及。医学课件ppt48五、讨论医学课件ppt49 MDR机制复杂多样,不同肿瘤其耐药机制可能不同,同一肿瘤对同一种药物可能有多种机制。关于MDR机制,Pgp与MDR,MRP基因家族及LRP介导的耐药机制;多药耐药基因的调控方面,Beck等研究了蛋白激酶

34、C(PKC、1、2、)与MDR1、MRP和LRP基因表达之间关系,发现乳腺癌患者PKC表达与MDR1、MRP和LRP基因表达显著相关,认为PKC可能是该类肿瘤多药耐药基因异常表达的调节因子;医学课件ppt50 MDR逆转方面,目前有效的MDR逆转剂尚不多,且副作用较多。近来有报道将抗肿瘤药物与蛋白、多肽等载体交联,或包入脂质体,可以克服药物外排,逆转MDR;而将化疗药物与单克隆抗体相连,借助抗体-抗原的特异识别机制,实现药物的主动靶向。医学课件ppt51 某些中药可能对MDR有逆转效果。耐药细胞内植入MDR1或(和)MRP反义基因则成功地克服了MDR,R N A 干 扰 技 术 成 功 地 克 服 了MDR1/P-glycoprotein MDR,显示了基因治疗对MDR逆转的应用前景;医学课件ppt52 开发和研制多药耐药基因特异性单抗,为MDR机制的研究及临床应用提供基础。医学课件ppt53

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